Hjerte disseksjon: En metode for å observere sebrafisk hjerteutvikling

- Et sebrafiskhjerte består av fire kamre, sinus venosus, atrium, ventrikel og bulbous arteriosis. Den ligger fremre på ventral side mellom operculum og brystbeltet, en del av skjelettsystemet som støtter brystfinnen. For å dissekere hjertet, plasser en euthanized fast fisk i en Petri-tallerken som inneholder fosfatbufret saltvann for å opprettholde en konstant pH av fiskevevet og orientere den ventral side opp.

Hold fiskehodet med tang mellom øynene og gjellene. Bruk en mikroscissor, kutt over gjellene, over den fremre magen, og deretter vertikalt, forbinde de to første snittene. Med en skarp pinsett, fjern brystfinnen og den underliggende brystbeltet for å avsløre sølvperikardiumet, membranen som dekker hjertet. Fjern perikardiumet med tang for å gjøre hjertet synlig.

Deretter plasserer du tang under atriet og øser hjertet ut av kroppshulen. Hold hjertet med tangene, og bruk en annen tang for å fjerne uønsket vev som er tilstede utenfor hjertet. I følgende protokoll vil vi dissekere hjertet fra fisk av forskjellig størrelse for å avbilde utviklingen over fiskens levetid.

- Gi hver fisk en kombinasjon av nummereringsbokstaven slik at en individuell fisk og det resulterende dissekerte hjertet kan spores for senere analyse. Skriv inn alle data, inkludert alle målinger, i et regneark og organiser basert på disse etikettene. Før disseksjon, merk PCR-rørstrimler med tildelt sporingsnummer og fyll rør med PBT eller annen løsning som passer for videre analyse. Orienter fiskeventilsiden opp i en Petri-tallerken mens du stabiliserer kroppen med tang, holder hodet mellom øynene og gjellene. en pinholder, fjern brystmuskulaturen og finner fra kroppen for å avsløre hjertet.

- Den konstante bevegelsen av tang under disseksjon kan føre til strømmer i PBT som beveger fisken. Dette er spesielt problematisk for mindre fisk. Dette, mikroneedle må brukes til å fjerne brystmuskler og fin og åpne kroppshulen.

- Bruk tangene til forsiktig å øse hjertet ut av hulrommet fra under atriet. Hvis fisken inneholder en fluorescerende hjertemarkør, bruk et fluorescerende omfang for disseksjon og bekreft fjerning av hjertet ved fluorescens. Når hjertet er fjernet fra hulrommet, bruk tangene til å holde hjertet og en mikroneedle for å fjerne ekstra noncardiac vev og epikardiial fôr fra utsiden av hjertet.

For fisk lengre enn 12 millimeter i standard lengde, bruk fjærhåndtert mikroscissors, gjør tre snitt. Først gjør du et tverrsnitt kuttet gjennom gjellene. For det andre, gjør et nytt tverrsnitt i den fremre magen. Og for det tredje, gjør et sagittalt kutt på ventralsiden som forbinder begge tverrgående kutt. Bruk skarpe tang, fjern brystmuskulaturen og finner fra kroppen for å åpne kroppshulen og avsløre det sølvfargede vevet i perikardiet.

Fjern dette perikardvevet. Og hjertet blir synlig. Bruk mikrosaksen til å kutte arterien som er koblet til den pæreformede arteriosen som ligger overlegen hjertet. Når denne arterien er kuttet, plasser spissene på tangene under atriet og bruk tangene til å øse hjertet ut av hulrommet. Hvis det er ekstra vev som følger med hjertet, er det greit, da det kan fjernes senere. Alternativt, i noen fisk, er det mulig å fjerne hjertet ved å forsiktig trekke pæren ut, og resten av hjertet vil følge.

- Vær forsiktig med atriets plassering hvis du bruker den alternative teknikken, da det lett kan bli skadet. Hvis det er ekstra vev som følger med hjertet, er dette greit og kan ryddes etter.

- Når hjertet er fjernet fra hulrommet, bruk de to tangene til å holde hjertet og fjern det ekstra vevet eller ett par tang for å holde hjertet og en mikroneedle for å fjerne ekstra noncardiac vev.