Summary

Aislamiento de linfocitos de ratón del tracto genital Mucosa

Published: September 03, 2012
doi:

Summary

Un modo eficaz de aislar los linfocitos de ratón tracto genital se describe. Este método tiene la ventaja de digestión enzimática y separación por gradiente de Percoll para permitir el aislamiento eficiente. Esta técnica es también adaptable a para su uso en otras especies

Abstract

Las superficies mucosas, incluso en los tractos gastrointestinales, urogenitales y respiratorias, ofrecen puertas de entrada para los patógenos, como los virus y las bacterias 1. Mucosas también son sitios inductivos en el huésped para generar inmunidad contra los agentes patógenos, tales como las placas de Peyer en el tracto intestinal y el tejido linforreticular nasal asociada en el tracto respiratorio. Esta característica única hace inmunidad de la mucosa como actor fundamental del sistema de defensa del huésped. Muchos estudios se han centrado en los sitios de la mucosa gastrointestinal y respiratorio. Sin embargo, ha habido muy poca investigación de la reproducción sitios de la mucosa. La mucosa del tracto genital es el sitio de la infección primaria de las enfermedades de transmisión sexual (ETS), incluyendo infecciones bacterianas y virales. Las ETS son uno de los retos de salud más críticos que enfrenta el mundo hoy en día. Centros para el Control y Prevención de Enfermedades estima que hay 19 millones de nuevos infecciosas cada año en los Estados Unidos. STDs costar la salud de los EE.UU. sistema de atención de 17 mil millones dólares cada año 2, y los individuos de costes aún más en las consecuencias inmediatas de salud y larga vida. Para hacer frente a este reto, una mayor comprensión de la inmunidad de la mucosa reproductiva es necesaria y aislar linfocitos es un componente esencial de estos estudios. Aquí, se presenta un método para aislar reproducible linfocitos murinos de tractos genitales femeninos por estudios inmunológicos que pueden ser modificadas para la adaptación a otras especies. El método se describe a continuación se basa en un ratón.

Protocol

1. La eliminación del tracto genital Sacrificar al ratón con las directrices aprobadas. Hacer incisión media baja y retraer la piel. Aislar y retirar tracto genital completa, desde el oviducto de la apertura vaginal. Abrir todo el tracto longitudinalmente con unas tijeras. Cortar el tracto genital con tijeras quirúrgicas finas en piezas finas (aproximadamente <1 mm) en una placa de Petri con RPMI-10/EDTA completa (véase la fórmula a continuación) y se agita el tejido en…

Discussion

En este protocolo, se muestra cómo preparar los linfocitos de ratón tractos genitales y se domina con facilidad. El punto más crítico de este proceso es la de mantener la viabilidad celular, manteniendo las células en hielo. El rendimiento celular de este método depende de la técnica, el manejo de la habilidad, el estado infeccioso del ratón (ingenua o días después de la infección), el patógeno (bacteria, virus hongos,) y la sección de la murina examinados tracto reproductivo (oviducto, útero, segmento vag…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Nos gustaría dar las gracias a las subvenciones del NIH para la financiación R01-AI026328 (KAK) y R01-AI079004 (KAK).

Materials

Name Company Catalogue number
Collagenase Sigma Life Sciences C2139-1G
Percoll GE Healthcare Bio-Sciences 17-0891-01
RPMI1640 Gibco by Life Technologies 11875

References

  1. M, . The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
  2. Centers for Disease Control and Prevention. . 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , (2010).
  3. Jain, S., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Multiple tandem copies of conserved gp41 epitopes incorporated in gag virus-like particles elicit systemic and mucosal antibodies in an optimized heterologous vector delivery regimen. Vaccine. 28, 7070-7080 (2010).
  4. Tang, V. A., Rosenthal, K. L. Intravaginal infection with herpes simplex virus type-2 (HSV-2) generates a functional effector memory T cell population that persists in the murine genital tract. J. Reprod. Immunol. 87, 39-44 (2010).
  5. Gillgrass, A. E., Tang, V. A., Towarnicki, K. M., Rosenthal, K. L., Kaushic, C. Protection against genital herpes infection in mice immunized under different hormonal conditions correlates with induction of vagina-associated lymphoid tissue. J. Virol. 79, 3117-3126 (2005).
  6. Sajic, D., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Mucosal delivery of CpG oligodeoxynucleotides expands functional dendritic cells and macrophages in the vagina. Immunology. 114, 213-224 (2005).
  7. Jiang, J. Q., Patrick, A., Moss, R. B., Rosenthal, K. L. CD8+ T-cell-mediated cross-clade protection in the genital tract following intranasal immunization with inactivated human immunodeficiency virus antigen plus CpG oligodeoxynucleotides. J. Virol. 79, 393-400 (2005).
  8. Gill, N., Chenoweth, M. J., Verdu, E. F., Ashkar, A. A. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269, 29-37 (2011).
  9. Thatte, A., DeWitte-Orr, S. J., Lichty, B., Mossman, K. L., Ashkar, A. A. A critical role for IL-15 in TLR-mediated innate antiviral immunity against genital HSV-2 infection. Immunol. Cell Biol. 89, 663-669 (2011).
  10. Kwant-Mitchell, A., Ashkar, A. A., Rosenthal, K. L. Mucosal innate and adaptive immune responses against herpes simplex virus type 2 in a humanized mouse model. J. Virol. 83, 10664-10676 (2009).
  11. Gallichan, W. S., Rosenthal, K. L. Effects of the estrous cycle on local humoral immune responses and protection of intranasally immunized female nice against herpes simplex virus type 2 infection in the genital tract. Virology. , 224-487 (1996).

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Cite This Article
Jiang, J., Kelly, K. A. Isolation of Lymphocytes from Mouse Genital Tract Mucosa. J. Vis. Exp. (67), e4391, doi:10.3791/4391 (2012).

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