Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 식염수 용액에서 고정 난소에서 성숙한 난모세포로 시작합니다.
초리온과 비텔린 멤브레인을 기계적으로 제거하려면 미리 처리된 두 슬라이드의 서리가 내린 부분 사이에 난미를 놓습니다. 상단 슬라이드를 직선 앞뒤로 움직여 난모세포가 굴러가는 마찰을 만듭니다.
이제 상단 슬라이드를 약간 각도로 이동하여 난소를 다른 방향으로 굴립니다. 원형 움직임을 피하고, 상단 슬라이드가 아래쪽 슬라이드에 수직으로 이동할 때까지 짧은 단위로 이 각도를 증가시킵니다.
정향이없는 난모세포는 길고 얇게 나타나며, 비텔린 멤브레인이없는 사람들은 뾰족한 끝을 갖게됩니다.
이 프로토콜에서는, 성숙한 Drosophila oocytes에서 초리온 및 vitelline 막을 제거할 것입니다.
- 후기 단계 의 난모를 분리하려면 먼저 PBSBTx 1 밀리리터를 얕은 해부 접시에 추가하십시오.
후기 단계 난모세포가 충분히 분리되면 모든 조직을 500 마이크로리터 마이크로퍼지 튜브로 이송합니다.
oocyte 롤링을 준비하기 위해 PBSBTx 200 마이크로 리터로 깊은 요리를 미리 적시십시오.
세 개의 서리가 내린 유리 슬라이드를 가져와 서 미끄럼을 세 개 옆으로 놓습니다. 다음으로, 슬라이드의 서리가 내린 유리 영역을 1개와 2개를 함께 문지르십시오. PBSBTx의 50 마이크로리터를 한 슬라이드에 추가하고 다른 슬라이드와 함께이 지역을 문지르면 슬라이드의 서리가 내린 영역을 코팅합니다.
난모를 굴려, 먼저, PBSBTx에서 P200 파이펫 팁을 미리 적재하고 위아래로 파이프를 통해 마이크로푸지 튜브에 난귀체를 분산.
액체의 표면 장력이 두 개의 서리가 내린 유리 영역 사이에 씰을 생성 할 때까지 천천히 낮은 슬라이드 두. 서리가 내린 영역을 커버하기에 충분한 액체가 있어야하지만 아무도 꺼져서는 안됩니다.
현미경으로 움직이기 쉬운 움직임과 진행을 위해 수행합니다. 수평 방향에서 몇 번의 움직임 후, 약간 움직임각도를 변경합니다.
- 난모를 굴릴 때 압연 방향이 항상 직선에 있고 원형 동작이 없는지 확인합니다.
- 용액이 약간 흐려질 때까지 약 7~10배 롤링을 반복합니다.
상단 슬라이드 2개를 부드럽게 들어 올려 모서리 중 하나를 아래쪽 슬라이드의 서리가 내린 영역 의 중심으로 드래그하여 압연 된 영역의 중앙에 압연 난귀가 축적되도록합니다.
깨끗한 슬라이드 는 초순수물로 1개와 2개 씩 미끄러지는다. 일회용 물닦이를 통해 건조하십시오.
압연 후 이물질을 제거하려면 15밀리리터 원모튜브에 1밀리리터 PBSBTx를 추가합니다.
원식 튜브를 어두운 배경에 대고 가라앉는 불투명 한 난모구를 볼 수 있습니다. 난모세포가 바닥에 정착하게 한 후 P1000을 사용하여 이물질을 포함하는 용액의 상위 2 밀리리터를 제거하고 폐기하십시오.
총 3발의 이물질 제거단계를 반복한 후 PBSBTx 코팅 P1000 파이펫 팁을 사용하여 오사이클을 원래 500 마이크로리터 마이크로퓨지 튜브로 다시 전송합니다.
