Streptococcus pneumoniae ist der führende Erreger schwerer ambulant erworbener Pneumonie und für mehr als 2 Millionen Todesfälle weltweit verantwortlich. Die Auswirkungen der bakteriellen Faktoren in Fitness-oder Virulenz beteiligt können in Echtzeit in einer akuten Lungenentzündung oder Bakteriämie Maus-Modell mit Biolumineszenz-Bakterien beobachtet werden.
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Methodenartikel
Nach der in Echtzeit die Auswirkungen der Pneumokokken-Virulenzfaktoren in einer akuten Lungenentzündung Maus-Modells mit Biolumineszenz-Bakterien
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Lungenentzündung ist eine der wichtigsten Gesundheitsprobleme in Entwicklungsländern und Industrieländern und ist mit erheblichen Morbidität und Mortalität verbunden. Trotz der Fortschritte in Kenntnis dieser Krankheit, die Verfügbarkeit von Intensivstationen (ICU), und der Einsatz von potenten antimikrobielle Mittel und wirksame Impfstoffe, bleiben die Sterblichkeit hoch ein. Streptococcus pneumoniae ist der führende Erreger der ambulant erworbenen Pneumonie (CAP) und eine der häufigsten Ursachen von Bakteriämie bei Menschen. Dieser Erreger ist mit einem Arsenal von oberflächenexponierten Adhäsine und Virulenz Faktoren, die zu einer Lungenentzündung und invasive Pneumokokken-Erkrankungen (IPD) ausgestattet. Die Bewertung der in-vivo-Rolle von bakteriellen Virulenzfaktoren Fitness oder ist von größter Bedeutung, S. entwirren pneumoniae Pathogenität Mechanismen. Murine Modelle von Pneumonie, Bakteriämie, und Meningitis werden eingesetzt, um die Auswirkungen der Pneumokokken-Faktoren zu bestimmen, verschiedenen Stadien der Infektion. Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Überwachung in Echtzeit Pneumokokken-Verbreitung in Mäusen nach intranasaler oder intraperitoneale Infektionen mit Biolumineszenz-Bakterien. Die Ergebnisse zeigen die Vermehrung und Verbreitung von Pneumokokken in die unteren Atemwege und Blut, die visualisiert und ausgewertet werden kann mit Hilfe eines Imaging-System und die dazugehörige Analyse-Software.
Einleitung
Infektionen der Atemwege, die durch Viren oder Bakterien verursacht weiterhin eine der häufigsten ambulant erworbenen oder klinische Probleme verursachen etwa ein Drittel aller weltweit Todesursache weltweit. Die wichtigsten Bakterienarten sind Haemophilus influenzae und Streptococcus pneumoniae 2. Allerdings sind diese Bakterienarten in der Regel übliche Bestandteile der natürlichen Atemwege Flora. Somit ist die bakterielle Schlitten auch gewisse Gefahr einer invasiven Erkrankung und je nach der Immunstatus oder Prädispositionen der Individuen. Die asymptomatischen Besiedlung auf invasive Infektionen ausgelöst. Streptococcus pneumoni....
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Protokoll
Die hier beschriebenen Tierinfektionsversuche müssen in strikter Übereinstimmung mit den örtlichen und internationalen (zB Europäische Gesundheitsgesetz des Bundes für Labortierkunde Verbände (FELASA)) Richtlinien und Vorschriften für den Einsatz von Wirbeltieren durchgeführt werden. Die Versuche müssen von der lokalen ethischen Pension und Institutional Animal Care Committee genehmigt werden. Alle Experimente mit S. pneumoniae im Labor oder Tierinfektionen sind in einer Klasse II Biosicherheitswerkbank durchgeführt.
1. Vorbereitung der Infektions Auf Biolumineszenz Pneumocococi
- Vorbereitung stock Pneumokokken....
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Ergebnisse
Der Erwerb und die Aufnahme von Methionin ist von zentraler Bedeutung für Pneumokokken zu Fitness in ihren Gast Nische 32,33 zu erhalten. Die Methionin-ABC-Transporter-Lipoprotein in D39 von der SPD _ 0151 Gen (TIGR4: sp_0149) codiert und nannte MetQ 32. Pneumokokken weiter produzieren Methionin-Biosynthese-Enzyme (D39: Spd_0510 - Spd_0511; TIGR4 Sp_0585 - Sp_0586, Mete und metF). Das Fehlen von Methionin in einem chemisch definierten Medium beeinflusst das Wachstum von P.......
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Diskussion
Alle Versuche an Tieren durchgeführt haben, die von den lokalen Behörden und Ethikkommissionen genehmigt werden. Bei in vivo Experimenten ist die Infektion bakterielle Belastung in den verschiedenen Wirtsnischen der infizierten Tiere zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Infektion bestimmt. Unter diesen experimentellen Bedingungen die Tiere, die vor der Trennung der Bakterien aus dem Blut, des Nasopharynx, bronchoalvelar Spülung oder Organen wie der Lunge, Milz und Gehirn geopfert werden. Um die Anzahl de.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Forschung im Labor wurde durch Zuschüsse der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG HA 3125/3-2, DFG HA 3125/4-2) und dem Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF) Medical Genomics Infektion (FKZ 0315828A) SH unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Todd Hewitt Bouillon | Carl Roth, Karlsruhe, Deutschland | X936.1 | |
| Hefeextrakt | Carl Roth, Karlsruhe, Deutschland | 2363.2 | |
| Blut-Agarplatten | Oxoid, Wesel, Deutschland | PB5039A | |
| Kanamycin | Carl Roth, Karlsruhe, Deutschland | T832.2 | |
| Erythromycin | Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Deutschland | E6376 | |
| Fötales Rinderserum (FBS) | PAA Laboratories, Coelbe, Deutschland | A11-151 | |
| CD-1 Mäuse, Weibchen | Charles River, Sulzfeld, Deutschland | CD1SIFE06W08W | weibliche CD-1 Mäuse, sechs bis acht Wochen alt |
| Ketamin 500 mg, Curamed Injektionslösung | Schwabe-Curamed, Karlsruhe, Deutschland | ||
| Rompun 2%, Injektionslösung | Bayer Animal Health, Monheim, Deutschland | ||
| BD Plastipak 1 ml Spritzen | Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland | 300015 | sterile Luer-Lok Spritzen mit Nadel |
| Gel Loader Spitzen | PeqLab | 81-13790 | Mµ ltiFlex Tips |
| Hyaluronidase | Sigma-Aldrich | H3884-100mg | Hyaluronidase Typ IV-S aus Rindertest |
| Oxygen | Air Liquide, Dü Düsseldorf, Deutschland | M1001L50R2A001 | |
| Isofluran | Baxter, Unterschleiß heim, Deutschland | ||
| pGEM-T Easy | Promega, Mannheim, Deutschland | ||
| Oligonukleotide | Eurofins MWG, Ebersberg, Deutschland | ||
| Qiaprep Spin Midiprep Kit | Qiagen, Hilden, Deutschland | 27104 | |
| PCR-DNA-Aufreinigungskit | Qiagen, Hilden, Deutschland | 28106 | |
| Living Image 4.1 Software | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Deutschland | ||
| XGI-8 Gasanästhesiesystem | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Deutschland | ||
| IVIS Spektrum-Bildgebungssystem | Caliper Life Sciences/PerkinElmer, Rodgau, Deutschland | ||
| Biophotometer | Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland |
Referenzen
- Niederman, M. S., et al. Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).
- WHO,
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Nachdrucke und Genehmigungen
