Herzdissektion: Eine Methode, um Zebrafisch Herzentwicklung zu beobachten

- Ein Zebrafischherz besteht aus vier Kammern, sinus venosus, Atrium, Ventrikel und bauchige Arteriose. Es befindet sich vordergrünig auf der ventralen Seite zwischen dem Operculum und dem Brustgürtel, einem Teil des Skelettsystems, der die Brustflosse unterstützt. Um das Herz zu sezieren, legen Sie einen eingeschläferten festen Fisch in eine Petrischale, die Phosphat-gepufferte Saline enthält, um einen konstanten pH-Wert des Fischgewebes aufrechtzuerhalten.

Halten Sie den Fischkopf mit Zange zwischen den Augen und Kiemen. Mit einer Mikroschere, schneiden Sie über die Kiemen, über den vorderen Bauch, und dann vertikal, verbinden die ersten beiden Schnitte. Mit einer scharfen Pinzette, entfernen Sie die Brustflosse und die darunter liegende Brustgürtel, um das silberne Perikard zu offenbaren, die Membran, die das Herz bedeckt. Entfernen Sie das Perikard mit Zangen, um das Herz sichtbar zu machen.

Als nächstes legen Sie Zangen unter das Atrium und schaufeln Sie das Herz aus der Körperhöhle. Halten Sie das Herz mit der Zange, und verwenden Sie eine andere Zange, um unerwünschtes Gewebe außerhalb des Herzens zu entfernen. Im folgenden Protokoll werden wir das Herz von verschiedenen Fischen sezieren, um seine Entwicklung über die Lebensdauer des Fisches abzubilden.

- Weisen Sie jedem Fisch eine Zahlen-Buchstaben-Kombination zu, damit ein einzelner Fisch und das resultierende sezierte Herz für eine spätere Analyse verfolgt werden können. Geben Sie alle Daten, einschließlich aller Messungen, in eine Kalkulationstabelle ein und organisieren Sie sie auf Basis dieser Etiketten. Beschriften Sie vor der Zerlegung PCR-Rohrstreifen mit zugewiesener Tracking-Nummer und füllen Sie Rohre mit PBT oder einer anderen für die weitere Analyse geeigneten Lösung. Richten Sie die Fisch-Ventralseite in einer Petrischale nach oben und stabilisieren Sie den Körper mit Zangen, halten Sie den Kopf zwischen den Augen und Kiemen. Für Fische, die kürzer als 12 Millimeter in Standardlänge sind, einen Pinholder, entfernen Sie die Brustmuskeln und Flossen aus dem Körper, um das Herz zu offenbaren.

- Die konstante Bewegung der Zange während der Zerlegung kann Ströme im PBT verursachen, die den Fisch bewegen. Dies ist besonders problematisch für kleinere Fische. Dies muss die Mikronadel verwendet werden, um Brustmuskeln und Flossen zu entfernen und die Körperhöhle zu öffnen.

- Verwenden Sie die Zange, um das Herz sanft aus der Höhle unter dem Atrium zu schöpfen. Wenn der Fisch einen fluoreszierenden Herzmarker enthält, verwenden Sie einen fluoreszierenden Bereich für die Zerlegung und überprüfen Sie die Entfernung des Herzens durch Fluoreszenz. Sobald das Herz aus der Höhle entfernt wurde, verwenden Sie die Zange, um das Herz und eine Mikronadel zu halten, um zusätzliches nichtherziges Gewebe und die Epikardinatidiale von außen zu entfernen.

Für Fische mit einer Länge von mehr als 12 Millimetern in Standardlänge Mit federbehandelten Mikroscheren, machen Sie drei Einschnitte. Erstens, machen Sie einen Querschnitt durch die Kiemen. Zweitens, machen Sie einen weiteren Querschnitt am vorderen Bauch. Und drittens, machen Sie einen sagittalen Schnitt auf der ventralen Seite verbindet beide Querschnitte. Mit scharfen Zangen, entfernen Sie die Brustmuskeln und Flossen aus dem Körper, um den Körper hohl zu öffnen und das silbrige Gewebe des Pericardiums zu offenbaren.

Entfernen Sie dieses Perikardgewebe. Und das Herz wird sichtbar. Verwenden Sie die Mikroschere, um die Arterie zu schneiden, die mit der bauchigen Arteriose verbunden ist, die dem Herzen überlegen ist. Sobald diese Arterie geschnitten ist, legen Sie die Spitzen der Zange unter das Atrium und verwenden Sie die Zange, um das Herz aus der Höhle zu schöpfen. Wenn es zusätzliches Gewebe, das mit dem Herzen kommt, das ist in Ordnung, wie es später entfernt werden kann. Alternativ, in einigen Fischen, ist es möglich, das Herz zu entfernen, indem Sie sanft die Zwiebel herausziehen, und der Rest des Herzens wird folgen.

- Seien Sie vorsichtig mit der Lage des Atriums, wenn Sie die alternative Technik verwenden, da es leicht beschädigt werden kann. Wenn es zusätzliches Gewebe gibt, das mit dem Herzen kommt, ist dies in Ordnung und kann nach geräumt werden.

- Sobald das Herz aus der Höhle entfernt wird, verwenden Sie die beiden Zangen, um das Herz zu halten und entfernen Sie das zusätzliche Gewebe oder ein Paar Zange, um das Herz und eine Mikronadel zu halten, um zusätzliches nicht-kardiales Gewebe zu entfernen.