Drosophila In Vivo Imagem de cálcio: um método para imagem funcional da atividade neuronal

Abstract

Fonte: Hancock, C. E., et al. In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity induced em Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve imagens in vivo de cálcio em neurônios Drosophila usando GCaMP. O clipe de protocolo em destaque mostra como registrar alterações na fluorescência GCaMP de neurônios corporais de cogumelos durante um experimento de condicionamento olfativo.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Hancock et al., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity induced em Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019). 1. Imagem de cálcio in vivo Use um microscópio multifotográfico equipado com um laser infravermelho e um objetivo de imersão em água (ver Tabela de Materiais),instalado em uma mesa isolada de vibração. Para a visualização de indicadores de cálcio baseados e…

Materials

1-Octen-3-ol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	O5284	Chemical used as odorant
3-Octanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	218405	Chemical used as odorant
4-Methylcyclohexanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	153095	Chemical used as odorant
Bandpass filter for EGFP (525/50 nm)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
Mineral oil	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	M8410	Used as diluent for odorants
Mode-locked Ti-Sapphire laser Chameleon Vision 2	Coherent Inc., Santa Clara, CA, USA		Tunable infrared femtosecond laser
Multiphoton Microscope LSM 7MP equipped with BiG detectors	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany		Multiphoton microscope, multiple companies provide similar devices.
Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) water immersion objective	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany	421452-9900-000	Objective W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Visual Basics of Applicatons (VBA) software to receive a trigger from the odor-delivery device and the electric shock application device (power supply) to interact with the ZEN software from Zeiss that controls the microscope	Custom-written and available upon request	n.a.	n.a.