חדרי זרימת microfluidic חרוט על ידי photolithography מפוברק מ PDMS מוחלים לחקור התוצאות התפקודיות הקשורות בתפקוד EC ודלקת. בניסוי מייצג, את היכולת של מאמץ גזירה ההפרש לווסת הידבקות התא monocytic כדי הפעלת ציטוקינים EC monolayers באה לידי ביטוי.
Atherogenesis הוא potentiated על ידי הפרעות מטבוליות שתורמים למדינה מוגברת של דלקת מערכתית וכתוצאה מכך תפקוד האנדותל. עם זאת, שינויים תפקודיים מוקדמים האנדותל מסמנים כי רמת הסיכון של הפרט לא מוערכים ישירות קלינית לעזור האסטרטגיה מדריך טיפולי. יתר על כן, ויסות דלקת ידי ופרמטרים המודינמיים מקומיים תורם ההפצה הלא אקראית המרחבי של טרשת עורקים, אך המנגנונים קשה להתוות in vivo. אנו מתארים גישה מבוססת מעבדה על שבב כדי ההפרעות כמותית assay חילוף החומרים של אירועים דלקת בתאי אנדותל אנושיים (EC) ומונוציטים בתנאים תזרים מדויקות. שיטות סטנדרטיות של ליתוגרפיה רך משמשים microfabricate כלי הדם לתאי microfluidic כוזב (VMMC), אשר קשורים ישירות בתרבית monolayers EC. 1 מכשירים אלה יש את היתרון של שימוש בכמויות קטנות של חומרים כימיים תוךמתן במה הדמיה ישירות את האירועים דלקת קרום בבית של EC נחשף לשדה מוגדר היטב גזירה. יש לנו מיושם בהצלחה את המכשירים האלו לחקור ציטוקינים-2, שומנים בדם 3, 4 ו – 5 RAGE-Induced דלקת האנושי אבי העורקים EC (HAEC). כאן אנו מתעדים את השימוש VMMC לתא assay מתגלגל monocytic (THP-1) ומעצר על monolayers HAEC כי הם מותנים על פי מאפיינים גזירה דיפרנציאלי והופעל על ידי ציטוקינים דלקתיים TNF-α. מחקרים כגון אלה מספקים תובנה מכניסטית לתוך atherosusceptibility תחת גורמי סיכון מטבוליים.
אנו מתארים את השימוש במכשירים microfluidic PDMS להערכה על שבב של הפנוטיפ דלקתי האנדותל באמצעות הדמיה בזמן אמת הביטוי CAM ו הידבקות מונוציטים. היתרון העיקרי של הגישה שלנו טמון ביכולת לכמת את התוצאות הקשורות בתפקוד האנדותל בתאים שנחשפו מתווכים דלקתיים כגון ציטוקינים שומנים תז…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי NIH / NHLBI מענק R01 HL082689 לסקוט א סיימון אנתוני ג Passerini.
Item | Company | Catalogue Number |
100 x 20mm Petri Dishes | BD Falcon | 353003 |
Ethanol 95% | EMD Chemicals | EX0290-1 |
DPBS | Cellgro | 21-031-CV |
Type I Rat Tail Derived Collagen | Gibco | A10483-01 |
Human Aortic Endothelial Cells | Genlantis | PH30405A |
Antibiotic-Antimycotic Solution | Invitrogen | 15240-062 |
Endothelial BulletKit | Lonza | CC-4176 |
Endothelial Basal Media-2 | Lonza | CC-3156 |
10 ml Syringes | BD Falcon | 309604 |
Polyurethane tubing | Tygon | ABW0001 |
Leibovitz-15 Media | Gibco | 11415-069 |
Sylgard 184 Silicone Elastomer Base | Dow Corning | 184 |
Sylgard 184 Silicone Elastomer Curing Agent | Dow Corning | 184 |
SU8 Photoresist Master Wafer | UC Davis Pan Lab | N/A |
Eclipse TE200 Inverted Microscope | Nikon | Eclipse TE200 |
Syringe Pump | Harvard Apparatus | PHD2000 |
19 gauge hypodermic needle | Kendall | 8881 |
THP-1 Monocytic Cell Line | ATCC | TIB-202 |
HBSS (Hanks Buffered Saline Solution) with Ca2+/Mg2+ | Gibco | 14025-092 |
Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) | R&D Systems | 210-TA-010 |
Stromal Derived Factor – 1 (SDF-1) | R&D Systems | 350-NS-010 |
RPMI 1640 | Cellgro | 10-040-CV |
Human Serum Albumin (HSA) | ZLB Behring | NDC 0053-7680-32 |
Table 2. Specific reagents and equipment.