Este video describe imágenes in vivo de calcio en neuronas de Drosophila usando GCaMP. El clip de protocolo destacado muestra cómo registrar los cambios en la fluorescencia GCaMP de las neuronas corporales de hongos durante un experimento de acondicionamiento olfativo.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Hancock et al., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019). 1. Imágenes in vivo de calcio Utilice un microscopio multifotlón equipado con un láser infrarrojo y un objetivo de inmersión en agua (véase Tabla de materiales),instalado en una mesa aislada por vibraciones. Para la visualización de indicadores de calcio basados en G…
Materials
1-Octen-3-ol
Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA
O5284
Chemical used as odorant
3-Octanol
Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA
218405
Chemical used as odorant
4-Methylcyclohexanol
Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA
153095
Chemical used as odorant
Bandpass filter for EGFP (525/50 nm)
Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
Mineral oil
Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA
M8410
Used as diluent for odorants
Mode-locked Ti-Sapphire laser Chameleon Vision 2
Coherent Inc., Santa Clara, CA, USA
Tunable infrared femtosecond laser
Multiphoton Microscope LSM 7MP equipped with BiG detectors
Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
Multiphoton microscope, multiple companies provide similar devices.
Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) water immersion objective
Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
421452-9900-000
Objective W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Visual Basics of Applicatons (VBA) software to receive a trigger from the odor-delivery device and the electric shock application device (power supply) to interact with the ZEN software from Zeiss that controls the microscope