Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- בזבוב הבוגר, שרירי הטיסה העקיפים, או IFMs, הם השרירים הגדולים ביותר של הזבוב המשתרעים על פני בית החזה כולו.
ראשית, שרירי האורך הגביים, או DLMs, ממוקמים לאורך המישור החציוני של בית החזה מעל המעיים ומשתרעים על פני השני, שרירי הגחון הגבי, או DVMs, משתרעים מלמעלה עד לתחתית בית החזה ומאגפים על ידי TDT, או שריר קפיצה.
על ידי כ 48 שעות לאחר היווצרות puparium, או APF, התבגרות IFMs ניתן לזהות חזותית עם מיקרוסקופ ניתוח פשוט. בפרוטוקול לדוגמה, אנו אוספים IFMs מן הגומות מעל גיל 48 שעות APF לניתוח תפוקה גבוהה.
- לניתוח IFM לאחר 48 שעות APF, השתמש במברשת צבע רטובה קלות כדי להעביר את הגומות המבויימות לרצועה של סרט דביק דו-צדדי המותקן על שקופית מיקרוסקופ. כוון את הגורים בשורה, בצד הגחוני כלפי מטה ובקצה התחתון לכיוון תחתית המגלשה. כאשר כל הגומות הונחו, השתמש במלקחיים כדי להקניט ולפתוח את מארז הגורים הראשון מעל הספירקלים לפני ההחלקה, ולהחליק בעדינות זוג מלקחיים לכיוון האחורי, חותך את מארז הגורים כשהכפות נעות.
שחררו את הגלם מהמארז שנפתח, והעבירו מיד את הגלם לטיפת PBS במגלשת מיקרוסקופ שנייה. כאשר כל הגלמים משוחררים, השתמשו במספריים עדינים כדי לחתוך את הבטן של הגלם הרחק מבית החזה ולדחוף את הבטן לערימה נפרדת. כאשר כל בית החזה הוסר, השתמש בפיסת נייר טישו כדי להסיר את רוב PBS ואת ערימת הבטן.
הוסף טיפה של PBS צונן טרי לבית החזה הנותרים לפני השימוש במספריים כדי לחתוך מהראש לאורך ציר הגוף האורך בתנועה אחת לחלק את בית החזה לשניים. כאשר כל הגומות נותחו, השתמש במספר חמש מלקחיים כדי לבחור אחד hemisections בעדינות להכניס את קצות אחד מלקחיים מעל ומתחת לאמצע IFMs.
מחזיק את הזוג הראשון של מלקחיים עדיין, להשתמש במספריים בסדר לחתוך קצה אחד של IFM הרחק cuticle וגידים לפני סיבוב הגומה 180 מעלות כדי לאפשר את הקצה השני של IFM להיות מנותק מן הקוטיקל והגידים.
לאחר מכן, לדחוף את הפגר לצד הנגדי של השקופית ולנתח את שאר IFMs באותו אופן. כאשר כל ה- IFMs נאספו, השתמש במלקחיים מספר חמש כדי להסיר כל שריר קפיצה או שברי קוטיקל שאולי מצאו את דרכם לתוך הדגימות. לאחר מכן, השתמש במתח מים כדי ללכוד בעדינות את ה- IFMs המנותחים בין זוג מלקחיים ולמקם את ה- IFMs בצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מיליליטר המכיל 250 מיקרוליטרים של PBS מקורר.
