Summary
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Här presenterar vi ett protokoll för att inducera post-stroke depression hos råttor genom ockluding den mellersta cerebral artär via den inre halspulsådern. Vi använder Porsolt tvingade simma test och sackaros preferens test för att bekräfta och utvärdera inducerad depressiva stämningar.
Transcript
Vårt protokoll föreslår en ny medial cerebral artär ocklusion teknik hos råttor för att hjälpa till att studera mekanismen för post-stroke depression utveckling och att hitta en effektivare terapi. Den största fördelen med vår teknik är dess förmåga att minska variabiliteten i viktförändringar, hjärnanödem, och infarct volym, och att minimera förfaranderelaterade dödsfall. Efter att ha bekräftat en brist på svar på svansen nypa i en manlig 300 till 350-gram Sprague Dawley råtta, placera djuret på en 37 grader Celsius värmeplatta och använda en rektalsond för övervakning av kroppstemperaturen.
Applicera salva på djurets ögon och raka håret från nacken. Därefter, desinficera den exponerade huden med 70 procent alkohol klorhexidin, och täcka råttan med den sterila kirurgiska drapera innan du utför ocklusionen enligt standardtekniker. För att få den neurologiska svårighetsgraden poäng, placera en ockluderad råtta på en plan yta och låta djuret att röra sig fritt.
Efter en minut, dra försiktigt råttan bakåt i svansen och gradera djurets gångrespons. För att mäta infarct volym, skanna den beredda färgade hjärnan skivor på en 1, 600 av 1, 600 punkter per tum upplösning och beskära och standardisera skalan för alla bilder. Sedan, ladda de standardiserade bilderna i en lämplig bild analys programvara program och använda ett spårningsverktyg för att mäta området för markerade blekhet i sex på varandra följande två millimeter skivor för att bestämma infarct storlek som en procentandel av hela hjärnan skiva.
30 till 33 dagar efter operationen, överför djuren till ett slutet, tyst, ljusstyrt rum i enskilda burar och placera en flaska som innehåller 100 milliliter 1%sackaroslösning i varje bur i 24 timmar. Nästa dag, ta bort flaskorna samt mat och dricksvatten i 12 timmar. Placera en flaska som innehåller 100 milliliter 1%sackaroslösning och en flaska som innehåller 100 milliliter kranvatten i varje bur i fyra timmar i slutet av eftersatt av fattigdomsperioden.
Sedan, registrera volymen av sackaroslösningen och vatten som förbrukas för att möjliggöra beräkning av samhörigheten till sackaros preferens för varje djur. För Porsolts forceringssimtest, 30 till 33 dagar efter operationen, placerar du först varje råtta i en vertikal plexiglascylinder som innehåller 80 centimeter 25 grader Celsius vatten i 15 minuter. Vid slutet av tillvänjningsperioden, låt råttan torka i 15 minuter i den uppvärmda inneslutningen vid 32 grader Celsius innan du återvänder djuret till sin hembur.
Nästa dag, returnera råttan till cylindern under en sista fem minuter, registrera fem minuters test för att möjliggöra beräkning av den totala varaktigheten av orörlighet under den perioden. Histologisk analys visar en statistiskt signifikant infarktvolym i procent av den totala hjärnvolymen efter MCAO jämfört med djur i bluffkontrollgruppen. En statistiskt signifikant hjärnödem observeras också i försöksdjuren jämfört med den sken kontrollgruppen.
MCAO djur visar lägre neurologiska föreställningar jämfört med sham-operated djur på 50 minuter, 24 timmar och sju dagar efter operationen. MCAO råttor konsumerar också en betydligt lägre mängd sackaros och uppvisar en längre orörlighet under Porsalts forcerad-simma tester jämfört med de skendrivna djur. Detta är en viktig modell för beteendemässiga stroke studier och skulle kunna fungera som ett verktyg för att bedöma framtida terapier eller ge kritiska prekliniska data om effekten av terapeutiska ämnen.
Tags
Beteende
ischemisk stroke
poststroke depression
råtta modell
mellersta cerebral artär ocklusion
infarct volym
hjärnan ödem
Porsolt tvingas simma test
sackaros preferens test
