Abstract
Tijdens bacteremia Streptococcus pneumoniae kan verplaatsen door het vasculair endotheel in het myocardium en vormen discrete bacteriën gevulde microscopische lesies (microverwondingen) die opmerkelijk zijn vanwege de afwezigheid van infiltrerende immuuncellen. Door hun vrijgave van cardiotoxische producten, S. pneumoniae binnen microverwondingen worden verondersteld bij te dragen tot het hartfalen die vaak waargenomen tijdens fulminaat invasieve pneumococcen ziekte bij volwassenen. Hierin wordt aangetoond een protocol voor experimentele muis-infectie die leidt tot cardiale microlesion vorming reproduceerbaar binnen 30 uur. Instructie wordt voorzien op microlesion identificatie in hematoxyline & eosine gekleurde hart secties en de morfologische verschillen tussen vroege en late microverwondingen worden gemarkeerd. Instructie wordt verstrekt over een protocol voor de controle van S. pneumoniae binnen microverwondingen behulp van antilichamen tegen pneumokokken capsulaire polysaccharideimmunofluorescentie microscopie. Eindelijk is een protocol voor antibiotische interventie die geïnfecteerde muizen en voor de detectie en beoordeling van littekenvorming in de harten van de herstellende muizen redt verstrekt. Samen zullen deze protocollen het onderzoek naar de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen pneumokokken cardiale invasie, cardiomyocyte dood, cardiale remodeling als gevolg van blootstelling aan S. vergemakkelijken pneumoniae en de immuunrespons op het pneumokokken in het hart.
Introduction
Hospitalisatie van volwassenen voor community-acquired pneumonie (CAP) draagt een gedocumenteerde risico op cardiale complicaties die bijdraagt aan de sterfte 1-4. In een recente studie van Corrales-Medina et al., Cardiale complicaties bleken geassocieerd te worden met en / of verantwoordelijk voor 27% van de longontsteking gepaard sterfgevallen 3. Streptococcus pneumoniae (de pneumokokken), de meest voorkomende oorzaak van het GLB en sepsis 5, is direct geassocieerd met negatieve cardiale gebeurtenissen in maar liefst 19% van de opgenomen volwassen patiënten 6. Cardiale complicaties geassocieerd met een longontsteking zijn onder andere een nieuwe of verergerde congestief hartfalen, hartritmestoornissen, en myocardinfarct in volgorde van afnemende frequentie 6.
In een recent PLoS Pathogens artikel van Brown et al., S. pneumoniae werd gevonden kunnen translocatie via cardiaal vasculair endotheel, binnenkomst in de myocardium en vorming van discrete niet-purulent microscopische lesies (microverwondingen) gevuld met bacteriën in de ventrikels gedurende invasieve pneumokokkeninfecties (IPD) 7. Bewijs van cardiale microlesion vorming werd waargenomen in cardiale monsters van niet-menselijke primaten en mensen die bezweken aan pneumokokken infectie. Ook experimenteel geïnfecteerde muizen reproduceerbaar ontwikkeld cardiale microverwondingen. In muizen, werd microlesion grootte en aantal positief gecorreleerd met de duur en ernst van bacteremie niveaus van troponine in sera en afwijkende cardiale elektrofysiologie. Bacteriële translocatie naar het hart te treden via dezelfde mechanismen die translocatie van de pneumococcus over de bloed-hersenbarrière en ontwikkeling van pneumococcen meningitis, dwz Choline-bindende eiwit A gemedieerde invasie van vasculaire endotheelcellen in een laminine receptor en bloedplaatjes -activating factor receptor afhankelijke manier 8. Microlesionenvorming vereist ook de pneumokokken porievormende toxine pneumolysine dat bleek te hartspiercellen 7 doden.
Pneumokokken cardiale microverwondingen verschillen van de purulente zachte weefsel en cardiale abcessen die worden veroorzaakt door andere Gram-positieve bacteriën zoals Staphylococcus aureus. Deze worden gekenmerkt door een enkele foci bacteriën omgeven door neutrofielen en fibrine depositie 9,10. Microverwondingen gevormd door S. pneumoniae zijn kleiner in omvang, verspreid over een getroffen hart, en missen immuun celinfiltraten. Tijdens de vroege stadia van de infectie microverwondingen veroorzaakt door S. pneumoniae verschijnen als gebieden van beschadigde of ontstoken weefsel doet denken aan de pathologische tekenen van cardiomyopathie. Sommige monocyten kunnen worden waargenomen tijdens deze periode, maar hun aanwezigheid is kortstondig en snel lesies necrotisch in verschijning en gevuld met bacteriën tegelijkertijd blijft grow in grootte tot de dood van het dier of antimicrobiële interventie. Belangrijk binnen 3 dagen na antibioticum interventie wordt overvloedig immune cel infiltratie waargenomen bij de vroegere laesie en dit gaat gepaard met sterke collageen afzetting. Soortgelijke remodellering is gemeld optreden na infarct met blijvende gevolgen op de hartfunctie 11-15. Zo microverwondingen zijn een potentiële verklaring voor de ongunstige cardiale gebeurtenissen die zich voordoen tijdens de IPD en eventueel de verhoogde incidentie van cardiale-gerelateerde sterfte in herstellingsoord personen die de ziekte episode hebben overleefd.
Hierin wordt instructie die op de experimenteel muismodel van IPD en cardiale laesievorming en visualisatie van cardiale microverwondingen op vroege en late stadia van de infectie. Het protocol voor detectie van collageen in dieren die zijn opgeslagen door antimicrobiële maatregelen blijkt. Het doel van dit artikel is om facilitate het onderzoek van andere onderzoekers over dit belangrijke en nieuwe pneumokokken pathologie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
OPMERKING: Alle muis experimenten werden beoordeeld en goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Commissies goedgekeurd aan de Universiteit van Texas Health Science Center in San Antonio (protocol # 13032-34-01C). Dierenverzorging en experimentele protocollen gehandeld op grond van Public Law 89-544 (Animal Welfare Act) en de bijbehorende amendementen, GGD richtlijnen, en de Gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren (US Department of Health & Human Services).
1. Infectie
- Verkrijgen BALB / c muizen van beide geslachten tussen de leeftijd van 10-12 weken.
OPMERKING: S. pneumoniae stam TIGR4 serotype 4 is een virulent klinisch isolaat dat gesequenced 16. - Groei TIGR4 in Todd-Hewitt bouillon bij 37 ° C in 5% CO2 tot aan een optische dichtheid (OD) 620 0,5 (overeenkomend met 1,0 x 10 8 kolonievormende eenheden [CFU] / ml). Pellet de pneumococcen kweek door centrifugatie gedurende 10 min bij 3, 500 xg en verwijder het supernatant met behulp van een vacuüm lijn. Suspendeer en verdun bacteriën met steriele fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) tot een eindconcentratie van 1,0 x 10 4 CFU / ml.
- Met behulp van een inductie kamer, verdoven muizen met 2,5% verdampt isofluraan in zuurstof. Bevestig verdoofde toestand door zachte teen knijpen met stompe pincet.
- Houd de verdoofde muis door het nekvel en rechtop met enerzijds injecteren elke muis intraperitoneaal (ip) met 100 ul van het S. pneumoniae suspensie op met een spuit met een 27-30 gauge naald (overeenkomend met een provocatiedosis van 1,0 x 10 3 CFU). Plaats de muis terug in zijn kooi. Muizen meestal ontwaken 30-40 sec na de injectie.
- Laat de infectie verlopen gedurende ten minste 24 (vroeg) of 30 (advanced) hr.
- Euthanaseren de muizen door CO 2 stikken. Voeren cervicale dislocatie aan de muis te garanderen is overleden. Euthanasie wordt verder bevestigd door het verwijderenvan het hart in stap 1.6.
- Ontsmet de staart met een alcoholdoekje en knip een paragraaf 2-3 mm. Verzamel 2 pl bloed en serieel verdund bloed 10-voudig in PBS bevattende natriumheparine 1 U / ml vijfmaal. Plaat seriële verdunningen op tryptische soja-agar plaat en incubeer overnacht bij 37 ° C in 5% CO 2. De volgende dag extrapoleren kolonie telt het niveau van bacteremia.
- Immobiliseren van de muis in een liggende positie op een chirurgische platform. Spray de borst met 70% ethanol en dep ze droog. Met behulp van chirurgische schaar en pincet open de borstholte, verwijder de ribbenkast, en doorsnijden het membraan naar het hart en de longen bloot. Met behulp van een schaar knippen de bloedvaten verbonden met het hart en zachtjes accijnzen het hart met zorg om te voorkomen blauwe plekken met een pincet.
- Spoel het hart met PBS en vervolgens te plaatsen in weefselmonster collectie cassettes zodanig dat coronale secties zouden worden verkregen tijdens het weefsel snijden. Voor inbedden in paraffine, place cassettes in 10% gebufferde formaline-oplossing en de volgende dag te sturen voor paraffine inbedding.
- Als alternatief flash freeze behulp oktober Compound binnen een cryomold die op droog ijs geplaatst.
2. Visualisatie van hartlesies en Pneumokokken binnen Letsels
- Verminder paraffine ingebedde secties hart zodat de 4 hartkamers zichtbaar in elke sectie weefsel. Snij slides bij een dikte van 5 urn.
- Deparaffinize en vlek dia's met hematoxyline en eosine (H & E) met behulp van standaard methoden 17.
- Bekijk H & E gekleurde cardiale secties met behulp van een lichtmicroscoop bij lage (100X, 200X) en hoge (olie-immersie: 400X, 1000x) vergrotingen. Karakteriseren harten voor de aanwezigheid van microverwondingen in het myocardium. Hier verwerven H & E beelden met behulp van een Zeiss Axioskop 2 microscoop uitgerust met een 100X 1,3 numerieke opening Plan-Neofluar doelstelling.
OPMERKING: in een vroeg stadium cardiale lesions gediscrimineerd door hun differentiële gekleurde uiterlijk en in sommige gevallen de aanwezigheid van immuuncellen (monocyten en granulocyten) schijnbaar monocyten zijn. In geavanceerde laesies, met name gezien bij 30 uur, immuuncellen afwezig zijn en grote vacuole-achtige laesies worden waargenomen in hun plaats. Het is belangrijk op te merken dat terwijl immuuncel instroom gedurende de vroege stadia van cardiale laesie ontwikkeling optreden blijkt niet een eis.
3. Immunofluorescente Microscopie voor Pneumokokken binnen microverwondingen
- Sectie hart in cryomolds met microtoom tot een dikte van 5 pm en plaats delen op positief geladen glasplaatjes. Laat bevroren cardiale secties te ontdooien en aan de lucht drogen. Fix secties gedurende 10 minuten in 10% neutraal gebufferd formaline (pH 6,8-7,2 bij 25 ° C).
- Was slides (3x) in PBS gedurende 5 min, doorlaatbaar voor 15 min in 0,2% Triton X-100 in PBS, opnieuw wassen in PBS.
- Blok weefsel secti on op objectglaasjes met 10% geit serum in PBS gedurende 1 uur.
- Spoel dia met PBS, deksel en incubeer cardiale secties met konijn anti-serotype 4 pneumococcus antiserum bij 1: 1000 in PBS met 10% geit serum gedurende 2 uur bij 37 ° C.
LET OP: Voor de negatieve controles onderzoekers moeten naïef konijnenantiserum gebruiken - Na wassen met PBS, deksel en incubeer secties met 10% geit serum-PBS met geit anti-konijn-FITC geconjugeerd antilichaam bij 1: 2000 gedurende 30 minuten bij 37 ° C.
- Na instructies van de fabrikant gebruikt DAPI (4 ', 6- diamidino-2-fenylindool) en 5 mg / ml voor visualisatie van eukaryote kernen. Wassen en monteer weefsel secties met FluorSave.
- Verwerven fluorescerende beelden met behulp van een confocale microscoop systeem bij zowel lage als hoge vergroting. Stel de numerieke apertuur dienovereenkomstig voor optimale resultaten. Hier verkrijgen fluorescerende beelden met behulp van een confocale systeem met een numerieke apertuur 1,42 60X objectief.
- Beginnen met muizen geïnfecteerd ip met 1,0 x 10 3 CFU van TIGR4 zoals eerder in stap 1 is aangegeven.
- Beginnend op 30 uur na infectie, toedienen van farmaceutische kwaliteit ip ampicilline (80 mg / kg lichaamsgewicht) in 100 pl zoutoplossing elke 12 uur gedurende 36 uur. Verzamel hart op het gewenste tijdstip en zoals beschreven in stap 1.6 voor paraffine inbedding en weefsel snijden.
5. Collageen Deposition Detection
- Met xyleen en ingedeeld alcohol wast met gedeïoniseerd water, deparaffinize en hydraat weefselsecties middels standaardwerkwijzen 17. Behandel secties met waterige 0,2% fosfomolybdeenzuur gedurende 5 minuten en spoel met gedeïoniseerd water gedurende 5 min.
- Stain secties met 0,1% Sirius Red in pikrinezuur 2 uur bij kamertemperatuur geroerd.
- Was secties 0,01 N zoutzuur gedurende 3 min en spoelen met 70% ethanol gedurende 1 minuut.
- DehydraTé de secties met behulp van de identieke, maar in omgekeerde volgorde van wasbeurten met die beschreven in 5.1, uitdrogen cardiale secties in het verhogen en gegradeerde concentraties van ethanol dan xyleen.
- Mount weefsel secties met een montage oplossing voor microscopische evaluatie.
- De regio's van collageen te identificeren, te onderzoeken in lood weefsel secties voor gebieden van diepe read vlekken onder lage en hoge vergroting met een lichtmicroscoop. Elk gebied binnen de ventrikels van het hart, dat is rood is een gebied waar collageen is gedeponeerd. Gebieden zonder deze rode vlek zijn sites van gezond weefsel ontbreekt collageen depositie. Hierin verkrijgen Picro Sirius rood gekleurde beelden met behulp van een microscoop uitgerust met een 20X 0,5 numerieke apertuur doelstelling.
OPMERKING: Het atrium vlekken rood in gezonde weefsels.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Visualisatie van microverwondingen door H & E
Cardiale microverwondingen werden waargenomen in de ventrikels van H & E gekleurde hart- coupes van muizen met IPD na hun ip uitdaging TIGR4. Figuur 1 toont de toename in grootte van deze laesies tussen 24 en 30 uur na infectie (HPI), met groter aantal hematoxyline -stained (dwz, paars-blauw) pneumokokken zichtbaar binnen de laesie. Microverwondingen werden gekenmerkt door een vacuole-achtige morfologie, dichtere eosine (rood) kleuring van cardiomyocyten in de cellen direct naast de laesie, diplokokken in de laesies en een algemeen ontbreken van immuuncellen. Ongeveer de helft van de laesies naast zichtbare bloedvaten. Tussen de 24 en 30 hpi microverwondingen werd talrijker en aanzienlijk groter. Op 30 hpi extracellulaire bacteriën vaak gezien kon worden streamen vanaf een laesie tussen cellen.
Visualizatiop S. pneumoniae behulp Immunofluorescente Microscopy
Te visualiseren en te bevestigen dat S. pneumoniae inderdaad binnen laesies immunofluorescentie kleuring voor serotype 4 capsulaire polysaccharide dat wordt geproduceerd door TIGR4 (figuur 2) gebruikt. Beelden die zijn vastgelegd toonde de aanwezigheid van dicht opeengepakte en dichte aggregaten van S. pneumoniae binnen microlesion sites.
Bewijs van Cardiac Littekens
Picro Sirius Red kleuring werd uitgevoerd op cardiale secties van muizen die waren gered met ampicilline en geïnfecteerde controles. In antibioticum gered herstellende muizen was er een dramatische toename in de aanwezigheid en intensiteit van de Picro Sirius Red vlek met bands streaming van wat lijken voormalige laesie plaatsen in de ventrikels (figuur 3). Daarentegen werden de ventrikels in besturingssecties ongekleurd aangeeft dat collageen afzetting afwezig (Niet getoond).
Samen tonen deze resultaten de mogelijkheid cardiale microverwondingen visualiseren in muizen met ernstige IPD en om daaruit littekenvorming in de ventrikels met standaard histologische procedures. Belangrijk is dat de cardiale microverwondingen steevast gekoppeld aan hoge titers van S. pneumoniae en de tijd die nodig is om de oprichting ervan te bemiddelen.
Figuur 1: Detectie van microverwondingen in H & E gekleurde cardiale secties Vertegenwoordiger beelden (1000x) van cardiale microverwondingen waargenomen bij 24 hor en 30 uur na infectie.. Zwarte schaal corresponderen met 10 micrometer. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
bestanden / ftp_upload / 52590 / 52590fig2.jpg "/>
Figuur 2: Immunofluorescentie detectie van S. pneumoniae in cardiale microverwondingen. Immunofluorescentie microscopie met antilichaam tegen serotype 4 capsulaire polysaccharide (groen) bevestigde de aanwezigheid van S. pneumoniae binnen cardiale microverwondingen. De kernen werden blauw gekleurd met DAPI. Witte schaal bar overeen met 20 urn. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Figuur 3: Collageen depositie op een voormalig cardiale microlesion site in een herstellingsoord muis representatief beeld (200X) toont een Picro Sirius Rood gekleurd cardiale microlesion in het ventrikel van een muis 5 dagen na antibiotica interventie voor in.invasieve pneumokokkeninfecties. Rood geeft collageen depositie. Zwarte schaal bar overeen met 20 urn. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
In dit verslag zeer reproduceerbare methode S. induceren pneumoniae gemedieerde cardiale microverwondingen bij muizen tijdens IPD en de technieken voor de visualisatie wordt aangetoond. Muizen geïnfecteerd met een dosis bacteriën die drempelwaarde van het immuunsysteem voor klaring overtreft, waardoor hoogwaardige bacteremie, vergelijkbaar met die welke optreedt tijdens menselijke sepsis, en leidt tot uiteindelijke bacteriële translocatie in het myocardium. Voor nog onbekende redenen, S. pneumoniae in het hart kan repliceren schuwt de immuunrespons. Dit is het onderwerp van het lopende onderzoek en deze publicatie kunnen andere onderzoekers in hun inspanningen om deel te nemen te vergemakkelijken.
H & E kleuring zorgt voor microlesion visualisatie met behulp van standaard lichtmicroscopie sinds hartspiercellen vlek roze tot rood, terwijl cardiale microverwondingen en de bacteriën binnen vlek blauw tot diep paars. Deze scherpe contrast maakt eenvoudige detectiop de microverwondingen in latere stadia van infectie wanneer de laesies groter. Om de aanwezigheid van S. verifiëren pneumoniae binnen de cardiale microverwondingen, immunofluorescentie microscopie met behulp van antiserum tegen serotype 4 kapselpolysaccharide dat door TIGR4 wordt gedragen werd uitgevoerd. Belangrijk is dat de specifieke anti-capsulaire antilichaam dat moet worden gebruikt afhankelijk van het serotype van de pneumococcen stam die wordt gebruikt voor experimentele challenge. Als alternatief kunnen de onderzoekers ook gebruik maken van commercieel beschikbare monoklonale antilichamen tegen pneumolysine, de porievormende toxine van S. pneumoniae, of die detecteren componenten van de pneumococcen celwand (dwz TEPC-15). Terwijl deze antilichamen te detecteren pneumokokken in het hart, ervaringen uit het verleden blijkt dat antilichamen tegen kapselpolysaccharide bieden de meest dwingende afbeeldingen 7.
S. pneumoniae veroorzaakte cardiale microlesion vorming vereist de interactie vande pneumococcen adhesine Choline bindend eiwit A met de gastheer eiwit laminine receptor voor bacteriële adhesie aan vasculaire endotheelcellen en interactie bacteriën celwand fosforylcholine met menselijke bloedplaatjes activerende factor receptor voor bacteriële transmigratie door de cel 7,8. Daarom is het belangrijk op te merken dat microlesion vorming nauw samenhangt met infectieuze belasting en tijd, waarbij de frequentie en de duur van deze interacties vergroot en maakt tijd voor de bacteriën te repliceren en zichtbare letsels ontwikkelen. We hebben eerder vastgesteld dat een ip infectieuze dosis groter dan 1,0 x 10 3 CFU van S. pneumoniae stam TIGR4 resultaat te snelle dood van de muis en daardoor slechte laesievorming. Onder dit aanstekelijke dosis spontane klaring optreedt bij sommige muizen en in andere vertraagde begin van ernstige ziekte wordt geconstateerd. Maar voor muizen uitgedaagd met 1,0 x 10 3 CFU van TIGR4 tussen 24 en 36 uur,laesies snel ophopen in aantal en in omvang groeien continu totdat de muis wordt ten dode opgeschreven. Zo, de infectieuze dosis van de infecterende stam dient te worden getitreerd om een soortgelijke toestand van de ziekte te repliceren met een een stervende toestand ontwikkelt in niet minder dan 30 hpi. Belangrijk is, hebben wij herhaaldelijk geobserveerd cardiale laesievorming in muizen die waren geïnfecteerd intranasale met 1,0 x 10 7 CFU en intratracheaal met 1,0 x 10 5 CFU TIGR4. Na deze uitdaging routes ontwikkeling van ernstige ziekte voorgedaan op latere tijdstippen. We zagen ook microlesion formatie met andere virulente stammen van S. pneumoniae, zoals serotype 2 isolaat D39, zij het op verschillende frequenties. Aldus laesies niet het gevolg van de infectie ip route of specifieke TIGR4, maar gebonden aan duur en ernst van de ziekte episode. Hierin adviseren wij om muizen ip infecteren omdat deze uitdaging route biedt de hoogste mate van reproduceerbaarheid. Als een diffErent stam van S. pneumoniae wordt gebruikt of een andere infectieuze route gewenst, onderzoekers gericht moeten bacteremia op niveaus> 10 5 CFU ml bloed gedurende ten minste 24 uur.
Antimicrobiële ingreep maakt de studie van de gebeurtenissen die zich voordoen tijdens de herstelperiode, het modelleren van een mens in de Intensive Care Unit instelling. Het is vermeldenswaard dat niet alle muizen overleven ondanks antimicrobiële behandeling en bevestigd bacteriële klaring. Onderzoekers dienen overleving verwachten tussen 50-60% en als zodanig de cohort grootte aan te passen om te gaan met het verlies van dieren. Regelmatige controle van de dieren na 24 uur wordt ten zeerste aanbevolen om de naleving van Institutionele goedgekeurd dier protocollen te verzekeren. Picro Sirius Red kleuring is een eenvoudige en standaard techniek voor collageenafzetting zichtbaar. Hierin is beschreven hoe deze kleurstof kan worden om remodellering in de ventrikels van het hart te onderzoeken na een traumatische infectious episode. Picro Sirius Red werd gekozen boven andere gebruikelijke technieken collageen visualiseren, zoals "Masson Trichrome Stain ', vanwege de scherpe tegenstelling bood tussen de afgezette collageen en het omringende weefsel. Dit heeft bewezen enorm nuttig zijn bij de beoordeling van de omvang van het myocard collageen depositie volgende antibioticum in een kwantitatieve wijze met behulp van software zoals ImageJ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Todd-Hewitt broth | Neogen | 7161A | |
| O.C.T Compound | Tissue-Tek (Sakura Finetek) | 4583 | |
| Triton X-100 | Fisher Scientific (Acros) | 9002-93-1 | |
| Normal Goat Serum | Abcam | ab7481 | |
| anti-serotype 4 pneumococcus antiserum | Statens Serum Institut | 16747 | |
| goat anti-rabbit FITC conjugated antibody | Jackson ImmunoResearch | 111-096-144 | |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | |
| Fluorsave | Millipore | 345789 | |
| Permount | Fisher Scientific | S70104 | |
| Ampicillin | Sigma | A9393 | |
| phosphomolybdic acid 0.2% | Electron Microscopy Sciences | 26357-01 | |
| 0.1% Sirius Red in picric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-02 | |
| 0.01 N hydrochloric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-03 | |
| Tissue Tack Microscope Slides | Polysciences, Inc | 24216 | |
| Paralube Vet Ointment | Dechra | 12920060 | |
| Hematoxylin and Eosin Staining Kit | unspeciified | Standard |
References
- Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: incidence, timing, risk factors, and association with short-term mortality. Circulation. 125, 773-781 (2012).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Acute bacterial pneumonia is associated with the occurrence of acute coronary syndromes. Medicine (Baltimore). 88, 154-159 (2009).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: a systematic review and meta-analysis of observational studies. PLoS Med. 8, e1001048 (2011).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Risk stratification for cardiac complications in patients hospitalized for community-acquired pneumonia. Mayo Clin. Proc. 89, 60-68 (2014).
- Kumar, S., et al. Detection of 11 common viral and bacterial pathogens causing community-acquired pneumonia or sepsis in asymptomatic patients by using a multiplex reverse transcription-PCR assay with manual (enzyme hybridization) or automated (electronic microarray) detection. Journal Of Clinical Microbiology. 46, 3063-3072 (2008).
- Musher, D. M., Rueda, A. M., Kaka, A. S., Mapara, S. M. The association between pneumococcal pneumonia and acute cardiac events. Clin Infect Dis. 45, 158-165 (2007).
- Brown, A. O., et al. Streptococcus pneumoniae translocates into the myocardium and forms unique microlesions that disrupt cardiac function. PLoS Pathogens. In press, (2014).
- Orihuela, C. J., et al. Laminin receptor initiates bacterial contact with the blood brain barrier in experimental meningitis models. The Journal of Clinical Investigation. 119, 1638-1646 (2009).
- Flick, M. J., et al. Genetic elimination of the binding motif on fibrinogen for the S. aureus virulence factor ClfA improves host survival in septicemia. Blood. 121, 1783-1794 (2013).
- Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation. Trends Microbiol. 19, 225-232 (2011).
- Arenal, A., et al. Do the spatial characteristics of myocardial scar tissue determine the risk of ventricular arrhythmias. Cardiovasc Res. 94, 324-332 (2012).
- Deneke, T., et al. Human histopathology of electroanatomic mapping after cooled-tip radiofrequency ablation to treat ventricular tachycardia in remote myocardial infarction. J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 1246-1251 (2005).
- Bakker, J. M., et al. Reentry as a cause of ventricular tachycardia in patients with chronic ischemic heart disease: electrophysiologic and anatomic correlation. Circulation. 77, 589-606 (1988).
- Verma, A., et al. Relationship between successful ablation sites and the scar border zone defined by substrate mapping for ventricular tachycardia post-myocardial infarction. J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 465-471 (2005).
- Wu, K. C. Assessing risk for ventricular tachyarrhythmias and sudden cardiac death: is there a role for cardiac MRI. Circ Cardiovasc Imaging. 5, 2-5 (2012).
- Tettelin, H., et al. Complete genome sequence of a virulent isolate of Streptococcus pneumoniae. Science. 293, 498-506 (2001).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. CSH Protoc. 2008, (2008).
