Saphenous 베인 통해 심장 찔린로 쥐에서 혈액을 그리기

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

혈액 연구 다수에 필요한 그리는, 화합물의 pharmacokinetics 프로필을 공부 예를 들어. saphenous 정맥 또는 심장 관통하여 혈액 그릴 : 여기, 우리는 두 가지 기술을 사용하여 쥐에서 혈액을 그리는 방법을 보여줍니다.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture. J. Vis. Exp. (7), e266, doi:10.3791/266 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

설치류에서 혈액을 그리기 것은 체외 및 생체내 연구 모두에서 다수가 필요합니다. 혈액의 사이트는 설치류에 많은 아르 그립 : 역전사 궤도 부비동, 경정맥 정맥, 상악 정맥 saphenous 정맥, 심장. 각 기술은 장점과 단점을 가지고 있으며, 일부 (예, 복고풍 - 궤도 네델란드 그립) 일부 국가에서는 더 이상 승인하지 않습니다. 그리기 혈액에 대해 서로 다른 기술의 논의를 사용할 수 1-3아르. 여기, 우리는 쥐가에서 혈액을 그리기위한 두 가지 기술, 그 구체적인 애플 리케이션을 각각 제시한다.

그것이 제대로 이루어집니다 제공 saphenous 정맥에서 혈액 그릴은 동물의 최소한의 손해를 유도하고 마취가 필요하지 않습니다. 이 기술은 반복이 플라즈마 화학 또는 혈액 카운트 6 결정, 4,5 pharmacokinetic 연구에 필요한 등, 혈액 소량의 그립 수 있습니다.

심장 찔린 하나의 동물에서 혈액의 대량의 수집가 (혈액의 최대 10 ML 150g 랫에서 얻을 수 있습니다) 수 있습니다. saphenous에서 혈액을 그릴 때하는 것은 충분히 많은 샘플을 제공하지 수있는 터미널 절차로서이 기술은 따라서 매우 유용합니다. 우리가 체외에서 T 림프구 4-9 라인 성장 쥐의 특정 변형에서 혈청의 충분한 양을 필요로 할 때 우리는 심장 소중히 사용합니다.

Protocol

Saphenous 베인 통해 심장 찔린로 쥐에서 혈액을 그리기

참고 : 모든 절차가 연구소의 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 받아야합니다.

1. saphenous 정맥의 혈액 추첨

  1. 이 절차는 마취없이 수행하고 2 인 쥐를 처리 하나와 무승부를 수행 하나가 필요합니다.
  2. 수건 밖으로 원추형을 확인하거나 뒷다리가 노출 떠나, 설치류 처리 장갑으로 쥐를 잡아.
  3. saphenous 정맥을 볼 때까지 전기 트리머로 다리의 뒷면 면도. 어떤 머리가 찔린 사이트 접촉하지 않도록, 충분히 많은 영역을 쉐이브. 거리에 찔린 사이트에서 비 면도 머리카락을 유지하는 비 향기 손 로션의 소량을 사용합니다.
  4. saphenous 정맥 팽창 아웃 (인간이나 대형 동물에서 혈액을 그릴 때 지혈대를 사용하여 유사한)를 확인하기 위해 다리의 바닥에 압축 지점을 확인합니다. 찔린 20G 바늘을 사용하여 정맥하고 microvette를 사용하여 나오는대로 혈액을 특종. 다리로 펌핑하는 것은 더 많은 혈액을 그리는 데 도움이 될 것입니다. 당신은 충분한 혈액을 수집하면, 출혈을 멈추게하기 위해 펑크 사이트에서 깨끗한 압축을 보유.

2. 심장 관통하여 혈액 추첨

  1. 이 절차는 마취가 필요하며 터미널입니다. 동물은 즉시 심장 펑크의 끝에 euthanized해야합니다.
  2. 23G1 바늘로 5 ML의 주사기를 준비합니다.
  3. 깊이 쥐 anesthesize하고 자발적인 운동 부족, 느린 호흡 속도 및 자극 (예 : 발가락을 곤란 등)에 응답의 부족으로 마취를 확인하십시오. 장시간 마취를 보장하기 위해 절차를 수행하는 동안 쥐의 코에 휘발성 마취에 배어 종이 타월을 포함하는 주사기 배럴을 넣으십시오.
  4. 당신에게서 멀리 직면하고 자사의 뒷면에있는 쥐를을 놓으십시오.
  5. 당신이 오른손잡이 경우, 어떤 압력을 적용하지 않고, 가장 낮은 갈비의 수준에서 왼쪽 검지 손가락을 넣으십시오. 마음이 온도 이상 ~ 1cm, 약간 오른쪽에있는 것입니다.
  6. 45도 각도에서 주사기를 들고, 바늘에 와서 혈액 한 방울 두 갈비와 시계 사이에 바늘을 삽입합니다. 이것은 마음에 있다고 표시됩니다. 귀하의 주사기를 이동하지 않고, 주사기를 채우기 위해 플런저에 당기십시오. 주사기가 가득되면, 바늘에서 신중을 분리하고 튜브에을 비웁니다. 주사기 그런 다음 더 많은 혈액을 그리기 위해 바늘에 다시 연결할 수 있습니다. 그것은 120~180그램 랫 혈액의 50-10 ML을 그릴 수 있어야한다.
  7. 즉시 쥐를 안락사.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

saphenous 정맥에서 혈액을 그리기 것은 마취없이 혈액 소량을 얻을 수있는 편리한 방법입니다. 반복 샘플링이 필요한 경우, 한 쥐에서 너무 많은 피를 뽑아서하지 않도록 규정을 확인하십시오.

심장 바늘로 혈액을 그리기 것은 혈액의 다량을 얻을 수있는 편리한 방법이다 그러나 이것은 터미널 절차입니다. 동물은 혈액 추첨의 끝에 euthanized해야합니다.

이러한 기술은 (살아있는 동물에 대한 모든 기술 등) 첫번째 동물이 제대로 처리하고 불필요한 고통 및 / 또는 고통의 대상이 아니라는 것을 평가할 수있을 것입니다 수의사 또는 수의사 기술자의 존재에서 수행되어야합니다.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Needle 20G 1/2 Tool BD Biosciences 305176 For puncturing the saphenous vein
Microvette 300 Tool Sarstedt Ltd 20.1308.100 To collect blood from the saphenous vein
Electric trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130
Needle 23 G 1 Tool BD Biosciences 305145 For cardiac puncture
5 ml plastic syringe, slip tip Tool Fisher Scientific 14-826-12 For cardiac puncture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).
  2. Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).
  3. Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).
  4. Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 13942-13947 (2001).
  5. Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. 1369-1381 (2005).
  6. Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 17414-17419 (2006).
  7. Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 936-944 (2001).
  8. Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport. 317-320 (2003).
  9. Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats. Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).

Comments

13 Comments

  1. DŒs the cardiac puncture procedure also work with mice? If not, how can I do a cardiac puncture with mice?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 1, 2008 - 6:35 PM
  2. Yes, this cardiac puncture also works with mice. It is just a little more difficult as a ²0g mouse is about 10 times smaller than the rat shown on this video but, with a little practice, the mouse cardiac puncture can be done with consistent results.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 1, 2008 - 6:42 PM
  3. Is it possible to draw 1 mL of whole blood from the Saphenous vein of a 150 g rat?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 26, 2008 - 10:00 PM
  4. 1 ml is a lot of blood and I doubt you can get that much reliably from the saphenous vein. I usually draw 50-100 ul, sometimes up to 300 ml.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    October 27, 2008 - 11:13 AM
  5. is there is any need to change the needle size for doing experiments in mice

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 11:08 PM
  6. I would try with a ²3G, like for rats. You can use ²5G but then you will start seeing more hemolysis.

    Reply
    Posted by: Christine B.
    November 11, 2008 - 4:47 PM
  7. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:24 PM
  8. Why isn't hemolysis acceptable?

    Reply
    Posted by: sumali k.
    January 4, 2010 - 2:25 PM
  9. Whether of not hemolysis during blood draw is acceptable depends on the use you will have for the blood.
    We often use blood drawn through terminal cardiac puncture for the preparation of serum for tissue culture. In this case we try to avoid hemolysis as this affects cell survival in culture. For other applications, hemolysis may not represent a problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 4, 2010 - 2:34 PM
  10. How much heparin to you add to your tubes before collecting the blood?

    Reply
    Posted by: Alexis L.
    February 3, 2010 - 1:09 PM
  11. If you want to collect plasma, prepare a solution of 5% heparin in PBS and add 0.1 ml of it to each 3-5 ml syringe.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2010 - 1:12 PM
  12. For vena saphena: If you puncture the vein lower (next to the ankle), it's easier, because the vein in this area is more on the surface.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 17, 2011 - 3:45 AM
  13. I'm a graduate student from P.R.China.In our lab, we draw blood from mice from the retro-orbital sinus, which technique I find really disconcerting. I'm fascinated by your technique demonstrated here, and I would be grateful if Ms Beeton can send me the written protocol via e-mail.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 31, 2012 - 7:32 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics