Abstract
Under bakteriemi Streptococcus pneumoniae kan translocate over det vaskulære endotelet til hjertemuskelen og danne diskrete bakterie fylt mikroskopiske lesjoner (microlesions) som er bemerkelsesverdig på grunn av fravær av infiltrerende immunceller. På grunn av sin utgivelse av kardio produkter, S. pneumoniae innen microlesions er tenkt å bidra til hjertesvikt som ofte observert under fulminate invasiv pneumokokksykdom hos voksne. Heri er vist en protokoll for eksperimentell muse infeksjon som fører til en reproduserbar hjerte mikrolesjon dannelse i løpet av 30 timer. Undervisningen gis på mikrolesjon identifikasjon i hematoxylin og eosin farget hjerte seksjoner og de morfologiske forskjeller mellom tidlige og sene microlesions er uthevet. Undervisningen gis på en protokoll for verifikasjon av S. pneumoniae innen microlesions bruker antistoffer mot pneumokokk kapselpolysakkarid ogimmunofluorescent mikroskopi. Siste, er en protokoll for antibiotika intervensjon som redder infiserte mus og for påvisning og vurdering av arrdannelse i hjertene til rekonvalesent mus gitt. Sammen vil disse protokollene lette etterforskningen av de molekylære mekanismene bak pneumokokk hjerte invasjon, cardiomyocyte død, hjertestans ombygging som følge av eksponering for S. pneumoniae, og immunrespons mot pneumokokker i hjertet.
Introduction
Innleggelse av voksne for smittsom lungebetennelse (CAP) bærer en dokumentert risiko for uheldige kardiale hendelser som bidrar til dødelighet 1-4. I en fersk undersøkelse utført av Corrales-Medina et al. Hjertekomplikasjoner ble funnet å være assosiert med og / eller ansvarlig for 27% av lungebetennelse assosierte dødsfall tre. Streptococcus pneumoniae (den pneumococcus), den vanligste årsaken til CAP og sepsis 5, har vært direkte forbundet med negative kardiale hendelser i så mange som 19% av innlagte voksne pasienter 6. Alvorlige hjerte hendelser assosiert med lungebetennelse inkluderer ny eller forverret hjertesvikt, arytmier, og hjerteinfarkt etter synkende frekvens 6.
I en nylig PLoS Patogener artikkel av Brown et al., S. pneumoniae ble funnet å være i stand til å translokasjon gjennom hjerte vaskulært endotel, inntreden i myocardium, og dannelse av diskrete ikke-purulent mikroskopiske lesjoner (microlesions) fylt med bakterier i ventriklene i løpet av invasiv pneumokokksykdom (IPD) 7. Bevis på hjerte mikrolesjon dannelse ble observert i hjerteprøver fra ikke-menneskelige primater og enkeltpersoner som hadde bukket under for pneumokokkinfeksjon. Likeledes, eksperimentelt infiserte mus reproduserbart utviklet hjerte microlesions. Hos mus ble mikrolesjon størrelse og antall positivt korrelert med varigheten og alvorlighetsgraden av bakteriemi, nivåer av hjerte troponin i sera, og avvikende hjerteelektrofysiologi. Bakteriell translokasjon inn i hjertet ble funnet å skje gjennom de samme mekanismer som er ansvarlig for translokasjon av pneumococcus over blod-hjernebarrieren og utvikling av pneumokokk meningitt, dvs. choline-bindende protein A-mediert invasjon av vaskulære endotelceller i et Laminin reseptor og blodplater -aktiverende faktor reseptor avhengig måte 8. Microlesion formasjon også nødvendig pneumokokk poredannende toksin pneumolysin som ble funnet å drepe kardiomyocytter 7.
Pneumokokkhjerte microlesions er forskjellig fra purulent bløtvevet og hjerte abscesser som er forårsaket av andre Gram-positive bakterier inkludert Staphylococcus aureus. Disse er karakterisert ved en enkelt foci av bakterier omgitt av neutrofiler og fibrinavsetning 9,10. Microlesions dannet av S. pneumoniae er mindre i størrelse, fordelt over et berørt hjerte, og mangler immun celleinfiltrater. Under de tidlige stadier av infeksjon, microlesions forårsaket av S. pneumoniae vises som områder av skadet eller betent vev som minner om de patologiske tegn på kardiomyopati. Noen monocytter kan observeres i løpet av denne tiden, men deres tilstedeværelse er kortvarig og lesjoner raskt bli nekrotisk i utseende og fylt med bakterier samtidig fortsetter å grow i størrelse inntil døden av dyr eller antimikrobielle intervensjon. Viktigere, innen 3 dager etter antibiotika intervensjon, er rikelig immuncelleinfiltrasjon observert ved tidligere lesjon området og dette er ledsaget av robust kollagen deponering. Lignende hjerte ombygging har blitt rapportert å forekomme etter infarkt sammen med varige konsekvenser på hjertefunksjon 11-15. Dermed microlesions er en potensiell forklaring på de negative kardiale hendelser som oppstår under IPD og muligens økt forekomst av hjerterelatert dødelighet i rekonvalesent personer som har overlevd sykdommen episoden.
Her, er undervisning gitt på den eksperimentelle musemodell for IPD og hjerteskade dannelse og visualisering av hjerte microlesions på tidlige og sene stadier av infeksjon. Protokollen for påvisning av kollagen deponering i dyr som har blitt reddet av antimikrobielle intervensjon blir demonstrert. Målet med denne artikkelen er å facilitate forskning av andre forskere på dette viktige og romanen pneumokokk patologi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
MERK: Alle mus eksperimenter ble gjennomgått og godkjent av Institutional Animal Care og Bruk komiteer ved The University of Texas Health Science Center på San Antonio (protokoll # 13032-34-01C). Dyr omsorg og eksperimentelle protokoller følges offentlig rett 89-544 (dyrevernloven) med endringer, offentlige helsetjenester retningslinjer, og Guide for omsorg og bruk av forsøksdyr (US Department of Health & Human Services).
1. Infeksjon
- Skaff BALB / c mus av begge kjønn i alderen 10-12 ukers alder.
MERK: S. pneumoniae serotype 4-stamme TIGR4 er en virulent klinisk isolat som har blitt sekvensert 16. - Vokser TIGR4 i Todd-Hewitt-buljong ved 37 ° C i 5% CO 2 til n en optisk tetthet (OD) 620 på 0,5 (tilsvarende 1,0 x 10 8 kolonidannende enheter [] CFU / ml). Pellet pneumokokk kulturen ved sentrifugering i 10 minutter ved 3500 xg og fjern supernatanten ved hjelp av en vakuumledning. Suspen og fortynn bakterier med steril fosfatbufret saltløsning (PBS) til en endelig konsentrasjon på 1,0 x 10 4 CFU / ml.
- Ved hjelp av en induksjonskammeret, bedøve mus med 2,5% fordampet isofluran i oksygen. Bekreft bedøvet tilstand ved forsiktig tå klype med butt pinsett.
- Holder bedøvet mus ved sin Scruff og oppreist med én hånd, injisere hver mus intraperitonealt (ip) med 100 mL av S. pneumoniae suspensjonen ved hjelp av en sprøyte med en 27 til 30 gauge nål (svarende til en eksponeringsdose på 1,0 x 10 CFU 3). Plasser musen tilbake i buret sitt. Mus vanligvis vekke 30-40 sek etter injeksjon.
- Tillate infeksjonen å fortsette i minst 24 (tidlig) eller 30 (avansert) hr.
- Avlive mus ved CO 2 kvelning. Utføre halshugging for å sikre mus har avgått ved døden. Avlivning blir ytterligere bekreftet ved fjerningav hjertet i trinn 1.6.
- Desinfiser halen med en spritserviett og klipp en 2-3 mm seksjon. Samle 2 ul blod og serielt fortynnet blod 10 ganger i PBS inneholdende natrium-heparin 1 U / ml fem ganger. Tallerken seriefortynninger på et tryptisk soya blodagar plate og inkuberes over natten ved 37 ° C i 5% CO 2. Den neste dag ekstrapolere kimtall nivået av bakteriemi.
- Immobilisere musen i liggende stilling på en kirurgisk plattform. Spray brystet med 70% etanol og tørk. Ved hjelp av kirurgiske saks og pinsett åpne brysthulen, fjerne brystkassen, og skjære over membranen for å avdekke hjerte og lunger. Bruke saks kutte blodkar koblet til hjertet og avgiftsdirektoratet forsiktig hjertet med forsiktighet for å unngå blåmerker med pinsett.
- Skyll hjerte med PBS og deretter plassere inn i vev prøveinnsamlings kassetter slike som koronalsnitt ville bli oppnådd i løpet av vev seksjonering. For parafin embedding, place kassettene i 10% bufret formalin-løsning og neste dag sender for parafin innebygging.
- Alternativt flash fryse ved hjelp oktober Forbindelse innenfor en cryomold som har blitt plassert på tørris.
2. Visualisering av Hjerte lesjoner og pneumokokker innen Lesjoner
- Kutt ned parafininnstøpte hjerte seksjoner slik at de fire hjertekamrene er synlige i hver vev delen. Skjær lysbilder på tykkelse på 5 um.
- Deparaffinize og beis lysbilder med hematoxylin og eosin (H & E) ved hjelp av standardmetoder 17.
- Vis H & E beiset hjertedelene med et lysmikroskop ved lave (100X, 200X) og høy (oljeimmersjon: 400X, 1,000X) forstørrelser. Karakter hjerter for tilstedeværelsen av microlesions i hjertemuskelen. Her, erverve H & E bilder med en Zeiss Axioskop 2 mikroskop utstyrt med en 100X 1.3 numerisk apertur Plan-NEOFLUAR objektiv.
MERK: på tidlige stadier hjerte lesions blir diskriminert ved deres differensial farget utseende, og i noen tilfeller nærværet av immunceller (monocytter og granulocytter) hva som synes å være monocytter. I avanserte lesjoner, særlig de som har sett på 30 hr, immunceller er fraværende og store vakuole-lignende lesjoner er observert i deres sted. Det er viktig å merke seg at mens immuncelle tilstrømning i den tidlige fasen av hjerteskade utvikling kan skje det ikke ut til å være et krav.
3. Immunofluorescent Mikros for pneumokokker innen Microlesions
- Seksjon hjerte i cryomolds med mikrotom til en tykkelse på 5 mikrometer og plassere deler over på positivt ladede glass. Tillate frosne hjerte seksjoner å tine og lufttørke. Fiks seksjoner for 10 min i 10% nøytral buffret formalin (pH 6,8 til 7,2 ved 25 ° C).
- Vask objektglass (3x) i PBS i 5 min, permeabilize i 15 min i 0.2% Triton X-100 i PBS, og deretter vaskes på nytt i PBS.
- Block vev secti på på objektglass med 10% geiteserum i PBS i 1 time.
- Skyll lysbilder med PBS, deksel og inkuberes hjerteseksjoner med kanin anti-serotype 4 pneumococcus antiserum i 1: 1000 i PBS med 10% geiteserum i 2 timer ved 37 ° C.
MERK: For negative kontroller etterforskere bør bruke naiv kaninantiserumet - Etter vasking med PBS, deksel og inkuberes seksjoner med 10% geiteserum-PBS med geit-anti-kanin FITC-konjugert antistoff ved 1: 2000 i 30 minutter ved 37 ° C.
- Etter produsentens anvisninger, bruker DAPI (4 ', 6 diamidino-to-phenylindole) på 5 mg / ml for visualisering av eukaryote cellekjerner. Vask og montere vevssnitt med FluorSave.
- Erverve fluorescerende bilder ved hjelp av et konfokal mikroskop System både lav og høy forstørrelse. Juster numerisk apertur tilsvarende for å oppnå optimale resultater. Her, erverve fluorescerende bilder ved hjelp av en confocal system med en 60X 1,42 numerisk apertur objektiv.
- Begynn med mus infisert ip med 1,0 x 10 3 CFU av TIGR4 som tidligere indikert i trinn 1.
- Begynnelsen på 30 timer etter infeksjon, administreres farmasøytisk kvalitet ip ampicillin (80 mg / kg kroppsvekt) i 100 ul saltvann hver 12. time i 36 timer. Samle hjerter på ønsket tidspunkt og prosessen som beskrevet i trinn 1.6 for parafin embedding og vev, seksjonering.
5. Kollagen Nedfall Detection
- Ved hjelp av xylen og graderte alkohol vasker med avionisert vann, deparaffinize og hydrat vevssnitt bruker standardmetoder 17. Behandle seksjoner med vandig 0,2% fosfomolybdensyre i 5 minutter og skylles med avionisert vann i 5 min.
- Beis seksjoner med 0,1% Sirius Red i pikrinsyre for 2 timer ved romtemperatur.
- Vask seksjoner i 0,01 N saltsyre i 3 minutter, og skylles med 70% etanol i 1 min.
- Dryerte seksjonene bruker identiske, men omvendt rekkefølge av vasker til at skissert i 5.1, dehydrerer hjerte seksjoner i økende og gradert konsentrasjoner av etanol da xylen.
- Mount vevssnitt med en monteringsløsning for mikroskopisk vurdering.
- Å identifisere regioner av kollagen deponering, undersøke farget vevssnitt for områder med dyp lese flekker henhold lav og høy forstørrelse ved hjelp av et lysmikroskop. Et område i ventriklene av hjertet som er rødt er et område hvor kollagen har blitt deponert. Områder uten denne røde flekken er områder av friskt vev mangler kollagen deponering. Heri, erverve pikro Sirius Røde farget bilder med et mikroskop utstyrt med en 20X 0.5 numerisk apertur objektiv.
MERK: atrium flekker røde i friskt vev.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Visualisering av Microlesions av H & E
Hjerte microlesions ble observert i ventriklene av H & E farget hjerte seksjoner fra mus med IPD følgende deres ip utfordring med TIGR4. Figur 1 viser økningen i størrelsen på disse lesjoner mellom 24 og 30 timer etter infeksjon (HPI), med større antall hematoxylin -stained (dvs. lilla-blå) pneumokokker synlig i lesjonen. Microlesions ble karakterisert ved en vakuole-lignende morfologi, tettere eosin (rød) farging av kardiomyocytter i cellene i umiddelbar nærhet av lesjonen området, diplokokker innenfor lesjoner, og en generell mangel på immunceller. Omtrent halvparten av lesjoner var ved siden av synlige blodkar. Mellom 24 og 30 HPI microlesions ble mer tallrike og vesentlig større. Ved 30 HPI ekstracellulære bakterier kan ofte sees streaming fra en lesjon mellom cellene.
Visualizatipå S. pneumoniae Bruke Immunofluorescent Mikros
Å visualisere og bekrefte at S. pneumoniae var faktisk i løpet av lesjoner ble immunofluorescerende farging for serotype 4 polysakkarid som produseres av TIGR4 (figur 2) benyttes. Bilder tatt viste tilstedeværelse av tettpakkede og tette aggregater av S. pneumoniae innen mikrolesjon nettsteder.
Bevis på Cardiac Arrdannelse
Pikro Sirius Red farging ble utført på hjerte seksjoner fra mus som hadde blitt reddet med ampicillin og friske kontroller. I antibiotika reddet rekonvalesent mus, var det en dramatisk økning i nærvær og intensitet av pikro Sirius Red flekken med band streaming fra det som ser ut til å være tidligere lesjon steder i ventriklene (figur 3). I motsetning til dette, ble det i ventriklene i kontrollseksjoner unstained indikerer at kollagen avsetning var fraværende (Ikke vist).
Til sammen utgjør disse resultater demonstrerer evnen til å visualisere hjerte microlesions i mus med alvorlig IPD, og for å få tilgang resulterende arrdannelse i ventriklene ved hjelp av standard histologiske prosedyrer. Viktigere er hjerte microlesions alltid knyttet til høye titer av S. pneumoniae og tiden som er nødvendig for å formidle deres dannelse.
Figur 1: Påvisning av microlesions i H & E farget hjerte seksjoner Representative bilder (1,000X) av hjerte microlesions observert ved 24 hor og 30 timer etter infeksjon.. Svart skala barer tilsvarer 10 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
filer / ftp_upload / 52590 / 52590fig2.jpg "/>
Figur 2: Immunofluorescent påvisning av S. pneumoniae innen hjerte microlesions. Immunofluorescent mikroskopi ved bruk av antistoff mot serotype 4 polysakkarid (grønn) bekreftet tilstedeværelsen av S. pneumoniae innen hjerte microlesions. Kjerner ble farget blå med DAPI. Hvit skala bar tilsvarer 20 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: Kollagen avsetning på et tidligere hjerte mikrolesjon nettstedet i en rekonvalesent mus Representant bilde (200X) viser en pikro Sirius Red farget hjerte mikrolesjon i ventrikkelen av en mus fem dager etter antibiotika intervensjon for i.vasive pneumokokksykdom. Rødt indikerer kollagen deponering. Svart skala bar tilsvarer 20 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne rapporten, til en svært reproduserbar metode indusere S. pneumoniae -mediert hjerte microlesions hos mus i løpet av IPD og teknikker for deres visualisering er demonstrert. Musene infiseres med en dose av bakterier som overgår immunsystemets terskel for klaring, som fører til høy grad av bakteremi, lik det som forekommer i løpet av human sepsis, og fører til slutt bakteriell translokasjon inn i hjertemuskelen. For ennå ukjente grunner, S. pneumoniae i hjertet er i stand til å gjenskape uanfektet av vertens immunrespons. Dette er gjenstand for pågående etterforskning og denne publikasjonen kan legge til rette for andre forskere i deres innsats for å delta.
H & E farging tillater mikrolesjon visualisering ved hjelp av standard lysmikroskopi siden kardiomyocytter flekken rosa til rødt, mens hjerte microlesions og bakterier innenfor flekken blå til dyp lilla. Denne skarp kontrast muliggjør enkel detectipå av de microlesions på senere stadier av infeksjon når lesjonene er større. For å verifisere tilstedeværelse av S. pneumoniae innen hjerte microlesions, ble immunofluorescent mikroskopi ved hjelp av antiserum mot serotype 4 kapselpolysakkarid som er gjennomført av TIGR4 utført. Viktigere er det spesifikke anti-kapsulært antistoff som skal brukes avhenger av serotype av pneumokokk-stammen som anvendes for eksperimentell utfordring. Alternativt kan etterforskere også bruke kommersielt tilgjengelige monoklonale antistoffer mot pneumolysin, den poredannende toksin S. pneumoniae, eller som gjenkjenner komponenter av pneumokokk celleveggen (dvs. TEPC-15). Mens disse antistoffene oppdage pneumokokker i hjertet, antyder tidligere erfaring at antistoffer mot kapselpolysakkarid gi de mest overbevisende bilder 7.
S. pneumoniae mediert hjerte mikrolesjon dannelse krever interaksjon avpneumokokk adhesin kolin bindende protein A med vertsprotein Laminin reseptor for bakteriell adhesjon til de vaskulære endoteliale celler og interaksjon av bakteriecellevegg-fosforylcholin med vertsBlodPlate-aktiverende faktor-reseptor for bakteriell transmigrasjon gjennom cellen 7,8. Det er derfor viktig å merke seg at mikrolesjon dannelse er tett knyttet til infeksiøs belastning og tid, noe som øker hyppigheten og varigheten av disse interaksjonene og gir tid for bakterier til å replikere og synlige lesjoner å utvikle seg. Vi har tidligere fastslått at en ip smittsom dose større enn 1,0 x 10 3 CFU S. pneumoniae belastning TIGR4 resulterer i altfor rask død av musen, og som et resultat dårlig lesjon formasjonen. Nedenfor oppstår denne smittsomme dose spontan klaring i noen mus og i andre forsinket utbrudd av alvorlig sykdom er observert. Ennå for mus utfordret med 1,0 x 10 3 CFU av TIGR4 mellom 24 og 36 timer,lesjoner raskt akkumuleres i antall og vokse i størrelse kontinuerlig til musen blir døende. Dermed må den smittsomme dose av infisere belastning å titreres for å gjenskape en lignende tilstand av sykdom med en døende tilstand utvikler seg i ikke mindre enn 30 HPI. Viktigere, har vi gjentatte ganger observert hjerteskade dannelse hos mus som ble infisert intranasal med 1,0 x 10 7 CFU og intratrakealt med 1,0 x 10 5 CFU av TIGR4. Etter disse utfordring ruter utvikling av alvorlig sykdom inntraff ved senere tidspunkter. Vi har også observert mikrolesjon dannelse med andre virulente stammer av S. pneumoniae, slik som serotype 2 isolat D39, men ved forskjellige frekvenser. Således lesjoner er ikke et resultat av ip-infeksjon rute eller spesifikke for TIGR4, men i stedet er knyttet til varigheten og alvorlighetsgraden av sykdommen episode. Heri vi anbefaler å infisere mus ip siden denne utfordringen ruten tilbyr den høyeste grad av reproduserbarhet. Hvis en different stamme av S. pneumoniae er brukt eller en annen smittsom rute er ønsket, etterforskere bør satse på bakteriemi på nivåer> 10 5 CFU ml blod i minst 24 timer.
Antimikrobielle intervensjon gjør studiet av hendelser som oppstår under rekonvalesens, modellering et menneske i Intensive Care Unit innstilling. Det er verdt å merke seg at ikke alle mus overleve til tross for antimikrobiell behandling og bekreftet bakteriell klaring. Etterforskerne bør forvente overlevelse mellom 50-60% og som sådan bør justere kohorten størrelse tilsvarende for å håndtere tapet av dyr. Regelmessig overvåking av dyr etter 24 timer er sterkt anbefalt for å sikre etterlevelse av Institutional godkjent dyre protokoller. Pikro Sirius rød farging er en enkel og vanlig teknikk som benyttes for å visualisere kollagenavsetning. Heri er det vist hvordan denne flekken kan brukes til å undersøke hjerte ombygging i ventriklene i hjertet etter en traumatisk infectious episode. Pikro Sirius rød ble valgt fremfor andre vanlig anvendte teknikker for å visualisere kollagenavsetning, for eksempel "Masson s Trichrome Stain", på grunn av den skarpe kontrast det tilbys mellom det avsatte kollagen og omgivende vev. Dette har vist seg å være enormt nyttig i vurderingen av omfanget av hjerteinfarkt kollagen deponering etter antibiotika i en kvantitativ måte ved hjelp av programvare som ImageJ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Todd-Hewitt broth | Neogen | 7161A | |
| O.C.T Compound | Tissue-Tek (Sakura Finetek) | 4583 | |
| Triton X-100 | Fisher Scientific (Acros) | 9002-93-1 | |
| Normal Goat Serum | Abcam | ab7481 | |
| anti-serotype 4 pneumococcus antiserum | Statens Serum Institut | 16747 | |
| goat anti-rabbit FITC conjugated antibody | Jackson ImmunoResearch | 111-096-144 | |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | |
| Fluorsave | Millipore | 345789 | |
| Permount | Fisher Scientific | S70104 | |
| Ampicillin | Sigma | A9393 | |
| phosphomolybdic acid 0.2% | Electron Microscopy Sciences | 26357-01 | |
| 0.1% Sirius Red in picric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-02 | |
| 0.01 N hydrochloric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-03 | |
| Tissue Tack Microscope Slides | Polysciences, Inc | 24216 | |
| Paralube Vet Ointment | Dechra | 12920060 | |
| Hematoxylin and Eosin Staining Kit | unspeciified | Standard |
References
- Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: incidence, timing, risk factors, and association with short-term mortality. Circulation. 125, 773-781 (2012).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Acute bacterial pneumonia is associated with the occurrence of acute coronary syndromes. Medicine (Baltimore). 88, 154-159 (2009).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: a systematic review and meta-analysis of observational studies. PLoS Med. 8, e1001048 (2011).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Risk stratification for cardiac complications in patients hospitalized for community-acquired pneumonia. Mayo Clin. Proc. 89, 60-68 (2014).
- Kumar, S., et al. Detection of 11 common viral and bacterial pathogens causing community-acquired pneumonia or sepsis in asymptomatic patients by using a multiplex reverse transcription-PCR assay with manual (enzyme hybridization) or automated (electronic microarray) detection. Journal Of Clinical Microbiology. 46, 3063-3072 (2008).
- Musher, D. M., Rueda, A. M., Kaka, A. S., Mapara, S. M. The association between pneumococcal pneumonia and acute cardiac events. Clin Infect Dis. 45, 158-165 (2007).
- Brown, A. O., et al. Streptococcus pneumoniae translocates into the myocardium and forms unique microlesions that disrupt cardiac function. PLoS Pathogens. In press, (2014).
- Orihuela, C. J., et al. Laminin receptor initiates bacterial contact with the blood brain barrier in experimental meningitis models. The Journal of Clinical Investigation. 119, 1638-1646 (2009).
- Flick, M. J., et al. Genetic elimination of the binding motif on fibrinogen for the S. aureus virulence factor ClfA improves host survival in septicemia. Blood. 121, 1783-1794 (2013).
- Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation. Trends Microbiol. 19, 225-232 (2011).
- Arenal, A., et al. Do the spatial characteristics of myocardial scar tissue determine the risk of ventricular arrhythmias. Cardiovasc Res. 94, 324-332 (2012).
- Deneke, T., et al. Human histopathology of electroanatomic mapping after cooled-tip radiofrequency ablation to treat ventricular tachycardia in remote myocardial infarction. J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 1246-1251 (2005).
- Bakker, J. M., et al. Reentry as a cause of ventricular tachycardia in patients with chronic ischemic heart disease: electrophysiologic and anatomic correlation. Circulation. 77, 589-606 (1988).
- Verma, A., et al. Relationship between successful ablation sites and the scar border zone defined by substrate mapping for ventricular tachycardia post-myocardial infarction. J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 465-471 (2005).
- Wu, K. C. Assessing risk for ventricular tachyarrhythmias and sudden cardiac death: is there a role for cardiac MRI. Circ Cardiovasc Imaging. 5, 2-5 (2012).
- Tettelin, H., et al. Complete genome sequence of a virulent isolate of Streptococcus pneumoniae. Science. 293, 498-506 (2001).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. CSH Protoc. 2008, (2008).
