Drosophila In Vivo Kalciumavbildning: En metod för funktionell avbildning av neuronal aktivitet

Abstract

Källa: Hancock, C. E., et al. In Vivo Optisk kalciumavbildning av inlärningsinducerad synaptisk plasticitet i Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Denna video beskriver in vivo kalcium imaging i Drosophila nervceller med GCaMP. Det presenterade protokollklippet visar hur man registrerar förändringar i GCaMP fluorescens från svampkroppsneuroner under ett luktkonditioneringsexperiment.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Hancock et al., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Inducerad Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019). 1. Kalciumavbildning in vivo Använd ett multifotonmikroskop utrustat med en infraröd laser och ett mål för vattensänkning (se Materialförteckning),installerat på ett vibrationsisolerat bord. För visualisering av GFP-baserade kalciumindikatorer, ställ in lase…

Materials

1-Octen-3-ol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	O5284	Chemical used as odorant
3-Octanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	218405	Chemical used as odorant
4-Methylcyclohexanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	153095	Chemical used as odorant
Bandpass filter for EGFP (525/50 nm)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
Mineral oil	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	M8410	Used as diluent for odorants
Mode-locked Ti-Sapphire laser Chameleon Vision 2	Coherent Inc., Santa Clara, CA, USA		Tunable infrared femtosecond laser
Multiphoton Microscope LSM 7MP equipped with BiG detectors	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany		Multiphoton microscope, multiple companies provide similar devices.
Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) water immersion objective	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany	421452-9900-000	Objective W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Visual Basics of Applicatons (VBA) software to receive a trigger from the odor-delivery device and the electric shock application device (power supply) to interact with the ZEN software from Zeiss that controls the microscope	Custom-written and available upon request	n.a.	n.a.