Dissection cardiaque : une méthode pour observer le développement cardiaque du poisson zèbre

- Un cœur de poisson zèbre comprend quatre chambres, sinus venosus, atrium, ventricule et artériose bulbeuse. Il est situé antérieurement sur le côté ventral entre l’operculum et la ceinture pectorale, une partie du système squelettique qui soutient la nageoire pectorale. Pour disséquer le cœur, placez un poisson fixe euthanasié dans une boîte de Petri contenant de la solution saline tamponnée de phosphate pour maintenir un pH constant des tissus de poisson et l’orienter vers le haut.

Tenez la tête de poisson avec des forceps entre les yeux et les branchies. À l’aide d’un microscisseur, couper les branchies, traverser le ventre antérieur, puis verticalement, relier les deux premières incisions. À l’aide d’une pince à épiler tranchante, retirer la nageoire pectorale et la ceinture pectorale sous-jacente pour révéler le péricarde argenté, la membrane qui recouvre le cœur. Retirez le péricarde avec des forceps pour rendre visible le cœur. Maintenant, coupez l’artère reliée à l’artériose bulbeuse.

Ensuite, placez des forceps sous l’atrium et sortez le cœur de la cavité corporelle. Tenez le cœur avec les forceps, et utilisez un autre forceps pour enlever les tissus indésirables présents à l’extérieur du cœur. Dans le protocole suivant, nous disséquerons le cœur de poissons de différentes tailles pour l’image de son développement au cours de la durée de vie du poisson.

- Attribuez à chaque poisson une combinaison de lettres-nombres pour permettre à un poisson individuel et au cœur disséqué qui en résulte d’être suivis pour analyse ultérieure. Entrez toutes les données, y compris toutes les mesures, dans une feuille de calcul et organisez-les en fonction de ces étiquettes. Avant la dissection, étiquetez les bandes de tubes PCR avec le numéro de suivi assigné et remplissez les tubes avec PBT ou toute autre solution appropriée pour une analyse plus approfondie. Orientez le côté ventral du poisson vers le haut dans une boîte de Pétri tout en stabilisant le corps avec des forceps, en tenant la tête entre les yeux et les branchies. Pour les poissons de moins de 12 millimètres de longueur standard, à l’aide de forceps pointus ou d’un microneedle. un porte-goupille, enlever les muscles pectoraux et les nageoires du corps pour révéler le cœur.

- Le mouvement constant des forceps pendant la dissection peut provoquer des courants dans le PBT qui déplacent le poisson. Ceci est particulièrement problématique pour les petits poissons. Ceci, le microneedle doit être utilisé pour enlever les muscles pectoraux et la nageoire et ouvrir la cavité du corps.

- Utilisez les forceps pour sortir doucement le cœur de la cavité sous l’atrium. Si le poisson contient un marqueur cardiaque fluorescent, utilisez une lunette fluorescente pour la dissection et vérifiez l’ablation du cœur par fluorescence. Une fois que le cœur est retiré de la cavité, utilisez les forceps pour tenir le cœur et un microneedle pour enlever le tissu noncardiaque supplémentaire et la muqueuse épicardique de l’extérieur du cœur.

Pour les poissons de plus de 12 millimètres de longueur standard, à l’aide de microscisseurs à ressort, faire trois incisions. Premièrement, faire une coupe transversale à travers les branchies. Deuxièmement, faire une autre coupe transversale au ventre antérieur. Et troisièmement, faire une coupe sagittale sur le côté ventral reliant les deux coupes transversales. À l’aide de forceps pointus, enlever les muscles pectoraux et les nageoires du corps pour ouvrir la cavité du corps et révéler le tissu argenté du péricarde.

Enlevez ce tissu péricardique. Et le cœur deviendra visible. Utilisez les micro ciseaux pour couper l’artère reliée à l’artériose bulbeuse située supérieure au cœur. Une fois cette artère coupée, placez les extrémités des forceps sous l’atrium et utilisez les forceps pour sortir le cœur de la cavité. S’il y a un tissu supplémentaire qui vient avec le cœur, c’est très bien, car il peut être enlevé plus tard. Alternativement, chez certains poissons, il est possible d’enlever le cœur en tirant doucement le bulbeux, et le reste du cœur suivra.

- Faites attention à l’emplacement de l’atrium si vous utilisez la technique alternative, car il peut facilement être endommagé. S’il ya des tissus supplémentaires qui vient avec le cœur, c’est très bien et peut être effacé après.

- Une fois que le cœur est retiré de la cavité, utilisez les deux forceps pour tenir le cœur et enlever le tissu supplémentaire ou une paire de forceps pour tenir le cœur et un microneedle pour enlever le tissu noncardiaque supplémentaire.