Summary
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Her presenterer vi en protokoll for å indusere post-takts depresjon hos rotter ved å okkluderer den midterste cerebral arterien via den interne hals puls arterien. Vi bruker Porsolt tvunget svømme test og sukrose preferanse test for å bekrefte og evaluere indusert depressive stemninger.
Transcript
Vår protokoll foreslår en ny medial cerebral arterie okklusjon teknikk hos rotter for å studere mekanismen for post-stroke depresjon utvikling og for å finne en mer effektiv terapi. Den største fordelen med vår teknikk er dens evne til å redusere variasjonen i vektendringer, hjerneødem og infarktvolum, og for å minimere prosedyrerelaterte dødsfall. Etter å ha bekreftet mangel på respons på haleklemme i en mannlig 300 til 350 gram Sprague Dawley rotte, plasser dyret på en 37 grader Celsius varmeplate og bruk en rektal sonde for å overvåke kjernekroppstemperaturen.
Påfør salve på dyrets øyne og barber håret fra nakken. Deretter desinfiserer den eksponerte huden med 70 prosent alkoholklorhexidin, og dekker rotten med det sterile kirurgiske gardineret før du utfører okklusjonen i henhold til standardteknikker. For å oppnå nevrologisk alvorlighetsgrad score, plasser en okkludert rotte på en flat overflate og la dyret bevege seg fritt.
Etter ett minutt trekker du forsiktig rotten bakover med halen og graderer dyrets gangartrespons. For å måle det infarktvolumet, skann de forberedte beisede hjerneskivene med en oppløsning på 1600 med 1600 punkter per tomme og beskjær og standardisere skalaen for alle bildene. Deretter laster du de standardiserte bildene inn i et passende bildeanalyseprogram og bruker et sporingsverktøy for å måle området merket blekhet i seks påfølgende to millimeter skiver for å bestemme infarktstørrelsen som en prosentandel av hele hjerneskiven.
30 til 33 dager etter operasjonen, overfør dyrene til et lukket, stille, lyskontrollert rom i individuelle bur, og legg en flaske som inneholder 100 milliliter 1% sukroseløsning i hvert bur i 24 timer. Neste dag, fjern flaskene samt mat og drikkevann i 12 timer. På slutten av deprivasjonsperioden, plasser en flaske som inneholder 100 milliliter 1% sukroseløsning og en flaske som inneholder 100 milliliter vann fra springen i hvert bur i fire timer.
Deretter registrerer du volumet av sukroseløsningen og vannet som forbrukes for å tillate beregning av affiniteten til sukrosepreferanse for hvert dyr. For Porsolts tvungen svømmetest, 30 til 33 dager etter operasjonen, første plass hver rotte i en vertikal plexiglass sylinder som inneholder 80 centimeter av 25 grader Celsius vann i 15 minutter. På slutten av habituation perioden, la rotten tørke i 15 minutter i oppvarmet kabinett ved 32 grader Celsius før du returnerer dyret til sitt hjem bur.
Neste dag, returner rotten til sylinderen i de siste fem minuttene, og registrerer den fem minutter lange testen for å tillate beregning av den totale varigheten av immobilitet i denne perioden. Histologisk analyse viser et statistisk signifikant infarktvolum som en prosentandel av det totale hjernevolumet etter MCAO sammenlignet med dyr i sham kontrollgruppen. Et statistisk signifikant hjerneødem observeres også hos de eksperimentelle dyrene sammenlignet med sham-kontrollgruppen.
MCAO dyr viser lavere nevrologiske forestillinger sammenlignet med sham-opererte dyr på 50 minutter, 24 timer, og syv dager etter operasjonen. MCAO rotter bruker også en betydelig lavere mengde sukrose og viser en lengre immobilitet under Porsalts tvungen svømmetester sammenlignet med de sham-opererte dyrene. Dette er en viktig modell for atferdsslagstudier og kan tjene som et verktøy for å vurdere fremtidige behandlinger eller gi kritiske prekliniske data om effekten av terapeutiske stoffer.
Tags
Atferd
iskemiske hjerneslag
poststroke depresjon
rotte modell
middels cerebral arterien okklusjon
infarkt volum
hjerneødem
Porsolt tvunget svømme test
sukrose preferanse test
