Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Un cuore di zebrafish comprende quattro camere, sinus venosus, atrio, ventricolare e arteriosi bulbosa. Si trova anterioremente sul lato ventrale tra l'opercolo e la cintura pettorale, una parte del sistema scheletrico che sostiene la pinna pettorale. Per sezionare il cuore, posizionare un pesce fisso eutanasiato in una piastra di Petri contenente salina tamponata da fosfati per mantenere un pH costante dei tessuti ittici e orientare il lato ventrale verso l'alto.
Tenere la testa del pesce con le forcep tra gli occhi e le branchie. Utilizzando un microscissore, tagliare attraverso le branchie, attraverso la pancia anteriore, e poi verticalmente, collegando le prime due incisioni. Con una pinzetta affilata, rimuovere la pinna pettorale e la cintura pettorale sottostante per rivelare il pericardio d'argento, la membrana che copre il cuore. Rimuovere il pericardio con pinze per rendere visibile il cuore. Ora tagliare l'arteria collegata all'arteriosi bulbosa.
Quindi, posizionare le forcep sotto l'atrio e raccogliere il cuore dalla cavità corporea. Tenere il cuore con le forcep e utilizzare altre forcelle per rimuovere i tessuti indesiderati presenti al di fuori del cuore. Nel seguente protocollo, sezioneremo il cuore da pesci di dimensioni diverse per immaginerne lo sviluppo sulla durata della vita del pesce.
- Assegnare a ciascun pesce una combinazione numero-lettera per consentire di rintracciare un singolo pesce e il cuore sezionato risultante per un'analisi successiva. Immettere tutti i dati, incluse tutte le misurazioni, in un foglio di calcolo e organizzarli in base a queste etichette. Prima della dissezione, etichettare le strisce di tubi PCR con il numero di tracciamento assegnato e riempire i tubi con PBT o altra soluzione appropriata per ulteriori analisi. Orientare il lato ventrale del pesce verso l&<3>;alto in una piastra di Petri mentre si stabilizza il corpo con le forcep, tenendo la testa tra gli occhi e le branchie. Per pesci di lunghezza inferiore a 12 millimetri, utilizzando forcep affilate o un microneedle in un pinholder, rimuovere i muscoli pettorali e le pinne dal corpo per rivelare il cuore.
- Il movimento costante delle forcep durante la dissezione può causare correnti nel PBT che muovono il pesce. Questo è particolarmente problematico per i pesci più piccoli. Questo, il microneedle deve essere utilizzato per rimuovere i muscoli pettorali e la pinna e aprire la cavità corporea.
- Utilizzare le forcep per raccogliere delicatamente il cuore dalla cavità da sotto l'atrio. Se il pesce contiene un marcatore cardiaco fluorescente, utilizzare un mirino fluorescente per la dissezione e verificare la rimozione del cuore per fluorescenza. Una volta rimosso il cuore dalla cavità, utilizzare i punti di forza per tenere il cuore e un microneedle per rimuovere il tessuto extra non cardiaco e il rivestimento epicardiale dall'esterno del cuore.
Per pesci di lunghezza superiore a 12 millimetri, utilizzando microscissori a molla, fate tre incisioni. In primo luogo, fate un taglio trasversale attraverso le branchie. In secondo luogo, fate un altro taglio trasversale alla pancia anteriore. E terzo, fate un taglio sagittale sul lato ventrale collegando entrambi i tagli trasversali. Utilizzando forcelle affilate, rimuovete i muscoli pettorali e le pinne dal corpo per aprire la cavità corporea e rivelare il tessuto argenteo del pericardio.
Rimuovere questo tessuto pericardico. E il cuore diventerà visibile. Utilizzare le micro forbici per tagliare l'arteria collegata all'arteriosi bulbosa situata superiore al cuore. Una volta tagliata questa arteria, posizionare le punte delle punte sotto l'atrio e utilizzare le forcep per raccogliere il cuore dalla cavità. Se c'è tessuto extra che viene fornito con il cuore, va bene, in quanto può essere rimosso in seguito. In alternativa, in alcuni pesci, è possibile rimuovere il cuore tirando delicatamente fuori il bulboso e seguirà il resto del cuore.
- Prestare attenzione alla posizione dell'atrio se si utilizza la tecnica alternativa, in quanto può essere facilmente danneggiata. Se c'è tessuto extra che viene fornito con il cuore, questo va bene e può essere cancellato dopo.
- Una volta rimosso il cuore dalla cavità, utilizzare le due forcep per tenere il cuore e rimuovere il tessuto extra o un paio di forcep per tenere il cuore e un microneedle per rimuovere il tessuto extra non cardiaco.
