Placa sólida baseada na restrição dietética Caenorhabditis elegans</em
Summary
Aqui apresentamos um protocolo para a realização de restrição placa baseada em sólidos na dieta<em> C. elegans</em> Com bactérias mortas.
Abstract
Redução da ingestão alimentar sem desnutrição ou fome é conhecido por aumentar a longevidade ea retardar o aparecimento de várias doenças relacionadas à idade em uma ampla gama de espécies, incluindo mamíferos. Ela também provoca uma diminuição no peso corporal e fertilidade, bem como níveis mais baixos de glicose plasmática, insulina e IGF-1 nesses animais. Este tratamento é muitas vezes referida como restrição dietética (DR) ou a restrição calórica (CR). O nemátodo Caenorhabditis elegans tem emergido como um organismo modelo importante para o estudo da biologia do envelhecimento. Manipulações ambientais e genéticos têm sido usados para modelar DR e têm mostrado que prolonga a vida em C. elegans. No entanto, muitos dos estudos relatados DR em C. elegans foram feitas por animais propagação em meios líquidos, enquanto a maioria dos estudos genéticos na área do envelhecimento foram feitos no ágar padrão sólido em placas de petri. Aqui apresentamos um protocolo DR usando o padrão sólido NGM placa de ágar-base com as bactérias mortas.
Protocol
Discussion
Restrição dietética (DR) é conhecido por aumentar a longevidade ea retardar o aparecimento de várias doenças relacionadas à idade em uma ampla gama de espécies, incluindo mamíferos 5-7. Manipulações ambientais e genéticos têm sido usados para modelar DR em C. elegans, incluindo worms cultura em um meio semi-definido líquido 8,9, diluição da fonte de alimento de bactérias em meio líquido 10-12, e uso de mutantes comportamento que se alimentam em um ritmo m…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por um prêmio de piloto do Centro de Choque Nathan (P30 AG13283) e uma subvenção R01 (R01 AG028516) do Instituto Nacional do Envelhecimento (NIA) para A.-LH
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Carbenicillin | Duchefa Biochemie | C0109.25 | Dissolved in water. |
| Kanamycin | Roche | 10106801001 | Dissolved in water. |
| Bacto-peptone | Becton, Dickinson and company | DF0118072 | |
| Bacto-tryptone | Becton, Dickinson and company | DF0123075 | |
| Bacto-yeast extract | Becton, Dickinson and company | DF0127071 | |
| Agar | Becton, Dickinson and company | DF00145170 | |
| Sterile culture tube | USA Scientific | 1485-0810 | |
| Spectrophotometer | Amersham Biosciences | Gene Quant pro | Amersham is now part of GE Healthcare. |
| Dissecting Microscope | Zeiss | Stemi 2000 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | Accuspin FR |
References
- Hsu, A. L., Murphy, C. T., Kenyon, C. Regulation of aging and age-related disease by DAF-16 and heat-shock factor. Science. 300, 1142-1145 (2003).
- Kenyon, C., Chang, J., Gensch, E., Rudner, A., Tabtiang, R. A C. elegans mutant that lives twice as long as wild type. Nature. 366, 461-464 (1993).
- Apfeld, J., Kenyon, C. Regulation of lifespan by sensory perception in Caenorhabditis elegans. Nature. 402, 804-809 (1999).
- Ching, T. T., Paal, A. B., Mehta, A., Zhong, L., Hsu, A. L. drr-2 encodes an eIF4H that acts downstream of TOR in diet-restriction-induced longevity of C. elegans. Aging Cell. 9, 545-557 (2010).
- Weindruch, R., Walford, R. . The Retardation of Aging and Disease by Dietary Restriction. , (1988).
- Masoro, E. J. Subfield history: caloric restriction, slowing aging, and extending life. Sci Aging Knowledge Environ. , RE2-RE2 (2003).
- Masoro, E. J. Overview of caloric restriction and ageing. Mech Ageing Dev. 126, 913-922 (2005).
- Houthoofd, K. Axenic growth up-regulates mass-specific metabolic rate, stress resistance, and extends life span in Caenorhabditis elegans. Exp Gerontol. 37, 1371-1378 (2002).
- Houthoofd, K. No reduction of metabolic rate in food restricted Caenorhabditis elegans. Exp Gerontol. 37, 1359-1369 (2002).
- Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
- Bishop, N. A., Guarente, L. Two neurons mediate diet-restriction-induced longevity in C. elegans. Nature. 447, 545-549 (2007).
- Panowski, S. H., Wolff, S., Aguilaniu, H., Durieux, J., Dillin, A. PHA-4/Foxa mediates diet-restriction-induced longevity of C. elegans. Nature. 447, 550-555 (2007).
- Lakowski, B., Hekimi, S. The genetics of caloric restriction in Caenorhabditis elegans. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13091-13096 (1998).
- Kaeberlein, T. L. Lifespan extension in Caenorhabditis elegans by complete removal of food. Aging Cell. 5, 487-494 (2006).
- Greer, E. L. An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).
