心脏解剖：观察斑马鱼心脏发育的方法

- 斑马鱼心脏包括四个腔室，鼻窦静脉，中庭，心室， 和球状动脉病。 它位于手术室和胸围之间的腹腔侧，骨骼系统的一部分，支持胸鳍。 要解剖心脏，将安乐死固定鱼放入含有磷酸盐缓冲盐水的培养皿中，以保持鱼组织的恒定pH值，并定向其腹侧向上。

用钳子在眼睛和刺之间抱住鱼头。使用微切刀，穿过刺，穿过前腹部，然后垂直连接前两个切口。 用锋利的钳子，取出胸鳍和底层胸围，露出银腹膜，即覆盖心脏的膜。 用钳子去除腹膜，使心脏可见。现在切开与球状动脉瘤相连的动脉。

接下来，将钳子放在中庭下，将心脏从体腔中挖出来。用钳子抓住心脏，然后用另一个钳子去除心脏外存在的不需要的组织。在下列协议中，我们将解剖不同大小的鱼的心脏，以观察其在鱼类生命期内的发展。

-给每条鱼分配一个数字字母组合， 以便跟踪单个鱼和由此被解剖的心脏， 以便以后分析。 包括所有测量，放入电子表格，并基于这些标签进行组织。解剖前，使用指定的跟踪编号标记 PCR 管条，并用 PBT或其他适合进一步分析的解决方案填充管。将鱼的腹腔侧定位于培养皿中，同时用钳子稳定身体，将头部夹在眼睛和刺之间。对于标准长度小于12 毫米的鱼，使用锋利的钳子或微针针脚，从身体中取出胸肌和鳍，露出心脏。

- 解剖过程中钳子的恒定运动可导致 PBT 中的电流移动鱼。这对较小的鱼来说尤其成问题。这需要使用微内皮去除胸肌和鳍并打开体腔。

- 使用钳子从中庭下轻轻地将心脏从腔中挖出来。如果鱼含有荧光心脏标记，使用荧光范围进行解剖，并验证通过荧光去除心脏。一旦心脏从腔中取出，使用钳子来支撑心脏和微内皮，从心脏外部去除额外的非心肌组织和史诗衬里。

对于标准长度超过 12 毫米的鱼，使用弹簧处理的微切刀，做三个切口。首先，在刺中横切。 第二，在前腹部进行另一次横切。 第三，在心室侧做一个下垂切口，连接两个横向切口。 使用锋利的钳子，从身体中取出胸肌和鳍，打开体腔，露出腹腔的银色组织。

取出这个腹膜组织。心脏就会变得可见。用微剪刀切开与比心脏优越的球状动脉瘤相连的动脉。 一旦这条动脉被切断，将钳子的尖端放在中庭下，然后用钳子把心脏从腔里挖出来。 如果心脏有额外的组织，那很好，因为以后可以切除。或者，在一些鱼中，可以通过轻轻地把球体拉出来去除心脏，心脏的其余部分也会随之而来。

- 如果使用替代技术， 小心中庭的位置， 因为它很容易损坏。如果心脏有额外的组织， 这很好， 可以清除后。

- 一旦心脏从腔中取出，使用两个钳子来保持心脏，并去除额外的组织或一对钳子来保持心脏和微内皮去除额外的非心肌组织。