Här presenterar vi ett detaljerat protokoll för att skilja mänskliga pluripotenta stamceller (hPSCs) i bukspottkörteln/tolvfingertarmen homeobox protein 1+ (PDX1+) celler för generering av bukspottskörteln härstamningar baserat på icke-koloni typ enskiktslager tillväxten av dissocierade enstaka celler. Denna metod är lämplig för att producera homogen hPSC-derived celler, genmanipulation och screening.