Solid Plate-baserade dietrestriktioner i Caenorhabditis elegans</em
Summary
Här presenterar vi ett protokoll för att utföra Plattor-baserade dietrestriktioner i<em> C. elegans</em> Med dödade bakterier.
Abstract
Minskning av födointag utan undernäring eller svält är kända för att öka livslängd och fördröja uppkomsten av olika åldersrelaterade sjukdomar i ett brett spektrum av arter, inklusive däggdjur. Det orsakar också en minskning i kroppsvikt och fertilitet, samt lägre nivåer av plasmaglukos, insulin och IGF-1 hos dessa djur. Denna behandling är ofta som dietrestriktioner (DR) eller kalorimängden (CR). Nematoden Caenorhabditis elegans har vuxit fram som en viktig organism i forskningen för att studera åldrandets biologi. Både miljömässiga och genetiska manipulationer har använts för att modellera DR och har visat sig förlänga livslängden i C. elegans. Men många av de rapporterade DR studier i C. elegans gjordes av förökningsmaterial djur i flytande medier, medan de flesta av de genetiska studier på den åldrande fältet gjordes på den standard fast agar i petri plattor. Här presenterar vi ett DR-protokoll med vanliga fasta NGM agar-baserad plåt med dödade bakterier.
Protocol
Discussion
Dietrestriktioner (DR) är känd för att öka livslängd och fördröja uppkomsten av olika åldersrelaterade sjukdomar i ett brett spektrum av arter, inklusive däggdjur 5-7. Både miljömässiga och genetiska manipulationer har använts för att modellera DR i C. elegans, inklusive odling maskar i en semi-definierat flytande medium 8,9, utspädning av den bakteriella föda i flytande medium 10-12, och användning av beteenden mutanter som foder i en långsammare takt 13….
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av en pilot utmärkelse från Nathan Shock Center (P30 AG13283) och en R01 bidrag (R01 AG028516) från National Institute on Aging (NIA) till A.-LH
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Carbenicillin | Duchefa Biochemie | C0109.25 | Dissolved in water. |
| Kanamycin | Roche | 10106801001 | Dissolved in water. |
| Bacto-peptone | Becton, Dickinson and company | DF0118072 | |
| Bacto-tryptone | Becton, Dickinson and company | DF0123075 | |
| Bacto-yeast extract | Becton, Dickinson and company | DF0127071 | |
| Agar | Becton, Dickinson and company | DF00145170 | |
| Sterile culture tube | USA Scientific | 1485-0810 | |
| Spectrophotometer | Amersham Biosciences | Gene Quant pro | Amersham is now part of GE Healthcare. |
| Dissecting Microscope | Zeiss | Stemi 2000 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | Accuspin FR |
References
- Hsu, A. L., Murphy, C. T., Kenyon, C. Regulation of aging and age-related disease by DAF-16 and heat-shock factor. Science. 300, 1142-1145 (2003).
- Kenyon, C., Chang, J., Gensch, E., Rudner, A., Tabtiang, R. A C. elegans mutant that lives twice as long as wild type. Nature. 366, 461-464 (1993).
- Apfeld, J., Kenyon, C. Regulation of lifespan by sensory perception in Caenorhabditis elegans. Nature. 402, 804-809 (1999).
- Ching, T. T., Paal, A. B., Mehta, A., Zhong, L., Hsu, A. L. drr-2 encodes an eIF4H that acts downstream of TOR in diet-restriction-induced longevity of C. elegans. Aging Cell. 9, 545-557 (2010).
- Weindruch, R., Walford, R. . The Retardation of Aging and Disease by Dietary Restriction. , (1988).
- Masoro, E. J. Subfield history: caloric restriction, slowing aging, and extending life. Sci Aging Knowledge Environ. , RE2-RE2 (2003).
- Masoro, E. J. Overview of caloric restriction and ageing. Mech Ageing Dev. 126, 913-922 (2005).
- Houthoofd, K. Axenic growth up-regulates mass-specific metabolic rate, stress resistance, and extends life span in Caenorhabditis elegans. Exp Gerontol. 37, 1371-1378 (2002).
- Houthoofd, K. No reduction of metabolic rate in food restricted Caenorhabditis elegans. Exp Gerontol. 37, 1359-1369 (2002).
- Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
- Bishop, N. A., Guarente, L. Two neurons mediate diet-restriction-induced longevity in C. elegans. Nature. 447, 545-549 (2007).
- Panowski, S. H., Wolff, S., Aguilaniu, H., Durieux, J., Dillin, A. PHA-4/Foxa mediates diet-restriction-induced longevity of C. elegans. Nature. 447, 550-555 (2007).
- Lakowski, B., Hekimi, S. The genetics of caloric restriction in Caenorhabditis elegans. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13091-13096 (1998).
- Kaeberlein, T. L. Lifespan extension in Caenorhabditis elegans by complete removal of food. Aging Cell. 5, 487-494 (2006).
- Greer, E. L. An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).
