Author Produced

الشريان الدماغي الأوسط انسداد داخل اللمعة (MCAO) النموذجي للاصابة بالسكتة الدماغية مع توجيه الليزر دوبلر Flowmetry في الفئران

* These authors contributed equally
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

وسط انسداد الشريان الدماغي داخل اللمعة (MCAO) النموذج هو النموذج الأكثر شيوعا المستخدمة بين النماذج التجريبية السكتة الدماغية. هنا سوف نظهر نموذج كامل بالتفصيل مع دليل flowmetry دوبلر ليزر ، والنتائج ممثلها.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice. J. Vis. Exp. (51), e2879, doi:10.3791/2879 (2011).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

السكتة الدماغية هي ثالث سبب رئيسي للوفاة والسبب الرئيسي للعجز في العالم ، بتكلفة تقدر ب 70 مليار دولار قرب في الولايات المتحدة في عام 2009 ، 1،2. وقد وضعت وسط انسداد الشريان الدماغي داخل اللمعة (MCAO) نموذج من قبل كويزومي 4 في عام 1986 لمحاكاة هذه الحالة المرضية تأثيرا الإنسان في الفئران. وقدم في وقت لاحق لتعديل الطريقة التي MCAO ونجا 3. وقد تم كل من التقنيات المستخدمة على نطاق واسع لتحديد الآليات الجزيئية لإصابات الدماغ الناجمة عن السكتة الدماغية والطرائق العلاجية المحتملة 5. وقد تم تمديد هذا الأسلوب موسع نسبيا في الفئران لاستخدامها في الفئران للاستفادة من والسلالات المعدلة وراثيا 6،7 خروج المغلوب. إلى نقص التروية الدماغية نموذج الاتصال ، متقدمة an خياطة داخل اللمعة عن طريق الشريان السباتي الداخلي لتسد قاعدة MCA. التراجع في الدرز بعد فترة محددة من الوقت يحاكي ضخه عفوية ، ولكن يمكن أيضا أن تكون خياطة الاحتفاظ بشكل دائم. وسوف يكون هذا الفيديو يدل على النهجين الرئيسية لأداء داخل اللمعة MCAO الداخلي في الفئران بطريقة متدرجة ، فضلا عن تقديم رؤى للعيوب والمطبات المحتملة. وبعد ذلك أنسجة الدماغ الإقفاري تكون ملطخة بواسطة 2،3،5 - triphenyltetrazolium كلوريد (TTC) لتقييم مدى احتشاء دماغي 8.

Protocol

وكان هذا البروتوكول التي وافقت عليها رعاية الحيوان واستخدام اللجنة المؤسسية (IACUC) في جامعة فلوريدا ومتوافق مع "مبدأ رعاية الحيوان المعملية" (NIH المنشور رقم 86-23 ، المعدل عام 1985).

1. مواد

  1. الحيوانات : ذكر C57BL / 6 الفئران (هارلان مختبرات ، انديانابوليس ، IN ، الولايات المتحدة الأمريكية) وزنها 20-26 جرام في وقت الجراحة.
  2. التخدير :
    1. آلة التخدير : تخدير VetEquip نظام استنشاق (VetEquip شركة ، بليسانتون ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة).
    2. استنشاق مخدر : Isoflurane (الصيدلانيات باكستر ، ديرفيلد ، IL).
  3. أدوات جراحية : SuperCut مقص إيريس ، على التوالي (العالمية آلات دقيقة ، وشركة ، ساراسوتا ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ Vannas الدقيقة مقص ، مستقيم (الآلات الدقيقة العالمي ، وشركة ، ساراسوتا ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ دومون ملقط (نصيحة الجميلة ، 45 ° نصائح عازمة ، الآلات الدقيقة العالمي ، وشركة ، ساراسوتا ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ وحدة تخثر القطبين (عالية التردد 900 المجفف ، الآلات الدقيقة العالمي ، وشركة ، ساراسوتا ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ الدقيقة مقطع السفينة (الآلات الدقيقة العالمي ، شركة ، ساراسوتا ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية)
  4. اللوازم الجراحية : نصائح القطن المعقمة ؛ مناديل ؛ الإسفنج شاش ؛ خياطة (7-0 خياطة الحرير ، Ethicon ، شركة ، سوميرفيل ، ونيو جيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ لاصق الأنسجة (Vetbond ، 3M الشركة ، وسانت بول ، مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ؛ فرك الجراحية : Bethadine ، والإيثانول 70 ٪ ، 0.9 ٪ وعقيمة المالحة ؛ مرهم العين (Puralube مرهم البيطرية ، Pharmaderm ، ميلفيل ، نيويورك ، الولايات المتحدة).
  5. إطباق خياطة استعدادا لMCAO :
    1. خيوط للإطباق MCA : 7-0 حيدة النايلون الجراحية خاط (Ethicon ، شركة ، سوميرفيل ، ونيو جيرسي ، الولايات المتحدة).
    2. مصدر الحرارة لتصد طرف الخيط (وحدة حرارية الكي ، آلات دقيقة العالمي ، وشركة ، ساراسوتا ، فلوريدا).
    3. السائل المطاط سيليكون (سيليكون RTV لاصقة ، آلات دقيقة العالمي ، وشركة ، ساراسوتا ، فلوريدا ، الولايات المتحدة).
  6. الجراحية / تشريح مجهر (ميكروسكوب لايكا MZ6 ستيريو).
    1. منار الألياف البصرية (منار الألياف البصرية FO1 - 150 ، TechniQuip كورب ، ليفرمور ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة).
  7. الليزر دوبلر flowmetry (نظام PeriFlux 5000 ، Perimed ، ستوكهولم ، السويد).
    1. مرنة microtip (MT Microtip B500 - 0 مستقيم ، Perimed ، ستوكهولم ، السويد)
  8. درجة الحرارة المعلمات :
    1. رصد درجات حرارة المستقيم (BAT - 12 ، الآلات الدقيقة العالمي ، وشركة ، ساراسوتا ، فلوريدا).
    2. بطانية حرارية (T / مضخة ، TP600 ، Gaymar ، نيويورك ، الولايات المتحدة).
  9. تلوين والقياس الكمي لحجم احتشاء :
    1. 2 ٪ من محلول كلوريد 2،3،5 - triphenyltetrazolium (2 ٪ TTC ، سيغما الدريخ شركة ، وسانت لويس ، MO ، الولايات المتحدة).
    2. الفئران الدماغ مصفوفة تقطيع اللحم (Zivic ميلر معمل ، شركة ، أليسون بارك ، والسلطة الفلسطينية ، الولايات المتحدة).
    3. كاميرا رقمية (V1253 ، كوداك المحدودة ، روتشستر ، نيويورك ، الولايات المتحدة).
    4. صورة J البرمجيات (ImageJ 1.42q البرمجيات الأميركية ، والمعاهد الوطنية للصحة في بيثيسدا ، MA ، الولايات المتحدة).

2. خطوات ما قبل العمليات الجراحية

  1. قبل الجراحة ، ويتم إيواء الفئران تحت دائرة الضوء / الظلام 12:12 مع حرية الوصول إلى المياه وطعام القوارض.
  2. مستعدون لMCAO الغرز عن طريق إضعاف 1 - 2mm وغيض من الدرز مع الحرارة وطلاء 3 - 4mm رمح الدرز من طرفها مع السيليكون والمطاط السائل ، والسماح لها الجافة (7-0 ؛ قطر الحافة ، 0.20 - 0.25mm ؛ طلاء طول ، 3 - 4mm ؛ خياطة طول 11 - 13mm). ينبغي الحفاظ على عقم في كل من الخطوات المذكورة أعلاه.
  3. بعد وزنها على الماوس ، يتم بفعل التخدير مع 4 ٪ isoflurane في غرفة تحريض والحفاظ عليها أثناء إجراء مع 1،5-2 ٪ isoflurane في 30 ٪ O 2 و 70 ٪ N 2 O خليط الغاز عبر قناع.
  4. يتم وضع الماوس في وضعية الرقود على شاش الكذب على سطح التشغيل التحكم في درجة حرارته (بطانية حرارية) ، وحلق الرأس والفراء.
  5. يتم تطبيق مواد التشحيم مرهم للعين لكلتا العينين والجفون مغلقة لمنع جفاف العين أثناء العملية الجراحية.
  6. يتم إجراء شق خط الوسط (1 سم) على الجلد المغطي في القبة من الخط القفوي متفوقة على nasion ويتم سحبها الجلد أفقيا لتركيب microtip مرنة (MT B500 - 0 Microtip مستقيم ؛ قطره 0.5mm). يتم وضع microtip عمودي على سطح الجمجمة الجداري الأيمن (1 ملم و 5 ملم الخلفي الجانبي للbregma) لمراقبة تدفق الدم في إقليم MCA flowmetry دوبلر بواسطة الليزر.
  7. تأكد من أن يتم إرفاق microtip مرنة لجمجمة بحزم قبل تحول الحيوان إلى موقف ضعيف. يتم وضع رقبة الحيوان على وسادة لينة ويقام أنفها في مخروط الأنف لجهاز التخدير. وهذه النتيجة في وجود مساحة كافية للmicrotip مرنة.
  8. يتم إدخال مسبار درجة حرارة المستقيم للحفاظ على درجة حرارة ثابتة الحيوانية الأساسية من 37 درجة مئوية ± 0.5
  9. وسجلت كل من forepaws وhindpaws على سطح منصة التشغيل ، وغير مسجلة في ذيل لأنبوب المستقيم.
  10. </ OL>

    3. MCA إطباق الجراحة :

    1. تحت المجهر التشغيل ، ويتم إجراء شق الرقبة خط الوسط مع مقص بين قبضة والفك عن طريق رفع بلطف الجلد المترهل.
    2. وتنقسم بصراحة والغدد تحت الفك السفلي إقران الكامنة ، مع الغدة اليسار اليسار في الموقع. وتراجع الغدة تحت الفك الأيمن cranially والمضمون مع العضلة القصية الترقوية الخشائية.
    3. وينقسم بعناية تقسيم المكشوفة من العضلات التي تغطي اللامية الكتفية غمد السباتي مع بيك آب.
    4. ويفصل بدقة الحق الشريان السباتي المشترك (CCA) ومعزولة عن العصب المبهم وغمده (الموجود الجانبي لCCA).
    5. الآخرة ، والطرق الجراحية 2 التي استخدمت في كثير من الأحيان لتنفيذ MCA إطباق تتباعد :

    كويزومي 4 الأسلوب

    1. يتم إعداد ثلاثة الغرز طوق فضفاضة (7-0 الحرير) حول CCA الحق.
    2. يتم التعرف على الشريان السباتي الخارجي (ECA) ، معزولة ، وأكتوي (2 - 3mm القاصي إلى التشعب). ويمكن لاحقا يمكن تقسيم الجزئي مع المقص. لتجنب الأضرار الهامشية غير مقصود في موقع الكي ، يجب تعيين سلطة في 1 باستخدام مفتاح الطاقة. هذا هو الثابت لجميع cauterizations.
    3. يتم تطبيق التوتر كافية للخياطة طوق معظم الداني على التقييم القطري المشترك إلى انسداد تدفق الدم (ربط دائم). يتم التحقق من انسداد تدفق انخفاضا ~ 50 ٪ من القيم الأساسية نضح القشرية.
    4. ثم يتم وضع مقطع السفينة قبل التشعب CCA لتجنب تدفق الوراء في وقت بضع الشريان.
    5. يتم إجراء بضع الشريان بين الدرز والداني ligated مقطع السفينة على التقييم القطري المشترك مع المقص الصغير (أقرب إلى الربط).
    6. وقدم للحرارة اضعافها سيليكون المغلفة النايلون 7-0 خياطة عبر بضع الشريان ومتقدمة حتى يصل مقطع السفينة. يتم شد بلطف 2 المتبقية الغرز طوق فضفاضة حول التقييم المشترك بين بضع الشريان ومقطع السفينة لتجنب تسرب التدفق مرة أخرى من خلال التقييم القطري المشترك ، مع الحذر بعدم الهلع في جدران الشرايين ، ثم يتم سحب مقطع السفينة.

    لونغا لأسلوب 3

    1. وحددت اللجنة الاقتصادية لأفريقيا ، تشريح قدر الإمكان (بالقرب من التشعب والخمسين في الشرايين لسانية والفكين) ، أكتوي (مع السلطة لتعيين 1) ، وقسمت الدقيقة مع المقص.
    2. مستعدون اثنين الغرز طوق فضفاضة (7-0 الحرير) حول ICA القريبة فقط فوق التشعب التقييم القطري المشترك.
    3. مغلق مؤقتا CCA مع مقطع السفينة. يتم التحقق من انسداد تدفق انخفاضا ~ 50 ٪ من القيم الأساسية نضح القشرية.
    4. ثم أغلقت مؤقتا ICA مع مقطع السفينة فوق الغرز طوق two فضفاضة لتجنب تدفق الوراء في وقت بضع الشريان.
    5. يتم إجراء بضع الشريان باستخدام المقص الصغير في وثيقة اللجنة الاقتصادية لأفريقيا ينعكس على الجذع.
    6. وقدم للحرارة اضعافها سيليكون المغلفة النايلون 7-0 خياطة عبر بضع الشريان في اللجنة الاقتصادية لأفريقيا ومتقدمة حتى يصل مقطع السفينة تطبيقها في هذه المنطقة. يتم شد بلطف 2 الغرز طوق فضفاض في ICA ICA الداني حول الجزر القريبة لتفادي تدفق الدم من خلال ICA ، مع الاهتمام ما يكفي لعدم الهلع في جدران الشرايين ، ثم يتم سحب مقطع السفينة.

    بقية الإجراء هو متقاربة الى حد كبير :

    1. متقدمة ببطء خياطة الاغلاق من خلال الشريان السباتي الداخلي (ICA) نحو قاعدة الجمجمة حتى يشعر مقاومة خفيفة. وأكد انخفاض متزامن في تدفق الدم في الدماغ قيمة كنسبة مئوية (= 80 ٪) بالمقارنة مع خط الأساس من جانب flowmetry دوبلر الليزر. يتم شد خيوط 2 طوق حول خيوط المدرجة.
    2. عن نقص التروية الدماغية العابرة التجارب ، يتم سحب الخيط بلطف الاغلاق بعد 45 دقيقة. ويمكن تغيير هذه النقطة الزمنية لأهداف تجريبية مختلفة.
    3. بعد سحب خيوط الدرز ، يتم إغلاق الموقع بضع الشريان لتجنب النزيف بعد العمليات الجراحية. في أسلوب كويزومي ، وهذا ينطوي على تشديد آمن الغرز طوق حول التقييم القطري المشترك. في تقنية ونجا ، هو أكتوي الموقع بضع الشريان في قاعدة اللجنة الاقتصادية لأفريقيا ، ثم يتم خففت الغرز طوق في ICA القريبة وإزالة لاستعادة تدفق الشريان السباتي.
    4. لإغلاق الجرح ، وضعت تحت الفك السفلي الغدة والمجلس الاعلى للقضاة أكثر من حقل من المنطوق. ثم يتم تقريب حواف الجرح بمادة لاصقة في نسيج عنق الرحم والمناطق فروة الرأس. بدلا من ذلك ، يمكن أن يستخدم التيلة أو المعدن امتصاص خياطة لإغلاق الجرح خصوصا عندما يكون المقصود البقاء على المدى الطويل من الحيوان.
    5. بعد إغلاق الجرح ، ويستقبل الحيوانات 1 مل المالحة الدافئة تحت الجلد وتجديد وحدة التخزين. وينبغي استخدام جرعة من المسكنات المناسبة (أي البوبرينورفين في ،05-،1 ملغ / كلغ) للحد من الألم والانزعاج الحيوان خلال فترة الانتعاش. لانيماتتم إزالة لتر من جناح الجراحة وضعت في قفص انتعاش المنطقة الدافئة / لمنع انخفاض حرارة الجسم ، مع إمكانية الوصول ، مجانا سهلة ميسرة في الغذاء والماء.

    4. بعد اوب التقييم العصبية

    بعد يستعيد الحيوان وعيه الكلي ، يمكن تقييم العجز العصبي بواسطة مقياس بسيط (مقياس من خمس نقاط) على النحو التالي : 3

    1. لا يمكن ملاحظتها العجز
    2. عدم تقديم forepaw المقابل (خفيف العجز العصبية المركزية)
    3. تدور في الاتجاه المقابل لاحتشاء (متوسط ​​العجز العصبية المركزية)
    4. الوقوع في الاتجاه المقابل لاحتشاء (عجز شديد العصبية المركزية)
    5. الاكتئاب مستوى وعيه من دون حركة عفوية

    5. تلوين والقياس الكمي لحجم احتشاء الدماغ

    1. بعد 24 ساعة من ضخه MCA ، حيث يتم وزن الماوس على قيد الحياة ، مع تخدير عميق isoflorane 4 ٪ ، وضحوا وفقا للبروتوكول المعتمد.
    2. تتم إزالة بعناية الدماغ وضعت في تقطيع اللحم ودماغ الفأر مصفوفة ، والمخ بأكمله هو مقطوع coronally على فترات 2 مم.
    3. مغمورة المقاطع في 2 ٪ في TTC الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. بعد تلطيخ TTC ، يظهر بوصفه منطقة infracted الأنسجة (غير ملوثين) ابيض المحاذية للقرميد أحمر (قابلة للحياة) الأنسجة (الشكل 1).
    4. يتم تصوير المسلسل المقاطع باستخدام الكاميرا الرقمية ومنطقة احتشاء يقاس مع صورة برنامج J.
    5. تقاس مساحة احتشاء (أبيض ، غير ملوثين) ، ومنطقة نصف الكرة المماثل (الأبيض والطوب الأحمر ، الملون) ، ومنطقة نصف الكرة الأرضية المقابل (الطوب الأحمر ، الملون) لكل مقطع. يتم حساب حجم بجمع المناطق ممثل في جميع أقسام وضرب من قبل شريحة سمك. بعد تصحيح للذمة ، ويحسب حجم احتشاء على النحو التالي : 9
      تصحيح حجم احتشاء (CIV) ، ٪ = [حجم الكرة الأرضية المقابل -- (المماثل حجم نصف الكرة الغربي -- حجم احتشاء)] حجم الكرة الأرضية / المقابل × 100

    6. ممثل النتائج

    بعد انسداد وضخه عبر عن MCA CCA اليسار إلى نقص التروية الدماغية إقامة عابرة ، يتم التضحية الحيوانات والملون أدمغتهم مقطوع coronally مع TTC لتقييم حجم احتشاء (الشكل 1).

    الشكل 1
    الشكل 1. TTC الملطخة المسلسل أقسام الدماغ الاكليلية (2 ملم) من الفئران تعرض لانسداد MCA.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

نموذج MCAO هو نموذج يثبت أن يعيد نقص التروية الدماغية في أنواع الفئران. كان أول من استخدم هذا النموذج في الجرذان والفئران بعد ذلك إلى تكييف. تجنب قطع القحف للقضاء على نفوذ التلاعب جراحية في الدماغ بالدم نفاذية الجدار والضغط داخل القحف هو الاستفادة من هذه التقنية. ومع ذلك ، يمكن أن العديد من المتغيرات ، مثل سلالة ذات الصلة الاختلافات 10 ، حجم غيض خياطة 11 ، انسداد مدة 6 ، 12 درجة حرارة الجسم ، والتخدير 13 ، وغيرها من العوامل تؤدي إلى عدم تناسق في حجم احتشاء في هذا النموذج.
هناك تفاصيل تقنية محددة تضمن أن نذكر :

  1. سوف طلاء نهاية خياطة إنشاء الدرز على نحو سلس ويمكن التحكم عن الاغلاق في MCA مع خطر انثقاب انخفض.
  2. فصل بدقة وتأمين العصب المبهم من الشرايين المجاورة بحيث لا يقتصر ذلك عن غير قصد في الدرز ذوي الياقات البيضاء. تأكد من استخدام اثنين من ذوي الياقات الغرز لتجنب النزيف إلى الوراء من خلال بضع الشريان اثناء صعوده خياطة وتشديد الاغلاق منهم بلطف لتجنب صدمة جدار الشرايين.
  3. الشريان الحنكي يحيد عن ICA بعد التشعب التقييم القطري المشترك. لتجنب الانحراف غيض من الدرز تصاعدي في الشريان الحنكي بدلا من ICA ، إعداد النظام الأساسي الخاص بك الجراحية للحفاظ على الرأس والرقبة الماوس في اتجاه مستقيم. هذا الانحراف هو شائع في كل من لونجا كويزومي وتقنية ، لذلك يجب توخي الحذر في أي الإجراء.
  4. الليزر دوبلر flowmetry هو وسيلة لمراقبة الوقت الحقيقي من تدفق الدم في مناطق تشريحية مختلفة ، ويتم تطبيقها في تجربتنا لقياس تدفق الدم في منطقة من الدماغ عبر توفيره MCA. لأنه يزيد بشكل كبير من الدقة لتحديد المواقع خياطة ، وبالتالي يضمن الحصول على نتائج متسقة. هذا هو ميزة لاحظت خلال تقنيات أقل دقة لقياس طول الخيط يمكن إدراجه ، وهو عرضة للتدخل من الاختلافات التشريحية.
  5. وهناك زيادة مؤقتة في flowmetry دوبلر الليزر بينما إدراج خياطة الخاص من خلال التقييم القطري الموحد والتحالف يضمن أنك تتحرك في الاتجاه الصحيح وعلى مقربة من فوهة MCA.
  6. الشريان القذالي في معظم الأحيان ينشأ من اللجنة الاقتصادية لأفريقيا القريبة (على الرغم من بعض الأحيان من ICA) في اتجاه الخلفي. وينبغي التعرف عليه (في بعض الحالات ligated) لتجنب الارتباك في وقت لاحق في حين إدراج خياطة.
  7. لتقليل التباين من احتشاء ، والحفاظ على درجة حرارة الجسم ثابتة الماوس أثناء الجراحة ، وتجنب انخفاض حرارة الجسم بعد الجراحة.
  8. استخدام TTC تلطيخ تصل إلى 72 ساعة بعد الجراحة MCAO لتحليل حجم احتشاء مناسب. لفترة أطول من النقاط الزمنية بقاء استخدام أساليب أخرى مثل تلطيخ تلطيخ البنفسج cresyl لتحديد حجم احتشاء.
  أسلوب كويزومي لونغا لأسلوب
موقع الإدراج خياطة المماثل الشريان السباتي المشترك المماثل الشريان السباتي الخارجي
الشرياني تضحية دائمة الشرايين السباتية والشريان السباتي الخارجي الشريان السباتي الظاهر
مخاطر قاتلة جراحة داخلية تمزق الشرايين / نزف أقل قلق مزيد من القلق
إمكانية تحويل خياطة في الشريان الحنكي نعم نعم
الوقت الإجرائية أسرع عموما عموما يعد
الليزر دوبلر Flowmetry : انخفاض النسبة المئوية من خط الأساس > = 80 ٪ > = 80 ٪
الليزر دوبلر Flowmetry : انسداد / ضخه الاتجاه
  • قطرتين من خط الأساس خلال إجراء إطباق
  • قفزة واحدة أثناء إجراء ضخه
  • قطرتين من خط الأساس خلال إجراء إطباق
  • يقفز اثنين أثناء إجراء ضخه

الجدول 1. مقارنة بين طريقتين لانسداد الشريان داخل اللمعة منتصف الدماغي (MCAO) في الفئران

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب يعلن أن لديهم أي تضارب في المصالح.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Male C57BL/6 mice Animal Harlan Laboratories 20-26 grs
Dissection microscope Microscope Leica Microsystems 6.3:1 zoom
Fiber optic illuminator Illuminator TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA FO1–-150
Isoflurane Anesthesia Baxter Internationl Inc. 1001936060
SuperCut Iris scissor, straight Surgical tool World Precision Instruments, Inc. 14218
Vannas micro-scissor, straight Surgical tool World Precision Instruments, Inc. 14003
Dumont fine tip forceps Surgical tool World Precision Instruments, Inc. 503290
Vessel clip Surgical tool World Precision Instruments, Inc. 14120
High Frequency Desiccator 900 Surgical tool World Precision Instruments, Inc. 500397
7-0 surgical Nylon monofilament suture Suture Ethicon Inc. 1647G Suture for occlusion
7-0 surgical Silk suture Suture Ethicon Inc. 7733G Suture for ligation
Silicone RTV adhesive Silicone rubber World Precision Instruments, Inc. 1571
Vetbond Tissue adhesive 3M 70200746587
Puralube Vet Ointment Eye ointment Pharmaderm Animal Health
Buprenorphine hydrochlorode Analgesics Hospira Inc. NDC 0409-2012-32
Thermal Cautery Unit World Precision Instruments, Inc. 501292
PeriFlux System 5000 TCD flowmetry Perimed
BAT-12 Rectal thermometer World Precision Instruments, Inc. BAT-12R
T/PUMP, TP600 Thermal blanket Gaymar Industries
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Reagent Sigma-Aldrich T8877
Mice brain matrix slicer Brain slicer Zivic Instruments BSMAS001-1

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).
  2. Lloyd-Jones, D. Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 119, e21-e181 (2009).
  3. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).
  4. Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).
  5. Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse. Neurol Res. 19, 641-648 (1997).
  6. Fujii, M. Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).
  7. Bederson, J. B. Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats. Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).
  8. Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury. Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).
  9. Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy. J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).
  10. Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice. Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).
  11. Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes. Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).
  12. Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism? Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).

Comments

5 Comments

  1. If you have any questions regarding this article, please contact Saeed Ansari at saeedansari81@yahoo.com.

    Reply
    Posted by: Hassan A.
    June 6, 2011 - 10:17 AM
  2. Dear Saeed Ansari,

    In the video we see a viscous, gel like material to attached the laser doppler probe to the cranium. We see Vetbond in the materials and have see in Transonics literature that tissue adhesive can be used to attach the probes. We tried, but the probe did not stay fastened. Our Vetbond is not viscous.

    Does 3M make a viscous vetbond?

    What do you recommend?

    Thanks,
    Steve

    Steve Whitesall, PPC & CVC Microsurgery Lab Manager
    7623 MSII
    phone: 734-615-6906
    26-254C NCRC
    phone: 734-763-0516

    Reply
    Posted by: Steve W.
    January 28, 2014 - 4:23 PM
  3. What is the catalog # of the probe and the microtip used for Laser Doppler?

    Reply
    Posted by: Weam S.
    July 1, 2013 - 4:58 PM
  4. We are having problems with MCAO. We found that upon reperfusion, the blood flow is increased beyond baseline (e.g. 300% of baseline). What can cause this problem?
    Also, what is the general criteria for successful occlusion (80% blood flow is occluded?)?
    What is the criteria for successful reperfusion (back to 100% of baseline)?
    Thx
    Kim Chan

    Reply
    Posted by: Kim C.
    May 19, 2015 - 5:01 AM
  5. Could you please tell what is the applicator (the thing that can hold the clip and keep it open) used for such vessel clips? Thanks

    Reply
    Posted by: Omar E.
    July 13, 2018 - 3:19 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics