मिथकः क्षणिक और स्थिर मॉडल जीव Saccharomyces cerevisiae में व्यक्त कर रहे हैं कि प्रोटीन के बीच बातचीत के संवेदनशील पता लगाने की अनुमति देता है. यह सफलतापूर्वक किया गया है exogenous और खमीर अभिन्न झिल्ली प्रोटीन के अध्ययन के क्रम में एक उच्च throughput ढंग से उनकी बातचीत भागीदारों की पहचान करने के लिए लागू है.
अभिन्न झिल्ली प्रोटीन के मौलिक जैविक और नैदानिक महत्व पूर्ण लंबाई transmembrane प्रोटीन के लिए प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत (पीपीआई) के उच्च throughput पहचान के लिए एक खमीर आधारित प्रणाली के विकास को प्रेरित किया. यह अंत करने के लिए, हमारी प्रयोगशाला विभाजन ubiquitin आधारित झिल्ली (मिथक) खमीर दो संकर प्रणाली विकसित की है. इस तकनीक क्षणिक और स्थिर प्रोटीन का उपयोग कर बातचीत के संवेदनशील पता लगाने के लिए अनुमति देता है<em> Saccharomyces cerevisiae</em> एक मेजबान जीव के रूप में. मिथक अवलोकन है कि दो स्थिर moieties में ubiquitin अलग किया जा सकता का लाभ लेता है: खमीर के आधे सी टर्मिनल (ubiquitin सी<sub> यूबी</sub>) और एन टर्मिनल ubiquitin आधा भाग के आधे (एन<sub> यूबी</sub>). मिथक में, इस सिद्धांत का उपयोग करने के लिए प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत का एक 'सेंसर' के रूप में अनुकूलित है. संक्षेप में, अभिन्न झिल्ली चारा प्रोटीन सी जुड़े हुए है<sub> यूबी</sub> जो एक कृत्रिम प्रतिलेखन कारक के लिए जुड़ा हुआ है. शिकार, प्रोटीन, या तो व्यक्तिगत या लायब्रेरी के प्रारूप में, एन के लिए जुड़े हुए हैं<sub> यूबी</sub> आधा भाग. चारा और शिकार के बीच बातचीत प्रोटीन ubiquitin moieties के पुनर्गठन की ओर जाता है है, एक पूर्ण लंबाई 'छद्म' ubiquitin अणु बनाने. इस अणु साइटोसोलिक deubiquitinating एंजाइमों द्वारा मान्यता प्राप्त बारी में है, प्रतिलेखन कारक है, और रिपोर्टर जीन की अभिव्यक्ति के बाद प्रेरण की दरार में जिसके परिणामस्वरूप. उच्च अनुकूलनीय प्रणाली है, और विशेष रूप से उच्च throughput प्रदर्शन के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है. यह सफलतापूर्वक दोनों खमीर और अन्य जीवों से अभिन्न झिल्ली प्रोटीन का उपयोग कर बातचीत की जांच करने के लिए नियोजित किया गया है.
मिथक पहली उच्च throughput सिस्टम है कि पूरी लंबाई झिल्ली प्रोटीन और साइटोसोलिक या झिल्ली ही सीमित भागीदारों के बीच बातचीत की पहचान की अनुमति देता है. [3-7] जीवों की एक सीमा से झिल्ली प्रोटीन का अध्ययन करने के लि?…
The authors have nothing to disclose.
हम इस पांडुलिपि की एक महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए डॉन एडमंड्स को धन्यवाद देना चाहूंगा. Stagljar प्रयोगशाला अभिनव (CFI), स्वास्थ्य अनुसंधान (CIHR) के लिए कनाडा संस्थान, दिल और स्ट्रोक फाउंडेशन, कनाडा के कैंसर सोसायटी, और नोवार्टिस के लिए कनाडा फाउंडेशन से धन के द्वारा समर्थित है.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Polyethenlene Glycol (PEG3350) | Bioshop | PEG335 | ||
Lithium Acetate Bihydrate | Bioshop | LIA001 | ||
X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-b-D-galactopyranoside) | Bioshop | XGA001 | ||
N`,N-dimethyl formamide | Bioshop | DMF 451 | ||
3-amino-1,2,4-triazole (3-AT) | Bioshop | ATT124 | ||
Sodium phosphate dibasic | Bioshop | SPD307 | ||
Sodium phosphate monobasic | FisherBiotech | BP329-500 | ||
Salmon Sperm DNA | VWR | CA80601-120 | ||
D-Glucose | Bioshop | GLU501 | ||
LB Broth LENOX | Bioshop | LBL405 | ||
Yeast Nitrogen Base | Bioshop | YNB406 | ||
Yeast Extract | Bioshop | YEX401 | ||
Peptone | Beckton Dickinson | 211677 | ||
Bio-Tryptone | Bioshop | TRP402 | ||
Adenine Sulphate | Bioshop | ADS201 | ||
L-Uracil | Bioshop | URA241 | ||
L-Threonine | Bioshop | THR002 | ||
L-Histidine | Bioshop | HIS200 | ||
L-Methionine | Bioshop | MET222 | ||
L-Valine | Bioshop | VAL201 | ||
L-Phenylalanine | Bioshop | PHA302 | ||
L-Isoleucine | Bioshop | ISO910 | ||
L-Tyrosine | Bioshop | TYR333 | ||
L-Leucine | Bioshop | LEU222 | ||
L-Arginine | Bioshop | ARG006 | ||
L-Tryptophane | FisherBiotech | BP395-100 | ||
L-Lysine | Bioshop | LYS101 | ||
L-Alanine | FisherBiotech | BP369-100 | ||
Agar | Bioshop | AGR001 | ||
Soda Lime Galss Beads | BioSpec Product | 11079105 | ||
Sodium Chloride | Bioshop | SLD002 |