神話では、モデル生物出芽酵母で発現されるタンパク質間の過渡と安定な相互作用を高感度に検出することができます。それが正常にハイスループットな方法でそれらの相互作用パートナーを同定するために、外因性および酵母内在性膜タンパク質の研究に適用されています。
内在性膜タンパク質の基本的な生物学的及び臨床的重要性は、完全長の膜貫通型タンパク質のタンパク質間相互作用(PPI)の高スループットを識別するための酵母ベースのシステムの開発を促した。この目的のために、私たちの研究室では、スプリットユビキチン系膜酵母ツーハイブリッド(神話)システムを開発した。この技術は使用して過渡安定したタンパク質相互作用の高感度な検出が可能<em>サッカロマイセスセレビシエ</em>宿主生物として。神話は、ユビキチンが2つの安定した部分に分離することができるという観察を利用しています:酵母ユビキチン(CのC末端側半分を<sub> UB</sub>)とユビキチン部分のN末端側半分(N<sub> UB</sub>)。神話では、この原則は、タンパク質 – タンパク質相互作用の"センサー"として使用するために適合されている。簡単に言えば、内在性膜baitタンパク質は、Cに融合される<sub> UB</sub>人工的な転写因子にリンクされている。獲物のタンパク質は、個々のまたはライブラリの形式のどちらかで、Nに融合させ<sub> UB</sub>部分。餌と獲物との間のタンパク質相互作用は、フルレングス"疑似ユビキチン"分子を形成し、ユビキチン部分の再構成につながる。この分子は、転写因子の開裂、およびレポーター遺伝子の発現のその後の誘導の結果、細胞質脱ユビキチン化酵素によって認識される順番になります。システムは、高度な適応性であり、特にハイスループットスクリーニングに適しています。それが正常酵母と他の生物の両方から内在性膜タンパク質を使用して相互作用を調査するために採用されている。
神話は、完全長の膜タンパク質と細胞質または膜結合パートナー間の相互作用の同定を可能にする最初のハイスループットシステムです。それは生物[3-7]の範囲から膜タンパク質を研究するために使用されています。タンパク質の-利益を確保するために精査する必要があるかもしれない具体的な詳細は、しかし、存在する神話と一緒に勉強するために適している。
多く?…
The authors have nothing to disclose.
我々は、この原稿の重要な読書のために夜明けのエドモンズに感謝します。 Stagljarラボは、イノベーションのためのカナダの財団(CFI)、健康研究(CIHR)、心臓や脳卒中財団、カナダの癌協会、およびノバルティスのためのカナダの研究所からの資金によってサポートされています。