Summary

Fare Genital Sistemlerinin Mukozanin gelen Lenfosit İzolasyonu

Published: September 03, 2012
doi:

Summary

Fare genital lenfosit yalıtmak için verimli bir şekilde tarif edilmiştir. Bu yöntem verimli izolasyonu sağlamak için enzim sindirim ve Percoll degrade ayrılık yararlanır. Bu teknik, diğer tür kullanım için de uyarlanabilmektedir

Abstract

, Gastrointestinal ürogenital ve solunum yolları, bu tür virüs ve bakteri gibi patojenlerin 1 için giriş portalları sağlamak dahil Mukozal yüzeyler. Mucosae gibi bağırsak Peyers yamalar ve solunum yollarında nazal ilişkili lenforetiküler doku gibi patojenlere karşı bağışıklık oluşturmak için de konak endüktif sitelerdir. Bu benzersiz özellik, konak savunma sisteminin önemli bir oyuncu olarak mukozal bağışıklık getiriyor. Birçok çalışma, gastrointestinal ve solunum mukoza alanlarında odaklanmıştır. Ancak, üreme mukozal siteleri küçük bir araştırma olmuştur. Genital mukoza bakteriyel ve viral enfeksiyonlar dahil olmak üzere cinsel yolla bulaşan hastalıklar (STD) için primer enfeksiyon sitedir. CYBH, bugün dünyanın karşı karşıya olduğu en önemli sağlık sorunlarından biridir. Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezleri Amerika Birleşik Devletleri'nde 19 milyon yeni enfeksiyon her yıl olduğunu tahmin ediyor. AzizDs her yıl 2 ABD sağlık sistemi 17000000000 $ maliyeti ve acil ve yaşam boyu sağlık sonuçlarının maliyet bireyler daha. Bu meydan yüzleşmek için, üreme mukozal bağışıklık daha büyük bir anlayış gerekli ve lenfositler izole bu çalışmaların önemli bir bileşenidir. Burada, tekrarlanabilir diğer türlere adaptasyon için modifiye edilebilir immünolojik çalışmalar için fare dişi genital yollarında gelen lenfositler izole etmek için bir yöntem mevcut. Aşağıda tarif edilen yöntem, bir fare dayanmaktadır.

Protocol

1. Genital sistem Kaldırma Onaylanan yönergeleri kullanarak fare Euthanize. Düşük orta hat kesi olun ve cilt geri çekin. Oviduct vajinal açılış, bütün genital ayırın ve çıkarın. Makas ile uzunlamasına tüm yolu açın. Tam RPMI-10/EDTA ile bir petri tabağına ince parçalar (<1 mm kadar) (aşağıdaki formül bakınız) içine ince cerrahi makas ile genital kesin ve ayarlamak için bir manyetik karıştırıcı üzerinde, oda sıcaklığında 125 ml'lik …

Discussion

Bu protokolde, fare genital yolları lenfosit hazırlamak için nasıl gösterilir ve kolayca hakim. Bu sürecin en kritik nokta buz üzerinde hücreleri tutarak hücre canlılığını muhafaza etmektir. Bu yöntem hücre verimi beceri, fare enfeksiyon durumu (saf ya da enfeksiyon sonrası gün), patojen (bakteriyel, viral, fungal) ve fare üreme sisteminin irdelenmesi bölümünde (yumurtalık, rahim, işleme, tekniği bağlıdır vajinal segment veya tüm genital sistem). Bizim grup ve diğerleri 5-7 fare …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Biz finansman hibe R01-AI026328 (KAK) ve R01-AI079004 (KAK) için NIH teşekkür.

Materials

Name Company Catalogue number
Collagenase Sigma Life Sciences C2139-1G
Percoll GE Healthcare Bio-Sciences 17-0891-01
RPMI1640 Gibco by Life Technologies 11875

References

  1. M, . The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
  2. Centers for Disease Control and Prevention. . 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , (2010).
  3. Jain, S., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Multiple tandem copies of conserved gp41 epitopes incorporated in gag virus-like particles elicit systemic and mucosal antibodies in an optimized heterologous vector delivery regimen. Vaccine. 28, 7070-7080 (2010).
  4. Tang, V. A., Rosenthal, K. L. Intravaginal infection with herpes simplex virus type-2 (HSV-2) generates a functional effector memory T cell population that persists in the murine genital tract. J. Reprod. Immunol. 87, 39-44 (2010).
  5. Gillgrass, A. E., Tang, V. A., Towarnicki, K. M., Rosenthal, K. L., Kaushic, C. Protection against genital herpes infection in mice immunized under different hormonal conditions correlates with induction of vagina-associated lymphoid tissue. J. Virol. 79, 3117-3126 (2005).
  6. Sajic, D., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Mucosal delivery of CpG oligodeoxynucleotides expands functional dendritic cells and macrophages in the vagina. Immunology. 114, 213-224 (2005).
  7. Jiang, J. Q., Patrick, A., Moss, R. B., Rosenthal, K. L. CD8+ T-cell-mediated cross-clade protection in the genital tract following intranasal immunization with inactivated human immunodeficiency virus antigen plus CpG oligodeoxynucleotides. J. Virol. 79, 393-400 (2005).
  8. Gill, N., Chenoweth, M. J., Verdu, E. F., Ashkar, A. A. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269, 29-37 (2011).
  9. Thatte, A., DeWitte-Orr, S. J., Lichty, B., Mossman, K. L., Ashkar, A. A. A critical role for IL-15 in TLR-mediated innate antiviral immunity against genital HSV-2 infection. Immunol. Cell Biol. 89, 663-669 (2011).
  10. Kwant-Mitchell, A., Ashkar, A. A., Rosenthal, K. L. Mucosal innate and adaptive immune responses against herpes simplex virus type 2 in a humanized mouse model. J. Virol. 83, 10664-10676 (2009).
  11. Gallichan, W. S., Rosenthal, K. L. Effects of the estrous cycle on local humoral immune responses and protection of intranasally immunized female nice against herpes simplex virus type 2 infection in the genital tract. Virology. , 224-487 (1996).

Play Video

Cite This Article
Jiang, J., Kelly, K. A. Isolation of Lymphocytes from Mouse Genital Tract Mucosa. J. Vis. Exp. (67), e4391, doi:10.3791/4391 (2012).

View Video