Denna video beskriver en metod för att dissekera gonads från vuxna C. elegans hermafroditer, vilket resulterar i vävnader som är lämpliga för immunostaining och fluorescerande avbildning.
Protocol
Detta protokoll är ett utdrag ur Gervaise och Arur, Spatial and Temporal Analysis of Active ERK i C. elegans Germline. J. Vis. Exp. (2016). 1. Dissekering av vuxna maskar för att få gonads Välj 100 – 150 WT (N2) eller önskad genotyp av maskar i önskat och specifikt utvecklingsstadium (L1, L2, L3, L4, vuxen, etc.)i 100…
Materials
Flat bottom glass watch dish
Agar Scientific
AGL4161
We use glass because dissected gonads often stick to plastic
25 G needles
BD PrecisionGlide
305122
Syringes (could be 1 or 5 mL)
BD Syringes
1 mL: BD 309659
Microscope slides (25 x 75 x 1.0 mm)
Fisherbrand
12-550-343
Clinical bench top centrifuge
*M9 solution
Levamisole
Sigma
L9756
*M9 Buffer Recipe
3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 mL 1 M MgSO4, H2O to 1 L.