دروسوفيلا مراقبة النشاط (DAM): طريقة لقياس النشاط الحركي في الذباب

- يحمل مرصد نشاط Drosophila ، أو DAM ، أنابيب نشاط مركزة مجهزة بطعام ذبابة في نهاية واحدة وأقرب نفاذية للهواء في الطرف الآخر.

ضع السد في بيئة خاضعة للرقابة مثل حاضنة ذات درجة حرارة ورطوبة ودورة ضوء محددة.

لتسجيل النشاط الحركي، قم بتوصيل الجهاز بنظام كمبيوتر يخزن القراءات من كاشفات السد.

كما يطير يمشي ذهابا وإيابا داخل الأنبوب، فإنه يعبر شعاع الأشعة تحت الحمراء.

في البروتوكول التالي، سوف نستخدم نظام DAM لدراسة الإيقاعات الإيقاعية في الذكور البالغين Drosophila.

- قبل تحميل الذباب في أنابيب النشاط، قم بتشغيل الحاضنات التي سيتم استخدامها لإيواء مراقبي النشاط. ضبط درجة الحرارة باستخدام ضوابط الحاضنة وضبط نظام الضوء / الظلام باستخدام وحدة تحكم ضوء نظام DAM أو نظام التحكم في الضوء الخاص بالحاضنة، وفقا للتصميم التجريبي المطلوب.

بعد ذلك ، تخدير الذباب بثاني أكسيد الكربون.

حافظ على الأنبوب الموضوع على جانبه حتى تستيقظ الذبابة لمنع الذبابة من التعلق بالطعام. أدخل الأنابيب في شاشات النشاط.

وأخيرا، وضع مراقبي النشاط في الحاضنات وربطها بنظام جمع البيانات عبر أسلاك الهاتف. تحقق، باستخدام برنامج جمع نظام DAM، من أن جميع الشاشات يتم توصيلها بشكل صحيح، وأنه يتم جمع البيانات من كل منها.

الآن بعد أن تم تحميل الذباب في أنابيب النشاط ونظام مراقبة النشاط الحركي جاهز ، يمكن الآن تسجيل البيانات.

لدراسة الإيقاعات circadian نسبة إلى هذا البروتوكول، يتم تعريف الوقت عندما تضيء الأضواء في الحاضنة كما وقت روح العصر 0 وجميع الأوقات الأخرى هي نسبة إلى تلك القيمة.

يتم قياس إيقاعات النشاط الحركي الحر في ظل ظروف مظلمة ودرجة حرارة ثابتة بعد فترة التدريب.

بشكل عام ، من الضروري الحصول على عينة من حجم 16 ذبابة على الأقل للحصول على فترات تشغيل حر موثوق بها لنوع جيني معين.

تتم معالجة البيانات الثنائية الخام باستخدام DAM Filescan102X، ويتم تلخيصها في صناديق 15 و 30 دقيقة عند تحليل المعلمات circadian، أو صناديق 1 إلى 5 دقائق عند تحليل معلمات النوم / الراحة.