מיתוס מאפשר זיהוי רגיש של אינטראקציות חולף ויציב בין חלבונים לידי ביטוי cerevisiae אורגניזם מודל Saccharomyces. זה כבר מיושם בהצלחה מחקר אקסוגניים ושמרים חלבונים בממברנה נפרד על מנת לזהות שותפים באינטראקציה שלהם באופן תפוקה גבוהה.
חשיבות ביולוגית קליניים היסוד של חלבונים בממברנה נפרד מתבקש הפיתוח של מערכת שמרים מבוססי זיהוי תפוקה גבוהה של חלבונים אינטראקציות (PPI) עבור באורך מלא חלבונים הטרנסממברני. לשם כך, פיתח את המעבדה שלנו שמרים מפוצל היוביקוויטין ממברנה המבוססת שני היברידי (מיתוס) של המערכת. טכנולוגיה זו מאפשרת לגילוי רגיש של אינטראקציות חלבון חולף ויציבה באמצעות<em> Saccharomyces cerevisiae</em> כמו הפונדקאי. מיתוס מנצל התצפית כי היוביקוויטין ניתן להפריד לשתי moieties יציב: חצי C-טרמינל של שמרים היוביקוויטין (C<sub> UB</sub>) ואת החצי N-מסוף של מחצית היוביקוויטין (N<sub> UB</sub>). במיתוס, עיקרון זה הוא מותאם לשימוש כ 'חיישן' של חלבונים אינטראקציות. בקצרה, חלבון אינטגרלי בממברנה הפיתיון הוא התמזגו ל-C<sub> UB</sub> אשר קשורה גורם שעתוק מלאכותית. חלבונים Prey, או בפורמט הפרט או לספריה, הם התמזגו עם N<sub> UB</sub> מחצית. האינטראקציה בין חלבון הפיתיון וטרף מוביל הכינון מחדש של moieties היוביקוויטין, ויצרו באורך מלא "פסאודו היוביקוויטין" מולקולה. מולקולה זו בתורו מוכר על ידי האנזימים deubiquitinating cytosolic, וכתוצאה מכך המחשוף של גורם שעתוק, ואינדוקציה הבאות של ביטוי גנים הכתב. המערכת ניתנת להתאמה מאוד, במיוחד מתאימים כדי ההקרנה תפוקה גבוהה. זה כבר עובד בהצלחה לחקור אינטראקציות באמצעות חלבונים בממברנה בלתי נפרד מן שמרים והן אורגניזמים אחרים.
מיתוס היא המערכת הראשונה תפוקה גבוהה המאפשרת זיהוי של אינטראקציות בין באורך מלא חלבונים בממברנה ו cytosolic או קרום הנכנס שותפים. זה כבר נעשה שימוש כדי ללמוד חלבון קרום מתוך מגוון רחב של אורגניזמים [3-7]. יש, עם זאת, פרטים ספציפיים כי ייתכן שיהיה צורך בחנו כדי להבטיח את החלב?…
The authors have nothing to disclose.
ברצוננו להודות אדמונדס שחר לקריאה ביקורתית של כתב היד הזה. המעבדה Stagljar נתמכת על ידי קרנות מקרן קנדה עבור חדשנות (CFI), המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR), קרן לב ושבץ, האגודה למלחמה בסרטן הקנדי, נוברטיס.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Polyethenlene Glycol (PEG3350) | Bioshop | PEG335 | ||
Lithium Acetate Bihydrate | Bioshop | LIA001 | ||
X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-b-D-galactopyranoside) | Bioshop | XGA001 | ||
N`,N-dimethyl formamide | Bioshop | DMF 451 | ||
3-amino-1,2,4-triazole (3-AT) | Bioshop | ATT124 | ||
Sodium phosphate dibasic | Bioshop | SPD307 | ||
Sodium phosphate monobasic | FisherBiotech | BP329-500 | ||
Salmon Sperm DNA | VWR | CA80601-120 | ||
D-Glucose | Bioshop | GLU501 | ||
LB Broth LENOX | Bioshop | LBL405 | ||
Yeast Nitrogen Base | Bioshop | YNB406 | ||
Yeast Extract | Bioshop | YEX401 | ||
Peptone | Beckton Dickinson | 211677 | ||
Bio-Tryptone | Bioshop | TRP402 | ||
Adenine Sulphate | Bioshop | ADS201 | ||
L-Uracil | Bioshop | URA241 | ||
L-Threonine | Bioshop | THR002 | ||
L-Histidine | Bioshop | HIS200 | ||
L-Methionine | Bioshop | MET222 | ||
L-Valine | Bioshop | VAL201 | ||
L-Phenylalanine | Bioshop | PHA302 | ||
L-Isoleucine | Bioshop | ISO910 | ||
L-Tyrosine | Bioshop | TYR333 | ||
L-Leucine | Bioshop | LEU222 | ||
L-Arginine | Bioshop | ARG006 | ||
L-Tryptophane | FisherBiotech | BP395-100 | ||
L-Lysine | Bioshop | LYS101 | ||
L-Alanine | FisherBiotech | BP369-100 | ||
Agar | Bioshop | AGR001 | ||
Soda Lime Galss Beads | BioSpec Product | 11079105 | ||
Sodium Chloride | Bioshop | SLD002 |