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Medicine

नवजात सूअरों में आंतों लसीका ट्रंक और लसीका के संग्रह के लिए लंबी अवधि कैथीटेराइजेशन

Published: March 5, 2016 doi: 10.3791/53457
Automatic Translation
1, 1, 1, 2, 1
1Department of Agricultural, Food and Nutritional Science, University of Alberta, 2Department of Surgery, University of Alberta

Introduction

लसीका प्रणाली शरीर क्रिया विज्ञान के एक understudied क्षेत्र है। लसीका कैथीटेराइजेशन के Preclinical मॉडल विभिन्न जानवरों की प्रजातियों 1-8 में होते हैं और लिपिड 8-12 और दवा चयापचय 13-15, प्रयोगात्मक उपचार 17 के साथ कैंसर मेटास्टेसिस 16 में शामिल तंत्र की जांच करने के लिए दवा उद्योगों और अनुसंधान संस्थानों द्वारा किया जाता है, और प्रतिरक्षा समारोह 18 -26। इस अध्ययन में एक घरेलू सुअर मॉडल में आंत्र लसीका ट्रंक कैथीटेराइजेशन के उपयोग वाले लिपोप्रोटीन चयापचय के घटकों को मापने के लिए की पड़ताल। लिपोप्रोटीन चयापचय उत्पादन और chylomicrons के स्राव, साथ ही जुड़े लिपिड और कुल प्रोटीन में परिवर्तन में शामिल है। इन महत्वपूर्ण विचार के रूप में वहाँ आमतौर पर इस्तेमाल किया कृंतक मॉडल और मनुष्यों के बीच है और इस तरह के रूप में लिपिड चयापचय में प्रमुख मतभेद रहे हैं, सूअर मॉडल रोजगार आंतों लसीका इकट्ठा करने के लिए मेरे लिपिड का अध्ययन करने के लिए और अधिक तुलनीय जानकारी प्रदान कर सकता हैलोग 27-31 में चयापचय।

कई शल्य चिकित्सा तकनीक बड़े जानवरों की प्रजातियों में आंतों लसीका इकट्ठा करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं: एक कपाल कंधे दृष्टिकोण (यानी, वक्ष वाहिनी कैथीटेराइजेशन) 5, एक पार्श्व ऊपरी पार्श्व दृष्टिकोण 32-34, और एक उदर midline या paramedian दृष्टिकोण 22,35। इस वीडियो आंतों लसीका ट्रंक के कैथीटेराइजेशन के लिए एक उदर midline शल्य दृष्टिकोण का उपयोग स्वाइन में शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया को विस्तार से वर्णन है। सावधान सर्जिकल तकनीक परमिट लसीका कैथीटेराइजेशन की इस पद्धति समय की विस्तारित अवधि में लसीका की बड़ी मात्रा में एकत्र करने के लिए और उसके घटकों।

इस तकनीक को विभिन्न शारीरिक कार्यों की जांच में कई विषयों के लिए आवेदनों की एक बहुत बड़ी संख्या को खोलता है। अनुप्रयोगों में शामिल हैं, लेकिन हो सकता है, पूरे शरीर वाले लिपोप्रोटीन और लिपिड चयापचय, immunosurveillance, ट्यूमर उत्पत्ति और मेटास्टेसिस, आंत्र समारोह, और developm सीमित नहीं हैंईएनटी और आंतों की सूजन की बीमारी को बढ़ने से।

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Protocol

दोनों वीडियो और पांडुलिपि में वर्णित प्रयोगात्मक जानवरों पर सभी प्रक्रियाओं संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति ने मंजूरी दे दी और दिशा निर्देशों जानवरों की देखभाल के कनाडा परिषद द्वारा निर्धारित पीछा किया गया था।

1. सर्जिकल संज्ञाहरण और नवजात सूअर की शल्य चिकित्सा की तैयारी

  1. azaperone (0.3 मिलीग्राम / किग्रा), ketamine हाइड्रोक्लोराइड (10 मिलीग्राम / किग्रा), dexmedetomidine (15 माइक्रोग्राम / किग्रा): एक अलग प्रतीक्षा कक्ष में, एक इंट्रामस्क्युलर शामक-एनेस्थेटिक दवा युक्त कॉकटेल के साथ गर्दन के आधार के पास 25 किलो सूअरों premedicate।
    नोट: buprenorphine (0.005-.02 मिलीग्राम / किग्रा) बढ़ाया इंट्रा-ऑपरेटिव दर्द नियंत्रण के लिए पूर्व एनेस्थेटिक दवा कॉकटेल में जोड़ें।
  2. एक चेहरा मुखौटा का उपयोग (500 एमएल 1,000 मिलीग्राम / मिनट हे 2 पर 4-5% isoflurane) साँस isoflurane साँस लेना गैस के साथ सूअरों anesthetize। एक पशु चिकित्सा laryngeal गुंजाइश (17-25 सेमी लंबे सीधे ब्लेड) का उपयोग मुखर तार कल्पना, और मुखर करने के लिए सामयिक 10% lidocaine बधिया करना लागूडोरियों। lidocaine स्प्रे इंटुबैषेण के लिए 30-60 सेकंड से पहले मुखर रस्सियों से संपर्क करने के मुखर गर्भनाल ऐंठन और airway बाधा की संभावना को कम करने की अनुमति दें।
  3. मुखर रस्सियों के बीच एक cuffed अंतःश्वासनलीय ट्यूब (5.0-7.0 मिमी आंतरिक व्यास (आईडी)) से गुजर रहा सूअरों intubate और बनाए रखने के isoflurane गैस के साथ संज्ञाहरण (1,000-2,000 मिलीलीटर पर 0.5-2.0% isoflurane / मिनट हे 2) का उपयोग कर एक बंद सर्किट सर्जरी भर संवेदनाहारी प्रणाली rebreathing। जबड़े स्वर द्वारा संज्ञाहरण के स्तर पर, और दोनों पेडल और नेत्रच्छद पलटा प्रतिक्रियाओं का आकलन करें। समय सीमा समाप्त संवेदनाहारी गैस खा और शल्य सूट बाहर निकाल रहा है।
  4. एक 70% isopropyl शराब कुल्ला द्वारा पीछा 2.0% chlorhexidine शल्य साफ़ समाधान के साथ कान के बाहरी सतह को साफ करें। सर्जरी के दौरान, एक 20 जी नसों में कैथेटर के साथ, नसों में तरल पदार्थ (5-10 मिलीग्राम / किग्रा / घंटा Lactated घंटी समाधान) प्रदान करने के लिए एक कान की नस कैथीटेराइज़। मेड के साथ जीभ की श्लैष्मिक सतह के लिए एक नाड़ी oximeter सुरक्षितराजनैतिक टेप हृदय गति और परिधीय रक्त ऑक्सीजन की संतृप्ति (एसपीओ 2) की निगरानी के लिए।
  5. एक पृष्ठीय लेटा हुआ स्थिति में anesthetized सुअर की जगह और pubis के उदर पहलू के मध्य छाती दुमदारी से उदर पेट दाढ़ी। दो बारी 2.0% chlorhexidine शल्य चिकित्सा scrubs और बाँझ पानी washes के साथ इस क्षेत्र को साफ।
  6. शल्य सूट करने के लिए anaesthetized सुअर स्थानांतरण और 70% isopropyl शराब कुल्ला के अंतिम शल्य साफ़ लागू होते हैं, यह शुष्क करने की अनुमति देते हैं, और फिर जानवर कपड़ा।
  7. शरीर के तापमान पर नजर रखने के लिए मलाशय में एक गुदा तापमान जांच लगभग 2-4 सेमी डालें। एक पानी recirculating हीटिंग पैड पर सूअरों की जगह सामान्य शरीर के तापमान (38-40 डिग्री सेल्सियस) शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के दौरान बनाए रखने के लिए।
  8. पेट के आसपास एक overlying चतुर्थ भाग पैटर्न में रखा चार तौलिए पर्दे के साथ सुअर कपड़ा। पेट लगभग 5 ग के पार्श्व पहलू के साथ xiphisternum भर पहले कपड़ा रखें, दूसरे टांगनापेट midline के लिए मीटर पार्श्व। श्रोणि के ileal शिखा और चौथे कपड़ा भर में तीसरे कपड़ा रखें दूसरी टांगना की तरह, (हालांकि विपरीत पक्ष पर), पेट लगभग 5 सेमी उदर midline के लिए पार्श्व के पार्श्व पहलू के साथ रखा गया है।
  9. एक बड़ी मेज कपड़ा रखें, एक भट्ठा खोलने शल्य साइट के लिए उपयोग की अनुमति के साथ, अंतर्निहित तौलिया पर्दे पर और सुअर और पूरे शल्य चिकित्सा की मेज को कवर किया। अंतिम टांगना एक डिस्पोजेबल steri-कपड़ा बड़ी मेज टांगना पर रखा गया है।

2. पेट की सर्जरी और आंतों लसीका ट्रंक के कैथीटेराइजेशन

  1. अंतर्निहित पेट की मांसपेशियों को बेनकाब करने के लिए एक छुरी ब्लेड के साथ एक 20 सेमी त्वचा चीरा। पार्श्विका पेरिटोनियम बेनकाब करने के लिए मोनो ध्रुवीय electrocautery (20 वाट सेटिंग) के साथ पेट की मांसपेशियों की परतों काटकर अलग कर देना। पेट की आंत और लसीका पोत का उपयोग करने की Metzenbaum कैंची से पार्श्विका पेरिटोनियम की एक 20 सेमी रेखीय खंड खोलें।
  2. गर्म (37 डिग्री सेल्सियस) बाँझ पूरे शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के लिए नमक के साथ सभी ऊतकों गीला। धीरे पेट, अंधान्त्र, लघ्वान्त्र और पेट की गुहा से सूखेपन सहित आंत के एक बड़े वर्ग उठा और पेट के ऊपरी हिस्से, जिगर और लसीका पोत का उपयोग करने के लिए सुअर के बाईं ओर करने के लिए इसे अमल में। अतिरिक्त तौलिया पर्दे के साथ स्थिति में exteriorized आंत सुरक्षित एक गोफन धीरे आंत का समर्थन करने के रूप में।
  3. लसीका पोत जानें, यह लगभग 4 सेमी सही गुर्दे की नस, 6 सेमी Caval फोरमैन की दुम-medial- उदर और अग्न्याशय 22,36,37 के पास सही जिगर पालि की आंत का पहलू के नीचे के कपाल औसत दर्जे देता है। पोर्टल शिरा 36,37 की सही उदर खंड के लिए juxtaposed एक पारदर्शी संरचना के रूप में लसीका पोत को पहचानें।
  4. अलग लसीका Vessएल धीरे क्यू की नोक applicators के साथ संलग्न ऊतक दूर चिढ़ा द्वारा आसपास के प्रावरणी से। एक बार पोत के पार्श्व पहलुओं आसपास के ऊतकों से अलग हो रहे हैं, पोत के नीचे एक "सुरंग" खोलने ठीक कुंद साथ इत्तला दे दी संदंश पैदा करते हैं।
  5. ठीक संदंश के साथ लसीका पोत के नीचे तीन 2-0 रेशम टांके गुजरती हैं। सबसे दुम सिवनी ligate पहले, रोक देना चौड़ा करना और लसीका के साथ पोत को भरने के लिए। उद्देश्यपूर्ण लसीका पोत को कैथेटर सुरक्षित करने के लिए इस सिवनी अपेक्षाकृत लंबी (4 सेमी) के सिरों छोड़ दें। जगह दो अन्य टांके एक दूसरे से अलग कर दिया और लगभग 1.0 सेमी 1.0-1.5 सेमी सुरक्षित दुम सिवनी को कपाल कर रहे हैं। एक 'एकल ढीला संयुक्ताक्षर टाई' के साथ इन दो टांके छोड़ दो पोत में कैथेटर की तेजी हासिल करने के लिए अनुमति देने के लिए।
    नोट: लसीका सबसे दुम ligating सिवनी और (दो टांके के कपाल) मध्य सीवन के बीच स्थित पोत के खंड कैथीटेराइजेशन के लिए साइट है। सु के बारे मेंसंरचना सामग्री, 2-0 polyglactin सिवनी 2-0 रेशम टांके के लिए स्थानापन्न कर सकते हैं, यदि आवश्यक।
  6. आईरिस कैंची से पोत में एक छोटे से छेद में कटौती और ठीक कुंद संदंश के साथ पोत चौड़ा करना। पोत में एक beveled अंत के साथ विशेष कैथेटर ट्यूबिंग (4.06 बाहरी व्यास (ओवर ड्राफ्ट) एक्स 2.31 मिमी आईडी) के लगभग 1.0-1.5 सेमी डालें और दो कपाल टांके टाई जगह में कैथेटर सुरक्षित करने के लिए। पोत को कैथेटर सुरक्षित करने के लिए दुम सिवनी की लंबी सिवनी सिरों का प्रयोग करें।
  7. गर्म नमकीन की प्रचुर मात्रा के साथ exteriorized आंत से धो लें और धीरे पेट का सही शारीरिक स्थिति यह सुनिश्चित उदर गुहा को इसे वापस।
  8. (Paralumbar खात से 5-10 सेमी पेट के बल) बाईं ओर मध्य में कैथेटर अमल में। एक छुरी के साथ एक त्वचा चीरा और कैथेटर की बाह्यीकरण के लिए एक खोलने बनाने के लिए त्वचा की सतह के लिए उदर गुहा से एक trocar गुजरती हैं। पेट CAV से कैथेटर अमल में लाना एक बड़ी केली संदंश का प्रयोग करेंtrocar खोलने के माध्यम से अल्पसंख्यक।
  9. एक दौर (पतला) सुई के साथ 2-0 polyglactin सिवनी का एक सरल निरंतर सिवनी पैटर्न के साथ पार्श्विका पेरिटोनियम बंद करें। एक दौर सुई पर 2-0 polyglactin सीवन के साथ एक सरल बाधित धागा पैटर्न के साथ पेट की मांसपेशियों की परतों को बंद करें।
  10. एक काटने सुई पर 2-0 polyglactin सीवन के साथ एक subcuticular पैटर्न में त्वचा को बंद करें। एक पर्स-स्ट्रिंग धागा पैटर्न के साथ त्वचा और एक काटने सुई पर 2-0 नायलॉन सीवन को exteriorized कैथेटर सुरक्षित।
  11. सुअर पर एक विशेष जैकेट की जगह है, जबकि अभी भी अपनी नियुक्ति को कम करने और वसूली के दौरान सुअर के तनाव को कम करने के लिए anesthetized।

3. शल्य चिकित्सा के बाद वसूली और लसीका संग्रह

  1. साँस लेना संज्ञाहरण के विच्छेदन करने से पहले लगभग 10 मिनट, तत्काल बाद सर्जरी पीड़ानाश प्रदान करने के लिए bupenorphine (0.1 मिलीग्राम / किग्रा) प्रशासन intramuscularly। bupenorphine जारी (0.1 मिलीग्राम / किग्रा) 24-48 घंटा बनाए रखने के लिए हर 12 घंटाबाद सर्जरी पीड़ानाश।
  2. शल्य चिकित्सा के बाद जटिलताओं के लिए एक 7 दिन की अवधि के लिए हर 8-12 मानव संसाधन सूअरों की निगरानी।
  3. 500 मिलीलीटर polypropylene धोने की बोतलों में लसीका, ethylenediamine tetraacetic एसिड (EDTA), के साथ लेपित और एंटीबायोटिक दवाओं के साथ पूरक लीजिए; पेनिसिलिन (6,000 आइयू), स्ट्रेप्टोमाइसिन (6 मिलीग्राम) और amphotericin बी (3 मिलीग्राम) एक 7 दिन की अवधि के लिए हर 12 घंटा।

4. लिपोप्रोटीन ApoB48, ट्राइग्लिसराइड, कोलेस्ट्रॉल और कुल प्रोटीन की मात्रा लसीका से एकत्र

  1. 4 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिनट के लिए 1800 XG पर लसीका नमूना अपकेंद्रित्र। सतह पर तैरनेवाला लीजिए और ट्राइग्लिसराइड, कोलेस्ट्रॉल और कुल प्रोटीन की मात्रा का ठहराव के लिए इस्तेमाल करते हैं।
  2. एक undiluted नमूना, एक नमूना पतला 01:20 आसुत जल और एक अंतिम नमूना 1 पतला: आसुत जल के साथ 100 तीन नमूने में सतह पर तैरनेवाला फूट डालो।
  3. एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट के साथ, कोलेस्ट्रॉल के स्तर को मापने के लिए undiluted सतह पर तैरनेवाला का प्रयोग करें।
  4. 01:20 और 01:10 का प्रयोग करें0 पतला नमूने एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट और bicinchoninic एसिड कुल प्रोटीन परख क्रमश साथ ट्राइग्लिसराइड और कुल प्रोटीन का स्तर मापने के लिए।

5. लिपोप्रोटीन ApoB48 की मात्रा का ठहराव, लसीका 38 से एकत्र

  1. एक अनुकूलित प्रतिरक्षा पश्चिमी सोख्ता विधि के साथ 38 लिपोप्रोटीन ApoB48 की एकाग्रता का निर्धारण। 3-8% Tris-acetate- सोडियम सल्फेट dodecyl जेल वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस पृष्ठ) के साथ अलग-अलग कुल लसीका।
  2. एक एंटी-बकरी माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ यह बाँध, तो: एक polyvinylidene फ्लोराइड झिल्ली (0.45 माइक्रोन) के लिए अलग प्रोटीन स्थानांतरण और उन्हें ApoB (4,000 1) के लिए एक बकरी पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के साथ सेते हैं।
  3. शुद्ध कृंतक ApoB48 प्रोटीन मानक के साथ एक रेखीय densitometric तुलना का उपयोग कर chemiluminescence साथ लिपोप्रोटीन ApoB48 यों।

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Representative Results

नवजात सूअर की आंतों लसीका ट्रंक लसीका कैथीटेराइजेशन एक 7 दिन की अवधि में लगभग 1 एल केंद्रीय लसीका के / 24 घंटा के संग्रह की अनुमति देता है। लसीका इस प्रयोगों में एकत्र लिपिड चयापचय, अर्थात् कुल लसीका प्रोटीन, ApoB48 लिपोप्रोटीन, ट्राइग्लिसराइड्स, कुल प्रोटीन, और कोलेस्ट्रॉल के घटकों निहित। 1 टेबल पर प्रकाश डाला गया तीन सूअरों के जमा लसीका नमूनों से इन लिपिड घटकों के प्रतिनिधि मात्रा में। विशेष रूप से, लसीका प्रवाह और लिपिड घटक में लाइन केंद्रीय लसीका आंतों लसीका वाहिकाओं के कैथीटेराइजेशन निम्न अन्य जांचकर्ताओं द्वारा सूचना के मूल्यों के साथ (लसीका प्रवाह 570 ± 158-979 ± 284 मिलीग्राम / 24 घंटा 25, 360 ± 120 एमएलएल / 24 घंटा के लिए कर रहे 1080 720 ± मिलीग्राम / 24 घंटा 26, ट्राइग्लिसराइड 687 ± 110 एमजी / डीएल 9; कोलेस्ट्रॉल 63.1 ± 5.6 एमजी / डीएल 9); लसीका पोत के भीतर कैथेटर के उचित स्थान का संकेत है।

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चित्रा 2. एक तेजी से प्रोटीन तरल क्रोमैटोग्राफी (FPLC) प्रोफ़ाइल नवजात सुअर आंतों लसीका में chylomicron तैयारी की पवित्रता का प्रदर्शन है। तीन सूअरों एक 1.006 ग्राम / मिलीलीटर घनत्व ढाल ultracentrifugation प्रोटोकॉल का उपयोग कर अलग किया जाता है से एकत्र लसीका। प्रोफ़ाइल के लिए (ए) कोलेस्ट्रॉल और (बी) लसीका नमूने में ट्राइग्लिसराइड एक भी शिखर से पता चलता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

आकृति 1
चित्रा 1. एक प्रतिनिधि पश्चिमी धब्बा विश्लेषण नवजात सुअर आंतों लसीका में ApoB48 और ApoB100 लिपो प्रोटीन के योगदान का प्रदर्शन है। लसीका तीन से एकत्रसूअरों एक 1.006 ग्राम / मिलीलीटर घनत्व ढाल ultracentrifugation प्रोटोकॉल का उपयोग कर अलग किया जाता है। चित्रा निकाली गई ApoB100 प्लाज्मा का लगभग 15% के साथ संदूषण की एक छोटी राशि को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

लसीका लक्षण
ApoB48 (मिलीग्राम / एमएल) 3,022.4 ± ४४०.४
ट्राइग्लिसराइड (एमजी / डीएल) 607 ± २०३.६
कोलेस्ट्रॉल (एमजी / डीएल) 58.5 ± 9.6
परिणाम के रूप में मतलब ± एसडी व्यक्त कर रहे हैं (एन = 3)

आंतों लसीका की तालिका 1. अवयव नवजात सूअरों 7 दिन के बाद सर्जरी। परिणाम विदेश मंत्रालय दोहराया जाता है से एकत्रलसीका के उपायों और के रूप में व्यक्त मतलब एसडी (एन = 3)

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Discussion

आंतों लसीका एकत्रित लिपिड 8-12 और 13-15 दवा चयापचय, कैंसर मेटास्टेसिस 16,17, सेल तस्करी और प्रतिरक्षा समारोह 18-26 में शामिल तंत्र, विभिन्न प्रयोगात्मक पशु मॉडल में जांच के लिए एक शानदार तरीका है। दरअसल, एक विस्तारित अवधि के दौरान या तो परिधीय (अभिवाही) और सेंट्रल (अपवाही और बड़े ट्रंक वाहिकाओं) लसीका की बड़ी मात्रा में फसल के लिए क्षमता अस्थायी परिवर्तन है कि प्रतिरक्षा modulating एजेंटों 18-22 के साथ चुनौतियों के बाद सेल आबादी में होते हैं समझने के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण हो गया है , 25,26। इसी तरह, केंद्रीय लसीका के संग्रह लिपोप्रोटीन चयापचय 8-12 में शामिल प्रक्रियाओं का वर्णन करने में मददगार रहा है। लसीका संग्रह की उपयोगिता कैथीटेराइजेशन प्रक्रिया की सफलता और लसीका पोत के भीतर कैथेटर की प्रत्यक्षता पर निर्भर है।

में शामिल प्रमुख लसीका वाहिकाओं के कैथीटेराइजेशनबड़े जानवरों में आंतों लसीका जल निकासी आम तौर पर तीन शल्य तरीकों में से एक का उपयोग करता है। पहली तकनीक वक्ष वाहिनी आम गले नस (गाय वक्ष वाहिनी) 5 overlying प्रवेश करने के लिए एक कपाल कंधे दृष्टिकोण का उपयोग करता। दूसरी सही गुर्दे 32,33 के मध्य पार्श्व पहलू पर एक ऊपरी पार्श्व दृष्टिकोण का उपयोग करता। तीसरे तकनीक के इस वीडियो में वर्णित के रूप में अग्न्याशय के पास आंतों लसीका ट्रंक बेनकाब करने के लिए या तो एक या उदर midline paramedian 22,35 laparotomy रोजगार और पोर्टल शिरा 22,36,37 की सही उदर पहलू को juxtaposed। हालांकि दोनों ऊपरी पार्श्व और उदर midline शल्य चिकित्सा तकनीक आंतों लसीका ट्रंक के कैथीटेराइजेशन सक्षम, हमें विश्वास है कि उदर midline दृष्टिकोण पेट के ऊपरी हिस्से में पर्याप्त स्थान को संभालने और पोत में हेरफेर करने के साथ पोत के बेहतर प्रदर्शन के लिए अनुमति देता है।

महत्वपूर्ण बात है, किसी भी सर्जरी में प्रयोगात्मक रूप में वहाँ कदम है कि पार्टी कर रहे हैंcularly प्रयोगात्मक प्रक्रिया के सफल परिणाम के लिए महत्वपूर्ण है। वहाँ चार प्रमुख क्षेत्रों है कि सावधान ध्यान आंतों लसीका पोत का उपयोग करने के उदर midline दृष्टिकोण का उपयोग की आवश्यकता है। सबसे पहले, exteriorized आंत के लिए उत्कृष्ट रक्त की आपूर्ति की आवश्यकता है, के रूप में आंत करने के लिए लंबे समय तक समझौता परिसंचरण लाती इस्कीमिक आंतों श्लैष्मिक गल जाना और शल्य चिकित्सा की विफलता। इस प्रक्रिया में एक 'तौलिया गोफन' उत्कृष्ट ऊतक छिड़काव सुनिश्चित आंतों के वजन का समर्थन करके mesenteric रक्त वाहिकाओं पर तनाव कम कर देता है। दूसरा, सहित पोत से सावधान जोड़तोड़:, प्रावरणी और वसा ऊतकों आसपास डालने और मजबूती से लंबी अवधि के लसीका संग्रह के लिए पोत के भीतर कैथेटर हासिल करने से पोत की रिहाई के सफल कैथीटेराइजेशन के लिए महत्वपूर्ण है। दरअसल, यह सुझाव दिया है कि नवजात सूअरों में जहाजों की संरचनात्मक अखंडता के रूप में मजबूत परिपक्व पशुओं में और इस तरह के रूप में आसानी से 39,40 फाड़ कर सकते हैं नहीं है 41 में गैर आंतों लसीका की लंबी अवधि लसीका संग्रह के साथ, यह बहुत मुश्किल कैथेटर से थक्का हटाने के रूप में थक्का कैथेटर के भीतर विकसित और गहरे बैठा लसीका पोत के भीतर है। नतीजतन, यह बहुत (लगभग 40%) जानवरों को सफलतापूर्वक लंबे समय तक प्रयोग (अप्रकाशित डेटा) के लिए catheterized की संख्या कम हो जाएगा। इसलिए, यदि लसीका प्रवाह धीमा है या प्रक्रिया के दौरान बंद कर दिया गया है, लसीका कैथेटर cranially प्रारंभिक कैथीटेराइजेशन साइट से 0.5-1 सेमी reinserted किया जाना चाहिए।

वैज्ञानिक सवालों की जांच करने के लिए इस्तेमाल सभी मॉडलों inherant सीमाओं और आंतों लसीका ट्रंक के कैथीटेराइजेशन कोई अपवाद नहीं है। प्रक्रिया के लिए सबसे स्पष्ट सीमा अक्षमता को प्रभावी ढंग से अलग-थलग लसीका पोत कैथीटेराइज़, और पोत के भीतर कैथेटर को स्थिर करने के लिए है। जैसे, इस प्रक्रिया उत्कृष्ट तकनीकी और शल्य चिकित्सा कौशल के साथ लोगों की आवश्यकता हैएस। एक अन्य महत्वपूर्ण सीमा प्रमुख पेट की सर्जरी के दौरान लंबे समय तक शल्य बार जोखिम और शल्य चिकित्सा के बाद रुग्णता और मृत्यु दर बढ़ जाती है। विशेष रूप से, हालांकि, हमारे प्रयोग में सूअरों जल्दी सर्जरी से बरामद किया है और वहाँ इस तरह के संक्रमण, आंतों आन्त्रावरोध, अत्यधिक ऊतक चोट, या प्रक्रिया के बाद अनिच्छा के रूप में कोई कठिनाई नहीं थे। निश्चित रूप से, सूअर ambulating और सामान्य रूप से 24 घंटे बाद सर्जरी खाने, उज्ज्वल, उत्तरदायी होने के लिए मनाया गया है और इस दिन 7 लसीका संग्रह की अवधि में जारी रखा। विशेष रूप से, हालांकि सीरम chemistries या पूर्ण रक्त की गिनती के 7 दिन के प्रयोग के बाद इन सूअरों में मूल्यांकन नहीं किया गया, भेड़ 41 में लंबी अवधि के लिम्फ संग्रह में जांचकर्ताओं द्वारा पिछले काम दिखा दिया है कि catheterized भेड़ leukopenic, lymphopenic, इलेक्ट्रोलाइट असंतुलन या hypoproteinemic साथ कभी नहीं थे चिकित्सकीय गरीबों के स्वास्थ्य (अप्रकाशित डेटा) में चित्रित किया। महत्वपूर्ण बात है और जैसा कि ऊपर कहा गया है, इस अवलोकन catheteri करने के लिए संबद्धजेड सूअरों भी अच्छे स्वास्थ्य के नैदानिक ​​विशेषताओं को प्रदर्शित।

दिलचस्प है, जांचकर्ताओं लसीका प्रवाह की मात्रा में बदलाव का उल्लेख किया। प्रवाह जब सूअरों खिला रहे थे और दैनिक एकत्र लसीका इस समय में होने वाली का लगभग 70% के साथ सक्रिय दिन के दौरान सबसे बड़ा था। लसीका प्रवाह के शेष 30% आराम और नींद के दौरान शाम को होता है।

लसीका नमूने के आगे लक्षण वर्णन आंकड़े 1, 2 और में प्रदान की जाती हैं तालिका 1। चित्रा 1 प्लाज्मा के लगभग 15% निकाली गई ApoB100 के साथ संदूषण की एक छोटी राशि को दर्शाता है। आंतों लसीका भीतर प्लाज्मा लिपोप्रोटीन की उपस्थिति एक अवलोकन है कि अक्सर सूअरों 42 में होता है। दूध पिलाती सूअरों में, लिपोप्रोटीन के बहुमत जिगर द्वारा निर्मित और प्लाज्मा में जारी की है। प्लाज्मा से, ApoB100 संभावना lacteals 42 इकट्ठा करने में और फिर लसीका संवहनी नेटवर्क के माध्यम से seepsआंतों लसीका ट्रंक में नालियों। क्रोमैटोग्राफी के विभिन्न तरीकों एकत्र लसीका नमूने 42-45 में कोलेस्ट्रॉल, ट्राइग्लिसराइड्स और अन्य फॉस्फोलिपिड सामग्री का आकलन करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। चित्रा 2 में एक चोटी स्पष्ट रूप से दर्शाता है कोलेस्ट्रॉल और ट्राइग्लिसराइड्स chylomicron अंश में मौजूद हैं। इस विधि की रूपरेखा लसीका लिपो प्रोटीन का एक सुविधाजनक और सटीक तकनीक है और जब आंतों लसीका 45 से chylomicron नमूनों की पवित्रता का आकलन करने पर विचार किया जाना चाहिए। अंत में, 1 टेबल नवजात सूअरों 7 दिन के बाद सर्जरी से एकत्र आंतों लसीका के जैव रासायनिक घटकों प्रदान करता है।

अंत में, आंतों लसीका ट्रंक के लिए लंबी अवधि के कैथीटेराइजेशन युवा सूअरों में सफल रहा है। इस तकनीक के साथ, लसीका कैथीटेराइजेशन इकट्ठा करने और लिपिड चयापचय के घटकों की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। लसीका, उत्पादन लसीका की राशि की पवित्रता और लिपिड चयापचय के घटकों की मात्राअन्य प्रयोगों 9,25,26,42 में सुअर केंद्रीय लसीका में मौजूद मात्रा के समान हैं। परिणामों से संकेत मिलता है कि सावधान ऊतक विच्छेदन और पोत युवा सूअरों में आंतों लसीका ट्रंक कैथीटेराइज़ को संभालने के साथ एक उदर midline शल्य दृष्टिकोण को रोजगार के लिए एक शानदार तरीका केंद्रीय लसीका की बड़ी मात्रा में जमा है।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Miller laryngoscope blade Welch Allyn 68044 182 mm length
Surgivet advisor: Vital signs monitor Surgivet V9203
Rectal temperature probe Surgivet V3417
Mono-polar electrosurgery generator Valley Lab
Metzenbaum scissors Fine Science 14518-18
Tuffier retractor Stevens 162-11-676
Mosquito forceps Stevens 162-7-10
Kelly forceps-curved (14cm) Stevens 162-7-38
Allis tissue forceps Stevens 162-7-38
Forceps dressing-eye (10.2cm) Stevens 162-18-780
Forceps dressing-Adison (12.1cm) Stevens 162-17-2510
Needle Drivers Stevens 162-V98-42
Iris scissors Fine science 14058-11
Circulating water pump Jorvet J-783X
Maxitherm-Vinyl blanket Jorvet J-784C
Q tip applicators Fisher Scientific 22-037-960
Catheterization  tubing (4.06 OD X 2.31 ID) Braintree Scientific Inc. MRE-160 Micro-Renethane implantation tubing
2-0 silk suture Ethicon LA556
2-0 polyglactin suture Ethicon J443H 2-0 vicryl
Large animal jacket Lomir Biomedical Inc. SSJ2YC
Polypropylene wash bottles Fisher Scientific 03-409-22C 500 ml
Penicillin-Streptomycin Sigma Aldrich D4333
EDTA Sigma Aldrich 60-00-4
Amphotericin B Sigma Aldrich A2411
Azaperone Elanco Animal Health Stresnil
Dexmedetomidine hydrochloride Zoetis 6295 Dexdomitor
Isoflurane Abbott Animal  Health 05260-5 IsoFlo
Ketamine hydrochloride Zoetis 2626 Ketaset
Bupenorphine hydrochloride Champion Alstoe Animal Health DIN:02347510
6 mm Endotracheal tube Jorvet J-165d
10% Lidocaine spray AstraZeneca DIN:02003767
4 % Chlorhexidine surgical scrub Partnar Animal Health PCH-011 Diluted: 2.0% solution
3M Surgical steri- drape 3M Health Care 1040
SDS page gel Invitrogen EA0375BOX 3-8 % tris acetate
Polyvinylidene fluoride membrane Millipore IPVH00010 0.45 μm pore size
ApoB antibody  EMD Millipore AB742 1:4000 dilution
Donkey anti-goat IgG-HRP Santa Cruz Biotechnology Sc-2304
ECL Prime Western Blotting Reagent GE Healthcare LifeSciences RPN2232   
Triglyceride Kit Wako Pure Chemicals 998-40391/994-40491
Total Cholesterol Kit Wako Pure Chemicals 439-17501
Total Protein  Pierce  23225 Bicinchoninic Acid Assay

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References

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Uwiera, R. R., Mangat, R., Kelly, S., Uwiera, T. C., Proctor, S. D. Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs. J. Vis. Exp. (109), e53457, doi:10.3791/53457 (2016).

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