Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

الحديديك تخثر نموذج الفأر على الشريان السباتي ومساريق السفينة التي يسببها كلوريد

doi: 10.3791/52838 Published: June 29, 2015

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

دراسة الآليات التي تشارك في تطوير تجلط الدم وتقييم فعالية العقاقير المضادة للالجلطات يتطلب راسخة النماذج الحيوانية التجريبية. وكانت نماذج حيوانية كبيرة أول من استخدامها لأنها توفر السفن الكبيرة أكثر مماثلة على البشر من القوارض 1. ومع ذلك، وارتفاع تكلفة، والمرافق الكبيرة المطلوبة وصعوبة التلاعب بها وراثيا هي العوائق الرئيسية لاستخدامها والحيوانات الكبيرة تقتصر الآن على الدراسات قبل السريرية في وقت متأخر مرة واحدة أعطت الاختبارات الأولية على القوارض نتائج قاطعة 2. مع توافر واسعة من السلالات المعدلة وراثيا وخروج المغلوب وصغر حجمها أن يقلل من كمية المخدرات جرعات اللازمة لفي الجسم الحي اختبار، وتستخدم الفئران أساسا للبحث تجلط الدم. لذلك، تم وضع عدة نماذج من اضطرابات الجلطة في الفئران 3.

العديد من النماذج الجلطة التي أنشئت تعطل intimطبقة من جدار الوعاء الدموي، تليها تعرض المصفوفة خارج الخلية البطانية الفرعية لتدفق الدم يحفز تشكيل جلطات الدم 4. والجلطة الدموية قد تنجم عن التعرض الكولاجين الذي يؤدي إلى تنشيط الصفائح الدموية و / أو من التعرض للعامل النسيج الذي ينشط شلال التخثر 5. ثم يتم توظيف العديد من التقنيات لتحقيق إصابة الأوعية الأولية. Pierangeli آخرون بتطوير نموذج تعطل الميكانيكية بأداة المجهرية في الوريد الفخذي 6. Kikushi وآخرون وصفت نموذج الذي يتكون في إدارة صورة مركب تفاعلي (روز البنغال) التي تتراكم في طبقة ثنائية الدهون من الخلايا البطانية التي تتبعها الإثارة محددة من جدار الوعاء الدموي في المصالح مع الضوء الأخضر (540 نانومتر) 7. ويمكن أيضا الإصابة ان يحدثها قصيرة عالية الكثافة نبضة ليزر إضاءة 8. تقنية أخرى أنشئت أولا على الشريان السباتي الفئرانيتكون في التطبيق الموضعي للكلوريد الحديديك (FeCl 3) 9. في هذه الحالة، فإن النتائج سفينة تعرية من الجذور الحرة الناتجة عن FeCl 3 الذي يسبب بيروكسيد الدهون وتدمير الخلايا البطانية 10. إصابة الحث على التعبير عن عدة جزيئات الالتصاق مما اثار التصاق الصفائح الدموية وتجميعها وكذلك الكريات البيض التوظيف. وقد ثبت أن الكريات البيض، ولا سيما العدلات، تلعب دورا حاسما في تفعيل شلال التخثر في الدم مما يؤدي إلى تجلط الدم 11. هذه الطريقة مناسبة تماما لإنتاج شلال التخثر. يجب أن المحققين أن نضع في اعتبارنا أنه في هذا النموذج الماوس، وعادة ما يسببها تجلط الدم في الأوعية صحية في حين تجلط الدم في البشر يحدث بشكل رئيسي في مثل المريضة. سفن تصلب الشرايين.

حيث أن هذا النموذج هو بسيط جدا لتنفيذ وفعال أيضا في الفئران، هو الآن في وضع تخثر تستخدم في الغالبلتر بالنسبة للحيوان صغير الدراسات المجراة. بالإضافة إلى ذلك، هذه التقنية توفر إمكانية للحث على تشكيل الجلطات في مجموعة متنوعة من السفن. يمكن السفن المستهدفة هي الشرايين أو الأوردة كبيرة قطرها (الشريان السباتي، الفخذ، الوريد الأجوف) أو القطر الصغير (مساريق، المشمرة) 12-14. وفي الآونة الأخيرة، تم استخدامه أيضا في الشريان الدماغي الأوسط القريبة لتطوير نموذج من السكتة الدماغية 15. تشكيل الجلطة يمكن ملاحظة مباشرة من قبل intravital المجهري بعد وضع العلامات الفلورية من الصفائح الدموية وكريات الدم البيضاء أو مراقبتها عن طريق قياس انخفاض تدفق الدم مع التحقيق في درجة الحرارة أو 12،16،17 دوبلر التحقيق. ويمكن بعد ذلك التحقيق العديد من المعلمات مثل الوقت انسداد، والوقت تشكيل خثرة أو حجم الجلطة. الفروق الفسيولوجية بين السفن التحقيق في نتيجة الاختلافات الكبيرة في الجلطات التي تم الحصول عليها. وبالتالي، والمحققين عادة ما تختار السفينة المستهدفة وفقا لمعايير يريدون measuإعادة و / أو المرض وضع يريدون التحقيق. عادة، ونموذج على الشريان السباتي هو أكثر ملاءمة للبحث عن atherothrombosis المتعلقة احتشاء عضلة القلب أو السكتة الدماغية في حين أن الدراسات على الوريد الأجوف هي أكثر ملاءمة للبحث عن الخثار الوريدي العميق. سهولة الحصول على سفن مختلفة يحدد أيضا الطريقة المستخدمة لقياس النمو الجلطة. على سبيل المثال، والأوعية المساريقي من السهل للوصول إلى صنع هذا النموذج مناسبة تماما لمراقبة مجهرية حيوي داخلي ودراسة ديناميات تشكيل خثرة. الشريان السباتي هو يصعب الوصول إليها ولكن أكبر مما قياس تدفق الدم وتوفر نموذجا ممتازا لدراسة تخثر انسداد.

قدمت كلوريد الحديديك نموذج تجلط الدم الناجم عن التقدم الهائل في فهم هذه الحالة المرضية. وقد تم استخدامه في العديد من الدراسات التي تركز على دور عامل فون ويلبراند في تشكيل الجلطة 18،19. جنبا إلى جنب مع مودى الجينيتقنيات fication، وقد سمح ذلك تحديد العديد من الجينات المحددة المعنية في اضطرابات الجلطات. العمراني وآخرون. وقد أظهرت مثلا أن في المغلوب من الجين JAK2 V617F يرتبط مع تشكيل المتسارع للجلطة غير مستقرة 20. تشانغ وآخرون. وقد حققت في تورط الفسيولوجية للمستقبلات P2Y12 الصفائح الدموية وأظهرت أن الفئران المعدلة وراثيا overexpressing على وجه التحديد هذا المستقبل في الصفائح الدموية فقط، عرض تشكيل خثرة أسرع وأكثر استقرارا في الشريان المساريقي أصيب FeCl 3 21. كما تم التحقيق في الدور الحاسم للمنشط البلازمينوجين الأنسجة من نوع (TPA) ويوروكيناز من نوع المنشط plasminogen (ميكرو) في عملية تدهور الليفين في هذه الطريقة 22. وعلاوة على ذلك هذا النموذج يوفر أيضا وسيلة بسيطة ودقيقة لاختبار القدرات الحال للفبرين العديد من الأدوية الجديدة في الجسم الحي. على سبيل المثال، قد استخدمت وانغ وآخرون. هذا النموذج لعشرالبريد التحقق من صحة ما قبل السريرية من رواية المؤتلف منشط البلازمينوجين تستهدف تنشيط الصفائح الدموية 23. كما مكنت هذه الطريقة التحقق من البروتينات العلاجية معزولة عن اللعابية من القراد، الخفافيش مصاصي الدماء، والبعوض أو من السم من الثعابين مع تحديد معين من الهدف 24-27. هذه الأمثلة تدل على براعة نموذج كلوريد الحديديك. في هذه المقالة، ونحن نركز على طريقتين ودراسة كلوريد الحديديك التي يسببها تجلط الدم على اثنين من نوع سفينة مختلفة. سفينة المساريقي والشريان السباتي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

تمت الموافقة على جميع التجارب التي تنطوي على الحيوانات من قبل البحوث الطبية ألفريد والمخفر جنة الأخلاقيات الحيوانية التعليم (E / 1534/2015 / B). وأجريت كافة المعالجات الجراحية تحت التخدير الكامل، ولم الحيوانات لا تواجه الألم في أي مرحلة. جميع التجارب وصفها هي عدم استرداد.

1. إعداد

  1. قطع العصابات رقيقة من ورق الترشيح (1 مم × 2 مم).
  2. طازجة إعداد 2 الحلول من كلوريد الحديديك من 4٪ (ث / ت) و 6٪ (ث / ت) المخفف في الماء منزوع الأيونات. إعداد رودامين 6G حل 0.3٪ في برنامج تلفزيوني وتصفيتها من خلال 0،22 ميكرون.
  3. قطع قطعة صغيرة (5 مم × 1 سم) من البلاستيك الأبيض من حقنة المجمع.

2. مساريق شرين الجلطة تشكيل لاحظها حيوي داخلي المجهر

  1. وزن 10-12 أسابيع من العمر من الذكور C57BL / 6 البرية نوع الماوس وتخدير وفقا لذلك مع خليط من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ) على الرغم من حقن داخل الصفاق. رصد عمق التخدير بواسطة استجابة إلى أخمص القدمين، وذيل و / أو قرصة الجلد، والتفاعل من قرصة القرنية والجفن، وغياب حركة شعيرات. إذا لزم الأمر، وضخ جرعة ثانية من الكيتامين (50 ملغ / كلغ) للحفاظ على التخدير للحيوان. تطبيق مرهم التعليم والتدريب المهني على العيون لمنع جفاف بينما تحت التخدير. ضع الماوس في طبق بتري صغير يوضع على وسادة التدفئة تعديلها ل37 ° C.
    ملاحظة: على الرغم من حقن IP قد يؤدي إلى ألم للحيوانات، ومدة هذا الانزعاج أن يكون الحد الأدنى (أقل من 3 ثوان). سيتم التقليل من الألم وعدم الراحة المرتبطة الحقن من خلال استخدام الموظفين ذوي الخبرة والكفاءة وحجم الإبرة المناسب (25 G). بعد كل الإجراءات والموت ببطء جميع الحيوانات باستخدام جرعة زائدة من الكيتامين وزيلازين تليها خلع عنق الرحم.
  2. إجراء شق خط الوسط في البطن من حوالي 3 سم في الجلد وقطع بعناية الصفاق.
  3. ضع الماوس على جانب من الحيوانات الأليفةطبق ري، من الداخل للظاهر بلطف الأمعاء وتنتشر بعناية مساريق مع 2 براعم القطن لجلب السفينة مناسبة لسطح طبق بتري. تجف بشكل صحيح مع ممسحة الحساسة.
    ملاحظة: للحد من حركة السفن المساريقي، الببافرين يمكن استخدامها لمنع الأمعاء التمعج.
  4. نقع ذيل الماوس في الماء الدافئ لتمدد الأوعية وضخ 30 ميكرولتر من رودامين 6G (0.3٪) في الوريد ذيل الفأر مع حقنة 29 G لتسمية الكريات البيضاء والصفائح الدموية.
  5. وضع طبق بتري تحت مجهر مقلوب والتركيز على شرين المختارة باستخدام قناة حقل مشرق.
  6. نقع عصابة من ورق الترشيح مع 6٪ (ث / ت) الحديد (III) كلوريد وتطبيق ورقة الترشيح على شرين مع اثنين من الملقط. أول من عقد ورقة الترشيح، ثانية واحدة للضغط برفق على المنطقة من الفائدة. نلاحظ تشكيل خثرة في 10 ثانية الأولى بعد خلع ورقة الترشيح.
    ملاحظة: إنه COMM جداوبالتالي إلى إصابة الأوعية الدموية الدقيقة تحيط والدقة من ترسب ورقة الترشيح والضغط بلطف أمر مهم للحد من هذه المسألة.
  7. نلاحظ تشكيل خثرة بواسطة المجهر مضان (TRITC قناة: الإثارة الذروة 557 نانومتر، ذروة الانبعاثات 576 نانومتر)، من خلال ورقة الترشيح. مراقبة الكريات البيضاء والصفائح الدموية المنتشرة التي اتخذت حتى رودامين 6G والتجميع الخاصة بهم في خثرة من السهل التعرف بالتالي.
  8. خذ ورقة الترشيح الخروج بعد 1 دقيقة من التعرض للحديد (III) كلوريد ومواصلة رصد تشكيل خثرة. غسل الإناء مع برنامج تلفزيوني.
  9. مراقبة وتسجيل تشكيل الديناميكي للخثرة الضوء مع وضع العلامات على الصفائح الدموية وكريات الدم البيضاء مع رودامين 6G. التقاط الصور وقياس حجم الجلطة. وقد تم الحصول على الصور هنا قدم مع مجهر حيوي داخلي مقلوب، على الرغم من و4X موضوعي، في القناة مضان TRITC.
  10. Following كافة الإجراءات، الموت ببطء الحيوان باستخدام جرعة زائدة من الكيتامين وزيلازين تليها خلع عنق الرحم.

3. الشريان السباتي الجلطة تشكيل المقررة من قبل الدم قياس سرعة تدفق

  1. وزن 10-12 أسابيع من العمر من الذكور C57BL / 6 الماوس وتخدير وفقا لذلك مع خليط من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ) على الرغم من حقن داخل الصفاق. تطبيق مرهم التعليم والتدريب المهني على العيون لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
  2. إصلاح الماوس تحت مجهر التشغيل باستخدام شريط لاصق على الساقين، وعلى وسادة التدفئة تعديلها ل37 ° C.
  3. جعل وسادة صغيرة من منديل واحد والشريط كان تحت رأسه من الماوس لرفع الرأس قليلا. استخدام حلقة موضوع مع ملقط لسحب الخطم إلى أسفل (استخدام الأسنان العلوية). وهذا تعريض المنطقة من الشريان السباتي ليسهل الوصول إليها.
  4. إجراء 5 مم شق صغير العميق للبشرة مباشرة تحت الفك، وصولا الى القص.
  5. تشريح كرة القدمSCIA وعزل جزء من إما إلى اليسار أو اليمين الشريان السباتي المشترك فوق التشعب.
  6. إدخال بعناية ملاقط في الفترات الفاصلة بين الشريان والعصب للفصل بينهما. لا تخل العصب تشغيل بالقرب من الشريان وتجنب لمس الكثير من الشريان السباتي لأنها قد تسبب الضرر للسفينة. عزل جزء من الأقل 5 ملم من الشريان.
  7. تجفيف المنطقة من الشريان بشكل صحيح مع مساحات لتجنب أن أي سائل يتداخل مع FeCl 3.
  8. وضع قطعة بلاستيكية صغيرة بيضاء تحت الجزء المعزول من الشريان السباتي المشترك حتى FeCl 3 لا نقع في الأنسجة المحيطة بها. لهذا الغرض، واستخدام ملقط الثانية لجلب قطعة لأول واحد ثم ببطء حرك ورقة من البلاستيك تحت الشريان.
  9. نقع قطعة من ورق الترشيح مع 4٪ (وزن / حجم) أو 6٪ (ث / ت) كلوريد الحديديك ووضعه في جميع أنحاء الشريان.
  10. بعد 3 دقائق من التعرض، خلع ورقة الترشيح، وشطف مع برنامج تلفزيوني وتجفيف منطقة ثمساحات إيث.
  11. وضع مسبار تدفق دوبلر حول سفينة في المنطقة المصابة وبدء تسجيل التغيرات في التدفق. في الشريان السباتي المشترك الصحي للفئران بالغة، وتدفق عادة حوالي 1 مل / دقيقة. الحذر! سوف نتصل لجنة التحقيق مع كلوريد الحديديك إلى تلف تحقيق ذلك يجب تجنب أي اتصال. وقد تم الحصول على البيانات هنا قدم مع متر أسرع من الصوت نظام شركة التدفق، TS420 حدة المحيطة بالأوعية مجهزة تدفق التحقيق نانو دوبلر 0.5 PBS.
    ملاحظة: يمكن للتركيز كلوريد الحديديك تعديل حركية تشكيل خثرة مما أدى إلى انسداد الأوقات المختلفة. وهكذا، فإن التعرض إلى 6٪ (ث / ت) ويعطي كلوريد الحديديك وانسداد أسرع من التعرض إلى 4٪ (ث / ت) كلوريد الحديديك.
  12. بعد كل الإجراءات والموت ببطء جميع الحيوانات باستخدام جرعة زائدة من الكيتامين وزيلازين تليها خلع عنق الرحم وتنظيف بعناية التحقيق دوبلر.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

والفلورسنت المراقبة intravital المجهري للمساريق سوف تكشف عن تراكم رودامين 6G وصفت الصفائح الدموية وكريات الدم البيضاء على طول جدار الوعاء الدموي أصيب FeCl 3. ويتم رصد تشكيل التدريجي لخثرة جزئية في وعاء مساريق 200 ميكرون (الشكل 1). A خثرة يظهر ببطء وبشكل واضح التعرف بعد الدقيقة الأولى من التعرض لFeCl 3 (الشكل 1، T = 60 ثانية). 40 ثانية بعد إزالة ورقة الترشيح غارقة مع FeCl وتخثر يتقدم بسرعة وأخيرا موجودة على جدار القسم سفينة كله لاحظ (الشكل 1، T = 100 ثانية).

الشكل 1
الشكل 1: الجلطة النمو التي لاحظها نيون حيوي داخلي المجهري على سفينة مساريق وقد أخذت صور في 15 ثانية، 60ثانية و 100 ثانية بعد خلع ورقة الترشيح غارقة مع 6٪ (ث / ت) FeCl 3 الحل. تمت إزالة ورقة الترشيح بعد 60 ثانية من التعرض. وصفت الكريات البيضاء والصفائح الدموية خلال مرحلة ما قبل حقن رودامين 6G (0.5٪ ث / ت). السهام الحمراء تشير الصفائح الدموية / الكريات البيض الركام. مقياس شريط 200 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

هو فعل لخثرة داخل الشريان السباتي من تطبيق ورقة تصفية المنقوع في FeCl 3 حل حول الشريان السباتي معزولة والتغيرات في تدفق الدم المصب للإصابة يتم تسجيلها مع لجنة التحقيق تدفق دوبلر (الشكل 2). تدفق الدم المستمر الإجمالي نحو 1.1 مل / دقيقة يقاس في الشريان السباتي غير المصابين. بعد تعرض 3 دقائق من السفينة مع ورقة تصفية المنقوع في 4٪ (وزن / حجم) FeCl 3 الحل، وهو خثرة سادة هي سbtained مع الوقت انسداد 13 دقيقة و 30 ثانية بعد بداية التعرض. بعد تعرض 3 دقائق مع ورقة تصفية المنقوع في 6٪ (ث / ت) FeCl بعد الحصول على خثرة سادة مع الوقت انسداد 9 دقيقة و 30 ثانية بعد بداية التعرض.

الرقم 2
الشكل 2. تم قياس الممثل تسجيلات من تدفق الدم من خلال الشريان السباتي بعد FeCl 3 إصابات. تدفق الدم مع تحقيق تدفق دوبلر وضعت على الشريان السباتي فقط المصب من ورق الترشيح المنقوع مع 4٪ (وزن / حجم) أو 6٪ ( ث / ت) FeCl 3. تمت إزالة ورقة الترشيح بعد 3 دقائق من التعرض. كما تم الحصول على التحكم في التدفق الدم عن طريق قياس الشريان السباتي صحي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وكلوريد الحديديك الناجم عن نموذج تجلط الدم هو أداة بحث ممتازة. كما هو مبين في هذه الدراسة، فمن السهل للغاية لتنفيذ وعندما تستخدم بالاقتران مع intravital المجهري أو دوبلر مقياس الجريان، فإنه يوفر جيد للرصد في الوقت الحقيقي من تشكيل خثرة. ضبط التعرض الوقت وتركيز FeCl كما أنها توفر إمكانية لإنتاج خثرة إما غير انسداد أو انسداد.

غير أن هذا الأسلوب أيضا بعض القيود. في الشريان السباتي، ولكن العائق الرئيسي هو أنه بالرغم من أن الوقت انسداد يمكن تعديلها على نحو فعال، واستنساخ النموذج لا يزال ضعيفا جدا للسيطرة على وجه التحديد حجم الجلطة ومعدل النمو 10. وقد عملت عدة مجموعات على توحيد 28،29 الطراز. أوينز وآخرون. اقترح ذلك الوقت انسداد موثوقة وقابلة للتكرار ويمكن الحصول مع الممارسة وعن طريق الحد من كل عوامل الاختلاف مثل عمرالفئران، والخلفية الوراثية للفئران، والتخدير المستخدمة، وتقنية لكلوريد الحديديك المعرض وتركيز محلول كلوريد الحديديك 28. التحقيق دوبلر نفسه لديه أيضا بعض القيود مع درجة معينة من إشارة الخلفية الحاضر والتي يمكن أن تؤثر على تحديد انسداد. ويمكن أيضا تغيير تدفق الدم عن طريق تشكيل خثرات غير مستقرة.

على متن السفينة المساريقي، قد تكون أثرت على استنساخ حسب حجم السفينة التي تختلف أكثر من الشرايين السباتية وجود الدهون التي قد يقلل من مدى خطورة الاصابة. وقد أفيد أن الجلطة الدموية التي تم الحصول عليها تختلف تبعا لحجم السفينة جدار الآفة التي قد تحد من البطانة ذرف أو كما تؤثر على خلايا العضلات الملساء في طبقة وسائل الإعلام 30. يشكل نموذج أشعة الليزر بديلا جيدا للنموذج كلوريد الحديديك الذي يوفر استنساخ أفضل 8. ومع ذلك، فإنه يقتصر على السفن الصغيرة التي هي شفافة بما فيه الكفاية لتمكين تغلغل الليزر. يجب أن يكون لاحظت أيضا أنه في هذا النموذج، يتم تدمير الخلايا البطانية بعد تطبيق كلوريد الحديديك وبالتالي فإنه ليست مناسبة لإجراء دراسات عن دور الخلايا البطانية. ومع ذلك، فإنه من الممكن أن تحل محل كلوريد الحديديك التي كتبها حامل الأيون الكالسيوم للحصول على إصابة الأضعف، يقتصر على تفعيل البطانة 31.

قيود أخرى من هذا النموذج هو أنه ليست مناسبة لدراسة التطور الطويل الأمد للمرض. لتحقيق هذا المطلب، Boulaftali وآخرون قد وضعت الدوائر ظهري طبقات الجلد التي تساعد على مراقبة نفس خثرة على مدى عدة أسابيع 32. يناسب هذا الأسلوب بشكل جيد خاصة لدراسة آثار الأدوية الحالة للخثرة وفقا لنضج الجلطة. في هذه الدراسة، تم العثور على الشيخوخة الجلطة يضر العمل التحللي من شكل المؤتلف من TISSUالبريد منشط البلازمينوجين، الذي يشغل حاليا منصب معيار الذهب من الأدوية الحالة للخثرة للاستخدام البشري.

وعلى الرغم من بعض السلبيات التي يجب أن تؤخذ في الاعتبار، ونموذج FeCl 3 هو ذات الصلة لدراسة تجلط الدم البشري. وقد تم تحليل تكوين الجلطات التي تم الحصول عليها في قسم النسيجي وجود الصفائح الدموية، الفيبرين وخلايا الدم الحمراء تم تحديدها في خثرة داخل الشريان السباتي 33. الى جانب ذلك، منذ يفترض اضطراب atherothrombotic إلى أن تبدأ من قبل oxydation من البروتينات الدهنية، الأمر الذي أدى إلى إصابة سفينة الرغم من وجود رد فعل للحد من oxido من المرجح أن تحاكي الفيزيولوجيا المرضية من الأمراض التي تصيب البشر من الميكانيكية والصور الكيميائية أو الليزر نموذج FeCl 3 الناجم عن إصابة 34.

خثرة شكلت على الرغم من كلوريد الحديديك كما تم وصفها لتكون حساسة لكلا تخثر والعقاقير المضادة للصفيحات. وقد الهيبارين وكلوبيدوقرل على سبيل المثال مندوبorted إلى تمديد الوقت انسداد الجلطة الدموية التي شكلت في الشريان السباتي 29. إدارة شكلا المؤتلف من هيرودين قد تطول كثيرا من الوقت تشكيل خثرة على مساريق الأوعية الدموية الدقيقة 17. لذلك، ويقدم نموذجا كلوريد الحديديك رؤى ممتازة في تجلط الدم، وهو أداة هامة للغاية للتحقق من صحة ما قبل السريرية من حال الخثرة الجديد، تخثر والعقاقير المضادة للصفيحات.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

فإن الكتاب أن نعترف الدعم الفني من الفرح ياو والدكتورة كارين البديل، فضلا عن تمويل من NHMRC وNHF.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Whatman chromatography paper GE Healthcare 3030917
Iron (III) chloride 40% (w/v) VWR 24212.298
Rhodamine 6G Sigma R4127
Inverted microscope  Olympus IX81
Digital black-and-white camera  Olympus XM10
Doppler flowmeter Transonic TS420
Nano-doppler flow probe Transonic 0.5 PBS
Ketamine Hospira  0409-2051-05
Xylazine (Rampun) Bayer 75313 
Petri dish Sarstedt 82.1472
Insulin syringe (29 G) BD Ultra-Fine 326103
Cotton tipped applicators BSN medical 211827A
Dynek dysilk sutures Dynek Pty Ltd CS30100
Dulbecco's phosphate buffer saline (PBS) Gibco life technologies 21600-069
Heating pad Kirchner T60

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43, (2), 101-116 (2000).
  2. Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis. Thromb Haemost. 81, (5), 835-843 (1999).
  3. Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. Murine thrombosis models. Thromb Haemost. 92, (3), 486-494 (2004).
  4. Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circ Res. 100, (7), 979-991 (2007).
  5. Furie, B., Furie, B. C. Mechanisms of thrombus formation. N Engl J Med. 359, (9), 938-949 (2008).
  6. Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74, (5), 1361-1367 (1995).
  7. Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18, (7), 1069-1078 (1998).
  8. Rosen, E. D., Raymond, S., et al. Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi. Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).
  9. Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride. Thromb Res. 60, (4), 269-280 (1990).
  10. Eckly, A., Hechler, B., et al. Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis. J Thromb Haemost. 9, (4), 779-789 (2011).
  11. Darbousset, R., et al. Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice. Pathol Biol (Paris). 62, (1), 1-9 (2014).
  12. Denis, C., Methia, N., et al. A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis). Proc Natl Acad Sci U S A. 95, (16), 9524-9529 (1998).
  13. Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice. Circulation. 125, (25), 3117-3126 (2012).
  14. Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor. J Thromb Haemost. 4, (2), 403-410 (2006).
  15. Karatas, H., Erdener, S. E., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. J Cereb Blood Flow Metab. 31, (6), 1452-1460 (2011).
  16. Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen. Blood. 103, (6), 1995-2002 (2004).
  17. Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo. Blood. 107, (10), 3902-3906 (2006).
  18. Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor. Blood. 120, (13), 2723-2732 (2012).
  19. Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B. Blood. 115, (23), 4870-4877 (2010).
  20. Lamrani, L., Lacout, C., et al. Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm. Blood. 124, (7), 1136-1145 (2014).
  21. Zhang, Y., Ye, J., et al. Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12. J Thromb Haemost. 10, (10), 2149-2157 (2012).
  22. Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator. Circulation. 106, (14), 1847-1852 (2002).
  23. Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets. Circ Res. 114, (7), 1083-1093 (2014).
  24. Decrem, Y., et al. Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis. J Exp Med. 206, (11), 2381-2395 (2009).
  25. Ma, D., et al. Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo. Blood. 122, (25), 4094-4106 (2013).
  26. Lei, X., et al. Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis. Thromb Haemost. 111, (2), 279-289 (2014).
  27. Waisberg, M., et al. Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis. PLoS Pathog. 10, (9), e1004338 (2014).
  28. Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model. J Thromb Haemost. 9, (9), 1862-1863 (2011).
  29. Wang, X., Xu, L. An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research. Thromb Res. 115, (1-2), 95-100 (2005).
  30. Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery. Thromb Res. 118, (2), 275-280 (2006).
  31. Bonnard, T., et al. Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm. Acta Biomater. 10, (8), 3535-3545 (2014).
  32. Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy. Thromb Haemost. 107, (5), 962-971 (2012).
  33. Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice. Circulation. 103, (4), 576-583 (2001).
  34. Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology. Redox Biol. 1, (1), 50-55 (2013).
الحديديك تخثر نموذج الفأر على الشريان السباتي ومساريق السفينة التي يسببها كلوريد
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bonnard, T., Hagemeyer, C. E. Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel. J. Vis. Exp. (100), e52838, doi:10.3791/52838 (2015).More

Bonnard, T., Hagemeyer, C. E. Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel. J. Vis. Exp. (100), e52838, doi:10.3791/52838 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter