ציור דם מן החולדות דרך וריד Saphenous ועל ידי נקר לב

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

שואב דם יש צורך במספר רב של מחקרים, למשל ללמוד את פרופיל פרמקוקינטיקה של תרכובת. כאן, אנו מדגימים כיצד להקיז דם מן החולדות באמצעות שתי טכניקות: להקיז דם מהעורק saphenous או לנקב לב.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture. J. Vis. Exp. (7), e266, doi:10.3791/266 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

ציור דם מכרסמים הוא הכרחי עבור מספר גדול של הן במבחנה במחקרים vivo. אתרים של דם שואבת הן רבות במכרסמים: לב רטרו מסלולית סינוס, וריד, וריד לסתי, וריד saphenous,. טכניקה לכל היתרונות והחסרונות שלה, וחלק אינם מאושרים יותר במדינות מסוימות (למשל, רטרו מסלולית שואבת בהולנד). דיון בטכניקות שונות של ציור דם הם 1-3 זמין. כאן, אנו מציגים שתי טכניקות ציור דם חולדות, כל אחד עם יישומים ספציפיים שלה.

להקיז דם מהעורק saphenous, בתנאי שזה נעשה כראוי, גורמת מצוקה מינימלית בבעלי חיים ואינו דורש הרדמה. טכניקה זו מאפשרת חזר שואבת של כמויות קטנות של דם, כגון הצורך ללימודי פרמוקוקינטיים 4,5, בקביעת כימיה פלזמה, או ספירת דם 6.

לנקב לב מאפשר איסוף כמויות גדולות של דם מבעל חיים אחד (עד 10 מ"ל של דם ניתן להסיק חולדה ז 150). טכניקה זו שימושית מאוד ולכן כהליך סופני כאשר ציור דם saphenous לא יספק מדגם מספיק גדול. אנו משתמשים לנקב לב כאשר אנחנו צריכים כמות מספקת של בסרום של זן מסוים של חולדות לגדול קווי לימפוציטים T במבחנה 4-9.

Protocol

ציור דם מן החולדות דרך וריד Saphenous ועל ידי נקר לב

הערה: כל הנהלים חייב להיות מאושר על ידי טיפול בבעלי חיים במכון שלך, ועדה להשתמש.

1. שואבים דם בווריד saphenous

  1. הליך זה מבוצע ללא הרדמה דורש שני אנשים, מי מטפל חולדה, ומי מבצע את תיקו.
  2. הפוך חרוט מתוך מגבת או להחזיק את העכברוש עם כפפות מכרסם טיפול, עוזב אחד הגפיים האחוריות חשוף.
  3. לגלח את החלק האחורי של הרגל עם גוזם חשמלי עד הווריד saphenous גלוי. שבי שטח מספיק גדול, כך השיער לא יבוא במגע עם האתר לנקב. השתמש כמות קטנה של קרם שאינו ריחני יד כדי לשמור על השיער הלא מגולח מהמקום לנקב.
  4. הקפידו דחיסה בבסיס של הרגל על ​​מנת להפוך את וריד saphenous בליטה החוצה (בדומה באמצעות חוסם עורקים כאשר זוב דם מבן אדם או חיה גדולה). את הווריד לנקב באמצעות מחט 20 גרם ו סקופ הדם כפי שהוא יוצא באמצעות microvette. שאיבה עם הרגל תסייע להקיז דם ועוד. לאחר שאספת מספיק דם, להחזיק לדחוס נקי באתר לנקב כדי לעצור את הדימום.

2. דם לצייר על ידי לנקב לב

  1. הליך זה מחייב הרדמה היא סופנית. בעלי חיים צריכים להיות מורדמים מיד בסוף לנקב לב.
  2. הכן מזרק 5 מ"ל עם מחט 23G1.
  3. עמוק anesthesize את העכברוש ולבדוק הרדמה על ידי חוסר תנועה ספונטנית, קצב נשימה איטי, חוסר תגובה לגירויים (כגון צובט אצבע). כדי להבטיח הרדמה ממושכת, במקום לחבית מזרק המכיל מגבת נייר ספוגה הרדמה נדיף על אפו של עכברוש במהלך ההליך.
  4. מניחים את חולדה על גבו, מול ממך.
  5. אם אתם ימניים, מקום לאצבע שמאל ברמה של הצלעות הנמוך ביותר, ללא החלת כל לחץ. הלב יהיה ממוקם ~ 1 ס"מ מעל לנקודה זו, מעט ימינה.
  6. החזקת המזרק שלך בזווית של 45 מעלות, להכניס את המחט בין שתי הצלעות לצפות טיפת דם להיכנס המחט. זו אינדיקציה לכך שאתה בלב. מבלי להזיז מזרק שלך, יש למשוך את הבוכנה כדי למלא את המזרק. לאחר מזרק מלא, בזהירות נתק אותו המחט ולרוקן אותו לתוך צינור. מזרק אז יכול להיות מחדש מחוברת המחט לציור יותר דם. זה צריך להיות אפשרי לצייר 50-10 מ"ל של דם חולדה 120-180 גרם.
  7. מיד להרדים את העכברוש.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ציור דם מהעורק saphenous הוא דרך נוחה לקבל כמויות קטנות של דם ללא הרדמה. אם הדגימה חזר נדרש, לבדוק את התקנות כדי לוודא שאתה לא למשוך יותר מדי דם מן עכברוש אחד.

ציור דם על ידי לנקב לב הוא דרך נוחה לקבל כמויות גדולות של דם, אבל זה הליך סופנית. בעל חיים חייב להיות מורדמים בסוף לצייר את הדם.

טכניקות אלו (כמו כל טכניקות בבעלי חיים) צריך להיעשות הראשון בנוכחות וטרינר או טכנאי וטרינרי אשר יוכלו להעריך כי החיות מטופלות כראוי ולא כפופים כאב מיותר ו / או מצוקה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Needle 20G 1/2 Tool BD Biosciences 305176 For puncturing the saphenous vein
Microvette 300 Tool Sarstedt Ltd 20.1308.100 To collect blood from the saphenous vein
Electric trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130
Needle 23 G 1 Tool BD Biosciences 305145 For cardiac puncture
5 ml plastic syringe, slip tip Tool Fisher Scientific 14-826-12 For cardiac puncture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
  2. Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
  3. Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
  4. Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 13942-13947 (2001).
  5. Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. 1369-1381 (2005).
  6. Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 17414-17419 (2006).
  7. Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 936-944 (2001).
  8. Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. 317-320 (2003).
  9. Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).

Comments

13 Comments

  1. DŒs the cardiac puncture procedure also work with mice? If not, how can I do a cardiac puncture with mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 1, 2008 - 6:35 PM
  2. Yes, this cardiac puncture also works with mice. It is just a little more difficult as a ²0g mouse is about 10 times smaller than the rat shown on this video but, with a little practice, the mouse cardiac puncture can be done with consistent results.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 1, 2008 - 6:42 PM
  3. Is it possible to draw 1 mL of whole blood from the Saphenous vein of a 150 g rat?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 26, 2008 - 10:00 PM
  4. 1 ml is a lot of blood and I doubt you can get that much reliably from the saphenous vein. I usually draw 50-100 ul, sometimes up to 300 ml.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 27, 2008 - 11:13 AM
  5. is there is any need to change the needle size for doing experiments in mice

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 11:08 PM
  6. I would try with a ²3G, like for rats. You can use ²5G but then you will start seeing more hemolysis.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    November 11, 2008 - 4:47 PM
  7. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:24 PM
  8. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:25 PM
  9. Whether of not hemolysis during blood draw is acceptable depends on the use you will have for the blood.
    We often use blood drawn through terminal cardiac puncture for the preparation of serum for tissue culture. In this case we try to avoid hemolysis as this affects cell survival in culture. For other applications, hemolysis may not represent a problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 4, 2010 - 2:34 PM
  10. How much heparin to you add to your tubes before collecting the blood?

    Reply
    Posted by: Alexis L.
    February 3, 2010 - 1:09 PM
  11. If you want to collect plasma, prepare a solution of 5% heparin in PBS and add 0.1 ml of it to each 3-5 ml syringe.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2010 - 1:12 PM
  12. For vena saphena: If you puncture the vein lower (next to the ankle), it's easier, because the vein in this area is more on the surface.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2011 - 3:45 AM
  13. I'm a graduate student from P.R.China.In our lab, we draw blood from mice from the retro-orbital sinus, which technique I find really disconcerting. I'm fascinated by your technique demonstrated here, and I would be grateful if Ms Beeton can send me the written protocol via e-mail.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 31, 2012 - 7:32 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics