Introduction
Il sistema linfatico è una zona poco studiato della fisiologia. Modelli preclinici di cateterizzazione linfatico si verificano in diverse specie animali 1-8 e sono utilizzati da industrie farmaceutiche e istituti di ricerca per studiare i meccanismi coinvolti nella lipidico 8-12 e 13-15 metabolismo dei farmaci, metastasi del cancro 16 con trattamento sperimentale 17, e la funzione immunitaria 18 -26. Questo studio esplora l'utilizzo di cateterizzazione intestinale tronco linfa in un modello di maiale domestico per misurare i componenti del metabolismo delle lipoproteine. metabolismo Lipoprotein è coinvolta nella produzione e secrezione di chilomicroni, così come i cambiamenti in lipidi associati e proteine totali. Queste sono considerazioni importanti in quanto vi sono grandi differenze nel metabolismo lipidico tra modelli di roditori comunemente usati e gli esseri umani e in quanto tali, impiegando modelli suini per raccogliere linfa intestinale potrebbe fornire informazioni più comparabili per lo studio dei lipidi memetabolismo nelle persone 27-31.
Diverse tecniche chirurgiche vengono utilizzati per raccogliere la linfa intestinale in grandi specie animali: un approccio spalla cranica (vale a dire, toracico condotto cateterizzazione) 5, una laterale approccio fianco superiore 32-34, ed una linea mediana ventrale o approccio paramediano 22,35. Questo video descrive in dettaglio la procedura chirurgica in suina utilizzando un approccio chirurgico ventrale linea mediana per la cateterizzazione del tronco linfatico intestinale. Un'attenta tecnica consente chirurgiche questo metodo di cateterizzazione linfatico per raccogliere grandi quantità di linfa ei componenti per periodi di tempo prolungati.
Questa tecnica apre una miriade di applicazioni per molte discipline che esaminano le varie funzioni fisiologiche. Le applicazioni potrebbero includere, ma non sono limitati a, tutto lipoproteine corporeo e il metabolismo dei lipidi, immunosorveglianza, genesi tumorale e le metastasi, la funzione intestinale, e la svient e la progressione della malattia infiammatoria intestinale.
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Protocol
Tutte le procedure su animali sperimentali descritte in entrambi i video e manoscritti sono stati approvati dal Comitato di Cura e uso istituzionale degli animali e hanno seguito le linee guida stabilite dal Consiglio canadese di cura degli animali.
1. Anestesia chirurgica e preparazione chirurgica dei maiali neonatali
- In un antibagno separato, Premedicare 25 kg maiali vicino alla base del collo con una intramuscolare cocktail di farmaci sedativi-anestetico contenente: azaperone (0,3 mg / kg), ketamina cloridrato (10 mg / kg), la dexmedetomidina (15 mg / kg).
Nota: Aggiungere buprenorfina (0,005-0,02 mg / kg) nel cocktail di droga pre-anestetico per una maggiore controllo del dolore intra-operatorio. - Anestetizzare i maiali con inalato gas inalazione isoflurano (4-5% isoflurano a 500 ml-1000 ml / min O 2) utilizzando una maschera. Visualizza le corde vocali con un campo di applicazione della laringe veterinario (lunga 17-25 cm lama dritta), e applicare attualità il 10% lidocaina spay alla vocecorde. Lasciare lo spray lidocaina per contattare le corde vocali 30-60 secondi prima di intubazione per ridurre la possibilità di spasmi delle corde vocali e ostruzione delle vie aeree.
- Intubare i maiali passando un tubo endotracheale a manicotto (5,0-7,0 mm di diametro interno (ID)) tra le corde vocali e mantenere la dell'anestesia con il gas isoflurano (0,5-2,0% isoflurano a 1.000-2.000 ml / min O 2) utilizzando una chiusa circuito rebreathing sistema di anestesia durante l'intervento chirurgico. Valutare il livello di anestesia dal tono della mascella, ed entrambi i pedali e palpebrali risposte riflesse. gas anestetico scaduto è scavenging e ventilato al di fuori della sala operatoria.
- Pulire la superficie esterna del padiglione auricolare con il 2,0% clorexidina soluzione lavaggio chirurgico seguito da un risciacquo alcool isopropilico al 70%. Con un catetere endovenoso 20 G, cateterizzare una vena orecchio per fornire fluidi per via endovenosa (soluzione di Ringer lattato; 5-10 ml / kg / ora) durante l'intervento chirurgico. Fissare un pulsossimetro alla superficie della mucosa della lingua con mednastro iCal per monitorare la frequenza cardiaca e la saturazione di ossigenazione del sangue periferico (SpO2).
- Posizionare il maiale anestetizzato in posizione reclinata dorsale e radere l'addome ventrale dalla metà torace caudalmente all'aspetto ventrale del pube. Pulire questa zona con due alternando 2,0% clorexidina scrub chirurgico e lavaggi acqua sterile.
- Trasferire il maiale anestetizzato alla suite chirurgica e applicare il lavaggio chirurgico finale del 70% di risciacquo alcol isopropilico, lasciarlo asciugare, e poi drappo l'animale.
- Inserire una sonda di temperatura rettale di circa 2-4 cm nel retto per controllare la temperatura del corpo. Posizionare i maiali su una piastra elettrica a ricircolo d'acqua per mantenere la temperatura corporea normale (38-40 ° C) durante la procedura chirurgica.
- Passare il maiale con quattro asciugamani teli disposti in uno schema quadrante sovrastante intorno all'addome. Posizionare il primo drappo attraverso xiphisternum, il secondo telo lungo faccia laterale del ventre a circa 5 cm lateralmente alla linea mediana addominale. Posizionare il terzo copre tutta la cresta ileale del bacino e il quarto drappeggio, come il secondo telo (anche sul lato opposto), è posto lungo la faccia laterale dell'addome circa 5 cm lateralmente alla linea mediana addominale.
- Mettere un grande drappo tavolo, con una fessura di apertura che consente l'accesso al sito chirurgico, nel corso dei sottostanti tende asciugamano e coprire il maiale e tutto il tavolo operatorio. Il drappo finale è un steri-drappo monouso posto sopra il grande tavolo drappeggio.
2. chirurgia addominale e cateterizzazione della intestinale linfatico Tronco
- Fare un 20 centimetri incisione cutanea con una lama di bisturi per esporre i muscoli addominali sottostanti. Incidere strati muscolari addominali con elettrocauterizzazione mono-polare (20 impostazione Watt) per esporre il peritoneo parietale. Aprire un segmento lineare 20 cm peritoneo parietale con le forbici Metzenbaum per accedere visceri addominali e dei vasi linfatici.
- Bagnare tutti i tessuti con acqua calda (37 ° C) soluzione salina sterile per tutta la procedura chirurgica. Sollevare delicatamente un ampio segmento della intestinali, comprese colon, cieco, ileo e digiuno dalla cavità addominale e esteriorizzare al fianco sinistro del maiale per accedere alla parte superiore dell'addome, fegato e vasi linfatici. Fissare l'intestino esteriorizzato in posizione con tende asciugamani aggiuntivi in modo da formare una fionda per sostenere delicatamente l'intestino.
- Individuare il vaso linfatico, depone circa 4 cm cranio-mediale della vena renale destra, 6 cm ventrale caudale-medial- dei capireparto cavali e sotto l'aspetto viscerale del lobo destro del fegato nei pressi del pancreas 22,36,37. Identificare il vaso linfatico come struttura traslucido giustapposto al segmento ventrale destro della vena porta 36,37.
- Separare il Vess linfaticaEL dalla fascia circostanti delicatamente prendere in giro via il tessuto attaccato con applicatori Q-Tip. Una volta che gli aspetti laterali del recipiente sono separati dal tessuto circostante, creare un'apertura "tunnel" sotto l'imbarcazione con fine smussato punta pinze.
- Passare tre 2-0 punti di sutura di seta sotto il vaso linfatico con una pinza sottile. Legare la sutura più caudale prima per occludere, dilatare e riempire il vaso di linfa. Volutamente lasciare le estremità di questa sutura relativamente lungo (4 cm) per fissare il catetere al vaso linfatico. Inserire altre due suture separate 1,0 cm l'una dall'altra e sono circa 1,0-1,5 cm cranici alla sutura caudale protetto. Lasciare questi due punti di sutura con un 'unica legame legatura sciolto' per consentire la più rapida messa in sicurezza del catetere nel vaso.
Nota: Il segmento del vaso linfatico situato tra la sutura legatura più caudale e suturare mezzo (dei due suture craniche) è il sito per cateterizzazione. Per quanto riguarda sumateriale tura, 2-0 Polyglactin sutura può sostituire 2-0 punti di sutura in seta, se necessario. - Tagliare un piccolo foro nel contenitore con forbici iris e dilatare il vaso con pinza sottile smussato. Inserire circa 1.0-1.5 cm di tubo del catetere specializzata (4.06 Diametro esterno (OD) X 2,31 millimetri ID) con una estremità smussata nel recipiente e legare le due suture craniche per fissare il catetere in posizione. Utilizzare i lati lunghi di sutura della sutura caudale per fissare il catetere alla nave.
- Lavare l'intestino esteriorizzato con abbondanti quantità di soluzione salina calda e delicatamente riportarlo alla cavità addominale assicurare il corretto posizionamento anatomica dell'intestino.
- Esteriorizzare il catetere a metà fianco sinistro (5-10 cm ventralmente dalla fossa paralombare). Effettuare una incisione cutanea con un bisturi e passare un trocar dalla cavità addominale per la superficie della pelle per creare un'apertura per l'esteriorizzazione del catetere. Utilizzare un grande pinza Kelly esteriorizzare il catetere dal cav addominaleIty attraverso l'apertura trequarti.
- Chiudere il peritoneo parietale con un semplice modello di sutura continua di 2-0 Polyglactin di sutura con un ago rotondo (conico). Chiudere gli strati muscolari addominali con un semplice modello di sutura interrotta con una sutura 2-0 Polyglactin su un ago rotondo.
- Chiudere la pelle in un modello sottocuticolare con 2-0 Polyglactin di sutura su un ago di taglio. Fissare il catetere esteriorizzato alla pelle con un modello di sutura a borsa di e una sutura 2-0 in nylon su un ago di taglio.
- Inserire un rivestimento speciale sul maiale pur anestetizzati per facilitare il suo posizionamento e ridurre lo stress del maiale durante il recupero.
Recupero 3. post-chirurgica e la linfa Collection
- Circa 10 minuti prima della sospensione del anestesia per inalazione, amministrare bupenorphine (0,1 mg / kg) per via intramuscolare di fornire immediata analgesia post-intervento chirurgico. Continuare bupenorphine (0,1 mg / kg) ogni 12 ore per 24-48 ore per mantenerepost-operatorio analgesia.
- Monitorare i maiali per complicazioni post-chirurgiche ogni 8-12 ore per un periodo di 7 giorni.
- Raccogliere la linfa in bottiglie da 500 ml di lavaggio in polipropilene, rivestito con etilendiammina tetraacetico (EDTA), e integrato con antibiotici; penicillina (6.000 UI), streptomicina (6 mg) e amfotericina B (3 mg) ogni 12 ore per un periodo di 7 giorni.
4. Quantificazione delle lipoproteine ApoB48, trigliceridi, colesterolo e proteine totali raccolti da Lymph
- Centrifugare il campione linfa a 1.800 xg per 5 minuti a 4 ° C. Raccogliere il surnatante e usarlo per la quantificazione dei trigliceridi, colesterolo e proteine totali.
- Dividere il surnatante in tre campioni: un campione non diluito, un 01:20 acqua distillata campione diluito e un campione finale diluito 1: 100 con acqua distillata.
- Utilizzare il surnatante non diluito per misurare i livelli di colesterolo, con un kit disponibile in commercio.
- Utilizzare il 01:20 e 01:100 campioni diluiti per misurare trigliceridi e livelli di proteine totali con un kit disponibile in commercio e il dosaggio della proteina acida totale bicinconinico rispettivamente.
5. Quantificazione delle lipoproteine ApoB48, Raccolti da Linfa 38
- Determinare la concentrazione di lipoproteina ApoB48 con un adeguato sistema immunitario metodo di Western Blotting 38. linfa totale separata con 3-8% Tris-acetate- sodio dodecil solfato gel di poliacrilammide (SDS-PAGE).
- Trasferire le proteine separate da una membrana di fluoruro di polivinile (0,45 micron) e incubare con un anticorpo policlonale di capra al ApoB (1: 4.000), poi si legano con un anticorpo secondario anti-capra.
- Quantificare la lipoproteina ApoB48 con chemiluminescenza utilizzando un confronto densitometrica lineare con roditore purificata standard di proteine ApoB48.
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Representative Results
cateterizzazione linfatico del tronco linfatico intestinale dei suini neonatale permette la raccolta di circa 1 L / 24 ore di linfa centrale nel corso di un periodo di 7 giorni. La linfa raccolte in questo esperimenti conteneva componenti del metabolismo lipidico, proteine cioè totale linfa, ApoB48 lipoproteine, trigliceridi, proteine totali e colesterolo. Tabella 1 evidenzia importi rappresentativi di tali componenti lipidici da campioni di linfa pool di tre maiali. In particolare, il flusso linfatico e costituenti lipidici sono in linea con i valori della linfa centrale riportati da altri ricercatori seguenti cateterizzazione dei vasi linfatici intestinali (flusso linfatico 570 ± 158-979 ± 284 ml / 24 ore 25, 360 ± 120 MLL / 24 ore per 1080 ± 720 ml / 24 ore 26; trigliceridi 687 ± 110 mg / dL 9; colesterolo 63,1 ± 5,6 mg / dL 9); indica il corretto posizionamento del catetere nel vaso linfatico.
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Figura 2. Un Liquid Chromatography (FPLC) profilo veloce Protein dimostrare la purezza della preparazione chylomicron in pig neonatale linfatico intestinale. Linfa raccolti da tre porcellini è una separazione tramite un protocollo di gradiente di densità ultracentrifugazione 1.006 g / ml. Il profilo mostra un unico picco per (A) colesterolo e (B) dei trigliceridi nel campione linfa. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 1. Un rappresentante analisi Western Blot dimostrando il contributo di ApoB48 e apoB100 lipoproteine nel maiale neonatale linfatico intestinale. Linfa raccolti da tresuini è separato tramite un protocollo gradiente di densità ultracentrifugazione 1.006 g / ml. La figura mostra una piccola quantità di contaminazione con circa il 15% di plasma derivato ApoB100. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
| linfonodi Caratteristiche | |
| ApoB48 (mg / ml) | 3022,4 ± 440,4 |
| Trigliceridi (mg / dL) | 607 ± 203,6 |
| Colesterolo (mg / dL) | 58.5 ± 9.6 |
| I risultati sono espressi come media ± deviazione standard (n = 3) | |
Tabella 1. I componenti della linfa intestinale raccolti da maiali neonati 7 giorni post-intervento chirurgico. I risultati sono ripetuti meaSures di linfa e espressi come media ± DS (n = 3)
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Discussion
Raccolta linfa intestinale è un ottimo metodo per studiare i meccanismi coinvolti nella lipidi 8-12 e 13-15 farmaco metabolismo, metastasi del cancro 16,17, il traffico delle cellule e la funzione immunitaria 18-26, in vari modelli sperimentali animali. Infatti, la capacità di raccogliere grandi quantità di ciascuna periferica (afferente) e centrale (efferente e grandi vasi tronco) linfa per un periodo prolungato è particolarmente importante per la comprensione dei cambiamenti temporali che si verificano in popolazioni cellulari seguenti sfide con agenti immunomodulatori 18-22 , 25,26. Allo stesso modo, la raccolta di linfa centrale è stata utile per delineare i processi coinvolti nel metabolismo delle lipoproteine 8-12. L'utilità di raccolta linfatica dipende dal successo della procedura di cateterizzazione e la pervietà del catetere nel vaso linfatico.
Cateterizzazione dei principali vasi linfatici coinvolti nelintestinale drenaggio linfatico in grandi animali in genere utilizza uno dei tre approcci chirurgici. La prima tecnica utilizza un approccio spalla cranica per entrare nel dotto toracico sovrastante la vena giugulare comune (mucca dotto toracico) 5. Il secondo utilizza un approccio fianco superiore sopra l'aspetto medio-laterale del rene destro 32,33. La terza tecnica, come descritto in questo video si avvale sia una linea mediana ventrale o paramediano 22,35 laparotomia per esporre il tronco linfatico intestinale vicino al pancreas e giustapposti l'aspetto ventrale destro della vena porta 22,36,37. Sebbene sia il fianco superiore e della linea mediana ventrale tecniche chirurgiche permettono cateterizzazione del tronco linfatico intestinale, riteniamo che l'approccio linea mediana ventrale consente una migliore esposizione della nave con uno spazio adeguato all'interno dell'addome superiore per gestire e manipolare il vaso.
È importante sottolineare che, come in qualsiasi intervento chirurgico sperimentale ci sono passi che sono partilare di fondamentale importanza per il buon esito della procedura sperimentale. Ci sono quattro aree chiave che richiedono una particolare attenzione utilizzando l'approccio linea mediana ventrale per accedere al vaso linfatico intestinale. In primo luogo, è necessario ottimo afflusso di sangue per l'intestino esteriorizzato, come prolungata circolazione compromessa per l'intestino induce ischemico necrosi della mucosa intestinale e il fallimento chirurgico. In questa procedura un 'asciugamano imbracatura' riduce la tensione sui vasi sanguigni mesenterici sostenendo il peso degli intestini assicurando eccellenti perfusione tissutale. In secondo luogo, attente manipolazioni del vaso compreso: il rilascio della nave dalla fascia circostante e tessuto adiposo, inserendo e saldamente fissare il catetere entro il recipiente per la raccolta della linfa lungo termine è fondamentale per cateterizzazione successo. Infatti, si suggerisce che l'integrità strutturale dei vasi nei suini neonatali non è robusto come negli animali maturi e come tale può facilmente strappare 39,40 41, è molto difficile rimuovere il coagulo dal catetere come il coagulo si sviluppa all'interno del catetere ed è profonda all'interno del vaso linfatico. Di conseguenza, questo ridurrà di molto (circa il 40%) il numero di animali cateterizzati con successo per la sperimentazione a lungo termine (dati non pubblicati). Pertanto, se il flusso linfatico è rallentato o è interrotto durante la procedura, il catetere linfatico deve essere reinserito cranialmente 0,5-1 cm dal sito di cateterizzazione iniziale.
Tutti i modelli utilizzati per indagare questioni scientifiche hanno limitazioni inherant e cateterizzazione del tronco linfatico intestinale non fa eccezione. Il limite più pronunciato per la procedura è l'incapacità di isolare efficacemente, cateterizzarla il vaso linfatico, e stabilizzare il catetere all'interno del vaso. Come tale, questa procedura richiede persone con eccellenti competenze tecniche chirurgicheS. Un altro limite significativo è che i tempi chirurgici prolungati durante chirurgia addominale aumenta il rischio e morbilità e mortalità post-chirurgica. In particolare, però, i suini in nostro esperimento recuperato in fretta da un intervento chirurgico e non ci sono state complicazioni come infezioni, ileo intestinale, lesioni dei tessuti eccessiva o inappetenza dopo la procedura. Certamente, sono stati osservati i maiali per essere brillante, reattivo, deambulazione e mangiare normalmente post-operatorio 24 ore e questo ha continuato durante il periodo di raccolta della linfa di 7 giorni. In particolare, anche se chimiche siero o emocromo completo, non sono state valutate in questi maiali seguito l'esperimento di 7 giorni, precedente lavoro di investigatori nella raccolta linfa a lungo termine in pecore 41 ha dimostrato che le pecore cateterizzati non sono mai stati leucopenici, linfocitopenico, ipoproteinemia con squilibri elettrolitici o clinicamente raffigurante cattive condizioni di salute (dati non pubblicati). Importante e, come detto sopra, questa osservazione correla catheterimaiali Zed anche la visualizzazione di caratteristiche cliniche di buona salute.
È interessante notare, gli investigatori hanno notato variazioni nel volume del flusso linfatico. Il flusso era maggiore durante il giorno quando i maiali sono stati alimentando e attivo con circa il 70% della linfa raccolta giornaliera verificano in questo momento. Il restante 30% del flusso della linfa avviene la sera durante il riposo e il sonno.
Ulteriore caratterizzazione dei campioni linfonodi sono forniti nelle figure 1, 2 e Tabella 1. La Figura 1 mostra una piccola quantità di contaminazione con circa il 15% di plasma derivato ApoB100. La presenza di lipoproteine plasma entro linfatico intestinale è una osservazione che si verifica spesso nei suini 42. In lattoni, la maggioranza della lipoproteina è prodotto dal fegato e rilasciato nel plasma. Dal plasma, ApoB100 probabile filtra nella raccolta lacteals 42 e poi attraverso la rete vascolare linfaticafognature nel tronco linfatico intestinale. Vari metodi di cromatografia sono utilizzati per valutare colesterolo, trigliceridi e fosfolipidi altri contenuti nei campioni raccolti linfatici 42-45. Il singolo picco nella figura 2 dimostra chiaramente il colesterolo e trigliceridi sono presenti nella frazione chilomicroni. Questo metodo è una tecnica semplice e preciso della profilatura lipoproteine linfa e deve essere considerato al momento di valutare la purezza dei campioni di chilomicroni da linfa intestinale 45. Infine, tabella 1 fornisce i componenti biochimici della linfa intestinale raccolti da suini neonatali 7 giorni post-operatorio.
In conclusione, cateterismo a lungo termine del tronco linfatico intestinale è successo giovani suini. Con questa tecnica, cateterizzazione linfatica può essere utilizzato per raccogliere e analizzare componenti del metabolismo lipidico. La purezza della linfa, quantità di linfa prodotta e le quantità di componenti del metabolismo lipidicosono simili ai valori presenti nel maiale linfa centrale in altri esperimenti 9,25,26,42. I risultati indicano che l'impiego di un approccio chirurgico linea mediana ventrale con un'attenta dissezione dei tessuti e dei vasi gestione cateterizzare il tronco linfatico intestinale nei giovani maiali è un ottimo metodo per raccogliere grandi quantità di linfa centrale.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Miller laryngoscope blade | Welch Allyn | 68044 | 182 mm length |
| Surgivet advisor: Vital signs monitor | Surgivet | V9203 | |
| Rectal temperature probe | Surgivet | V3417 | |
| Mono-polar electrosurgery generator | Valley Lab | ||
| Metzenbaum scissors | Fine Science | 14518-18 | |
| Tuffier retractor | Stevens | 162-11-676 | |
| Mosquito forceps | Stevens | 162-7-10 | |
| Kelly forceps-curved (14cm) | Stevens | 162-7-38 | |
| Allis tissue forceps | Stevens | 162-7-38 | |
| Forceps dressing-eye (10.2cm) | Stevens | 162-18-780 | |
| Forceps dressing-Adison (12.1cm) | Stevens | 162-17-2510 | |
| Needle Drivers | Stevens | 162-V98-42 | |
| Iris scissors | Fine science | 14058-11 | |
| Circulating water pump | Jorvet | J-783X | |
| Maxitherm-Vinyl blanket | Jorvet | J-784C | |
| Q tip applicators | Fisher Scientific | 22-037-960 | |
| Catheterization tubing (4.06 OD X 2.31 ID) | Braintree Scientific Inc. | MRE-160 | Micro-Renethane implantation tubing |
| 2-0 silk suture | Ethicon | LA556 | |
| 2-0 polyglactin suture | Ethicon | J443H | 2-0 vicryl |
| Large animal jacket | Lomir Biomedical Inc. | SSJ2YC | |
| Polypropylene wash bottles | Fisher Scientific | 03-409-22C | 500 ml |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma Aldrich | D4333 | |
| EDTA | Sigma Aldrich | 60-00-4 | |
| Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2411 | |
| Azaperone | Elanco Animal Health | Stresnil | |
| Dexmedetomidine hydrochloride | Zoetis | 6295 | Dexdomitor |
| Isoflurane | Abbott Animal Health | 05260-5 | IsoFlo |
| Ketamine hydrochloride | Zoetis | 2626 | Ketaset |
| Bupenorphine hydrochloride | Champion Alstoe Animal Health | DIN:02347510 | |
| 6 mm Endotracheal tube | Jorvet | J-165d | |
| 10% Lidocaine spray | AstraZeneca | DIN:02003767 | |
| 4 % Chlorhexidine surgical scrub | Partnar Animal Health | PCH-011 | Diluted: 2.0% solution |
| 3M Surgical steri- drape | 3M Health Care | 1040 | |
| SDS page gel | Invitrogen | EA0375BOX | 3-8 % tris acetate |
| Polyvinylidene fluoride membrane | Millipore | IPVH00010 | 0.45 μm pore size |
| ApoB antibody | EMD Millipore | AB742 | 1:4000 dilution |
| Donkey anti-goat IgG-HRP | Santa Cruz Biotechnology | Sc-2304 | |
| ECL Prime Western Blotting Reagent | GE Healthcare LifeSciences | RPN2232 | |
| Triglyceride Kit | Wako Pure Chemicals | 998-40391/994-40491 | |
| Total Cholesterol Kit | Wako Pure Chemicals | 439-17501 | |
| Total Protein | Pierce | 23225 | Bicinchoninic Acid Assay |
References
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