机械分离：从组织中获取活细胞的方法

首先，称重组织片段并测量其长度、广度和高度。将组织放在带有培养介质的文化盘中，并用手术刀将其切成小块。使用巴斯德移液器将所有内容传输到 C 管进行均质化。

将管子置于机械分离器中，并根据需要运行周期。该仪器使用机械力从组织样本中提取可行的单细胞，同时保持细胞完整性，包括表面蛋白质。通过固定在离心机管上的细胞过滤器降解同质化。

将剩余的组织重新激素化，并通过细胞过滤器将同质化菌株放入管中。离心机的同质化和去除超自然。现在，在培养介质中恢复细胞颗粒，并将少量细胞悬浮转移到含有试锅蓝色污渍的管子上。

染色后，将细胞转移到血细胞仪滑梯上。计算透明的可行细胞。死细胞占了污渍，因为他们的细胞膜没有完好无损。在下列协议中，我们将对新鲜人体组织进行非酶分离，用于对CD45+细胞进行定量和定性分析。

- 首先称量组织样本，然后测量组织的长度、宽度和高度。然后将组织片段转移到含有 1 毫米适当化学定义、无血清、造血细胞介质的小培养皿中，然后使用无菌手术刀将样品切成 1 到 2 平方毫米的小块。接下来，将菜肴内容转移到机械分离器 C 管中，用 2 毫升的介质冲洗盘子和手术刀。

将洗涤剂添加到 C 管中，然后连续两次运行 8.01 机械分离器程序，将组织片段轻轻地均质化为单个细胞悬架。第二个周期后，通过40微米细胞过滤器将同质化转化为50毫米的圆锥管。然后使用洗制培养皿时相同的巴斯德移液器将 C 管中剩余的任何液体转移到细胞过滤器中。

接下来，使用 1 毫升微皮将过滤后的液体转移到 15 毫升圆锥管中，并用额外的 3 毫升介质冲洗 C 管。将这种洗涤通过细胞过滤器转移到50毫升管。然后用干净的 1 毫升尖轻轻移动过滤器周围的未激素组织，将组织中的最大剩余液体挤压到 50 毫升管中。现在，将细胞过滤器倒置在原始 C 管的顶部，再用 3 毫升的中等冲洗滤网，使未激素化的组织重新回到 C 管中。

如刚刚证明的那样，再将组织重新生成两个周期，然后通过细胞过滤器再次倒入第二个均质。用另外3毫升的中等冲洗C管。然后通过过滤器过滤超自然物，并挤压组织中的残余液体，正如刚刚证明的那样。此时，15毫升管中应存在约2.5毫升的单细胞悬浮量，50毫升管中应观察到约9毫升。

为了将组织超母细胞与细胞分离，首先在室温下，在600克的温度下，先将两管同质物分离15分钟。将超自然从 15 毫升管中分离到 1.5 毫升管中，将其放置在 4 摄氏度，然后从 50 毫升管中丢弃超纳特。然后轻轻敲击硬表面上的每根管子，分解每个细胞颗粒。

用500微升的介质将松散的细胞颗粒在50毫升管中补充，并将细胞转移到15毫升管中，以补充第二个颗粒。然后用另外500微升的中等冲洗50毫升管，并将洗涤剂转移到15毫升管中，以最大限度地恢复细胞。在通过尝试泛蓝色排除计算可行细胞的数量后，颗粒细胞悬浮。

最后，剥离保留的组织超自然。然后小心地将超细剂转移到至少一个干净的管子上，而不接触或干扰颗粒，并将其储存在负80摄氏度，以便将来进行下游分析。