Solid Plate-based dieetbeperking in Caenorhabditis elegans</em
Summary
Hier presenteren wij een protocol voor het uitvoeren van solide plaat op basis van dieetbeperking in<em> C. elegans</em> Met gedode bacteriën.
Abstract
Vermindering van de voedselinname, zonder ondervoeding of honger is bekend dat de levensduur te verhogen en het begin van verschillende leeftijd gerelateerde ziekten in een breed scala aan soorten, waaronder zoogdieren vertraging. Het veroorzaakt ook een afname in lichaamsgewicht en de vruchtbaarheid, maar ook lagere niveaus van plasma glucose, insuline en IGF-1 in deze dieren. Deze behandeling wordt vaak aangeduid als calorische restrictie (DR) of calorische restrictie (CR). De nematode Caenorhabditis elegans heeft zich ontpopt als een belangrijk modelorganisme voor het bestuderen van de biologie van veroudering. Zowel de milieu-en genetische manipulaties zijn gebruikt om het model DR en hebben aangetoond dat de levensduur te verlengen in C. elegans. Echter, veel van de gerapporteerde DR studies in C. elegans werden gedaan door het propageren van dieren in vloeibare media, terwijl de meeste van de genetische studies in de verouderende gebied werden gedaan op de standaard solide agar in petri-platen. Hier presenteren wij een DR-protocol met behulp van standaard solid NGM agar-based bord met gedode bacteriën.
Protocol
Discussion
Dieetbeperking (DR) is bekend dat de levensduur te verhogen en het begin van verschillende leeftijd gerelateerde ziekten vertraging in een breed scala aan soorten, waaronder zoogdieren 5-7. Zowel de milieu-en genetische manipulaties zijn gebruikt om het model DR in C. elegans, waaronder het kweken van wormen in een semi-gedefinieerde vloeibaar medium 8,9, verdunning van de bacteriële voedselbron in vloeibaar medium 10-12, en het gebruik van het gedrag van mutanten die zich voed…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door een piloot prijs van de Nathan Shock Center (P30 AG13283) en een R01-subsidie (R01 AG028516) van het National Institute on Aging (NIA) naar A.-LH
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Carbenicillin | Duchefa Biochemie | C0109.25 | Dissolved in water. |
| Kanamycin | Roche | 10106801001 | Dissolved in water. |
| Bacto-peptone | Becton, Dickinson and company | DF0118072 | |
| Bacto-tryptone | Becton, Dickinson and company | DF0123075 | |
| Bacto-yeast extract | Becton, Dickinson and company | DF0127071 | |
| Agar | Becton, Dickinson and company | DF00145170 | |
| Sterile culture tube | USA Scientific | 1485-0810 | |
| Spectrophotometer | Amersham Biosciences | Gene Quant pro | Amersham is now part of GE Healthcare. |
| Dissecting Microscope | Zeiss | Stemi 2000 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | Accuspin FR |
References
- Hsu, A. L., Murphy, C. T., Kenyon, C. Regulation of aging and age-related disease by DAF-16 and heat-shock factor. Science. 300, 1142-1145 (2003).
- Kenyon, C., Chang, J., Gensch, E., Rudner, A., Tabtiang, R. A C. elegans mutant that lives twice as long as wild type. Nature. 366, 461-464 (1993).
- Apfeld, J., Kenyon, C. Regulation of lifespan by sensory perception in Caenorhabditis elegans. Nature. 402, 804-809 (1999).
- Ching, T. T., Paal, A. B., Mehta, A., Zhong, L., Hsu, A. L. drr-2 encodes an eIF4H that acts downstream of TOR in diet-restriction-induced longevity of C. elegans. Aging Cell. 9, 545-557 (2010).
- Weindruch, R., Walford, R. . The Retardation of Aging and Disease by Dietary Restriction. , (1988).
- Masoro, E. J. Subfield history: caloric restriction, slowing aging, and extending life. Sci Aging Knowledge Environ. , RE2-RE2 (2003).
- Masoro, E. J. Overview of caloric restriction and ageing. Mech Ageing Dev. 126, 913-922 (2005).
- Houthoofd, K. Axenic growth up-regulates mass-specific metabolic rate, stress resistance, and extends life span in Caenorhabditis elegans. Exp Gerontol. 37, 1371-1378 (2002).
- Houthoofd, K. No reduction of metabolic rate in food restricted Caenorhabditis elegans. Exp Gerontol. 37, 1359-1369 (2002).
- Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
- Bishop, N. A., Guarente, L. Two neurons mediate diet-restriction-induced longevity in C. elegans. Nature. 447, 545-549 (2007).
- Panowski, S. H., Wolff, S., Aguilaniu, H., Durieux, J., Dillin, A. PHA-4/Foxa mediates diet-restriction-induced longevity of C. elegans. Nature. 447, 550-555 (2007).
- Lakowski, B., Hekimi, S. The genetics of caloric restriction in Caenorhabditis elegans. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13091-13096 (1998).
- Kaeberlein, T. L. Lifespan extension in Caenorhabditis elegans by complete removal of food. Aging Cell. 5, 487-494 (2006).
- Greer, E. L. An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).
