अपने मूल वातावरण में अभिन्न झिल्ली प्रोटीन का अध्ययन प्लाज्मा झिल्ली की जटिलता के कारण एक चुनौती रही है। विशालकाय यूनिलैमेलर लिपिड पुटिकाएं, या जीयूवी, बायोमेम्ब्रेन गुणों का अध्ययन करने के लिए सबसे प्रमुख प्लेटफार्मों में से एक हैं और उन्हें विभिन्न शारीरिक स्थितियों की नकल करने के लिए इंजीनियर किया जा सकता है। यह प्रोटोकॉल हाइड्रोजेल सूजन के बाद, सहज निगमन के आधार पर प्रोटीन को शामिल किए गए जीयूवी को बनाने की एक विधि का वर्णन करता है। जीयूवी बनाने के लिए पारंपरिक तरीके अभिन्न झिल्ली प्रोटीन निगमन के लिए सामान्यीकृत नहीं हैं। ये तरीके अक्सर कम उपज, methodologically जटिल और तदर्थ होते हैं, प्रोटीन के व्यापक वर्गों पर लागू नहीं होते हैं। दूसरी ओर, यह प्रोटोकॉल GUVs.We में कार्यात्मक अभिन्न झिल्ली प्रोटीन को शामिल करने के लिए एक लचीली, मजबूत और सरल विधि का प्रतिनिधित्व करता है, हमने इसे हाइड्रोजेल पाड़ तैयार करके, प्रोटीन युक्त, और इसके शीर्ष पर लिपिड की एक पतली परत जमा करके पूरा किया। यहां प्रस्तुत उदाहरण में, हमने जी प्रोटीन-युग्मित रिसेप्टर, या जीपीसीआर को शामिल किया, जीयूवी में जीयूवी.ओ.एस. पूरे सिस्टम के पुनर्जलीकरण पर, जीयूवी हाइड्रोजेल की सतह से बाहर निकलते हैं, जिसमें झिल्ली होती है जिसमें ठीक से उन्मुख GPCRs होते हैं। इस समय के दौरान, कवर स्लिप को मेथनॉल में रखकर और 40 पर 30 मिनट के लिए sonicating करके साफ करें
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यह प्रोटोकॉल अभिन्न झिल्ली प्रोटीन (आईएमपी) को विशाल यूनिलैमेलर लिपिड पुटिकाओं (जीयूवी) में शामिल करने के लिए एक शक्तिशाली और सामान्य तकनीक के रूप में एगारोज़ सूजन का उपयोग करता है, जैसा कि मानव 1 ए सेरोटोनिन रिसेप्टर प्रोटीन (5-HT1AR) के पुनर्गठन के लिए यहां वर्णित है, जो औषधीय रूप से महत्वपूर्ण जी प्रोटीन-युग्मित रिसेप्टर्स के वर्गों में से एक है।
Elbaradei, A., Dalle Ore, L. C., Malmstadt, N. Construction of Model Lipid Membranes Incorporating G-protein Coupled Receptors (GPCRs). J. Vis. Exp. (180), e62830, doi:10.3791/62830 (2022).