A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 01:13Seeding of U2OS-based Cyclin B-SNAP Reporter Cells
- 03:38Staining of Reporter Cells with SNAP Substrate
- 05:34Measurement of Fluorescence Intensity
- 07:07Analysis of Proteolytic Profiles using Scan^R
- 09:15Results: Cyclin B Kinetics during Mitosis
- 10:31Conclusion
Metafas att anafas övergång utlöses genom anafas-befrämjande komplex (APC / C)-beroende ubikitinering och påföljande destruktion av cyklin B. Här har vi etablerat ett system som, efter puls-chase märkning, medger övervakning cyklin B proteolys i hela cellpopulationer och underlättar detekteringen av störningar av den mitotiska kontrollpunkten.
Tags
ProteolysisCyclin BSingle Cell LevelWhole Cell PopulationsChromosome DistributionGenetic StabilitySpindle Assembly Checkpoint (SAC)Mitotic Surveillance MechanismAPC/C Subunit Cdc20SecurinMitotic ExitChromosome SeparationImproper Chromosomal AttachmentSAC SignalingAPC/CCdc20MicrotubulesSpindle DisruptionArtificial Effects
