Denne video beskriver en metode til at dissekere gonads fra voksne C. elegans hermafroditter, hvilket resulterer i væv, der er egnede til immunostaining og fluorescerende billeddannelse.
Protocol
Denne protokol er et uddrag fra Gervaise og Arur, Rumlig og Tidsmæssig Analyse af Aktiv ERK i C. elegans Germline. J. Vis. Exp. (2016). 1. Dissektion af voksne orme til opnåelse af gonads Vælg 100 – 150 WT (N2) eller den ønskede genotype af orme på det ønskede og specifikke udviklingsstadium (L1, L2, L3, L4, voksen osv.)</…
Materials
Flat bottom glass watch dish
Agar Scientific
AGL4161
We use glass because dissected gonads often stick to plastic
25 G needles
BD PrecisionGlide
305122
Syringes (could be 1 or 5 mL)
BD Syringes
1 mL: BD 309659
Microscope slides (25 x 75 x 1.0 mm)
Fisherbrand
12-550-343
Clinical bench top centrifuge
*M9 solution
Levamisole
Sigma
L9756
*M9 Buffer Recipe
3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 mL 1 M MgSO4, H2O to 1 L.