Microinjection des cellules infirmières de Drosophila : une méthode d’accouchement intracellulaire

Abstract

Source : Catrina, I. E., et coll. Visualisant et suivant les ARNM endogènes dans les chambres d’oeufs live drosophila melanogaster . J. Vis. Exp. (2019).

En raison de leur grande taille et de leur organisation relativement simple, les cellules infirmières de Drosophila conviennent parfaitement aux études d’imagerie cellulaire vivante. Cette vidéo décrit une méthode de microinjection pour l’administration de composés exogènes dans les cellules, et le protocole en vedette démontre la procédure avec des sondes oligonucléotides fluorescentes appelées balises moléculaires (MBs) utilisées pour visualiser les transcriptions endogènes de l’ARNm.

Protocol

Ce protocole est extrait de Catrina et coll.,Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers, J. Vis. Exp. (2019). 1. Conception de MBs pour l’imagerie cellulaire en direct Pliez la séquence d’ARN cible pour prédire la structure secondaire de la cible de l’ARNm à l’aide de la « forme d’ARN » du serveur mfold <a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_bla…

Materials

Spectrofluorometer	Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon	n/a	Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette	Fireflysci (former Precision Cells Inc.)	701MFL
Dumont #5 tweezer	World Precision Instruments	501985	Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700	Sigma-Aldrich	H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm	VWR	48393-048
Dissecting microscope	Leica MZ6 Leica Microsystems Inc.	n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad	Genesee Scienific	59-114
Tris-HCL pH 7.5	Sigma-Aldrich	1185-53-1
Magnesium chloride	Sigma-Aldrich	7791-18-6
NaCl	Sigma-Aldrich	7647-14-5
Spinning disc confocal microscope	Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc.	n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera	Hamamatsu	n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator	Eppendorf Inc.	920000037
FemtoJet Microinjector	Eppendorf Inc.	920010504
Injection needle: Femtotips II	Eppendorf Inc.	930000043
Loading tip: 20 μL Microloader	Eppendorf Inc.	930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm	VWR	48393-026; 48393-172
Dry yeast	Any grocery store	n/a
Computer, > 20 GB RAM			Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing