Summary
アガロースゲル遅延アッセイによるtRNA（UUU）の産生および酵素TcdAとの複合体におけるtRNA（UUU）の分析のためのプロトコールが提示される。
Abstract
本発明者らは、 大腸菌における tRNA（UUU）の発現および精製のための方法およびtRNA（U6U）脱水酵素であるTcdAへのtRNA（UUU）の結合のゲル遅延アッセイによる分析を実証し、トレオニルカルバモイルtRNAのアンチコドンステムループ（ASL）においてA37に結合した側鎖を環状t 6 A（ct 6 A）に変換する。 tRNA（UUU）をコードする合成遺伝子の転写は、1mMイソプロピルβ-D-1-チオガラクトピラノシド（IPTG）を用いて大腸菌で誘導され、tRNAを含む細胞は誘導24時間後に収穫される。 RNA画分は酸性フェノール抽出法を用いて精製する。純粋なtRNAは、小型のtRNA分子をより大きな無傷または断片化核酸から効率的に分離するゲル濾過クロマトグラフィーによって得られる。 tRNA（UUU）へのTcdA結合を分析するために、TcdAをtRNA（UUU）と混合し、4℃で天然アガロースゲル上で分離する。遊離tRNA（UUU）はより速く移動し、TcdA-tRNA（UUU）複合体はゲルの染色時に観察される移動性遅延を受ける。我々は、TcdAがtRNA（UUU）結合酵素であることを示す。このゲル遅延アッセイを用いて、TcdA突然変異体および添加剤および他のタンパク質が結合に及ぼす影響を研究することができる。
Introduction
ゲル遅延アッセイ1 （電気泳動移動度シフトアッセイ、EMSAとしても知られている）は、タンパク質 - 核酸相互作用を研究し特徴付けるために設計された電気泳動法である。これは、精製された成分またはタンパク質（ 例えば 、細胞溶解物）または核酸（ 例えば 、tRNA）の複雑な混合物のいずれかを用いて、タンパク質-DNAならびにタンパク質-RNA相互作用ならびに特にtRNAとtRNA結合タンパク質との相互作用の分析を可能にするプール）。本発明者らは、精製tRNA（UUU）とアンチコドンステムループ（ASL）においてA37に結合したトレオニルカルバモイル側鎖を環化するN 6 -トレノニルカルバモイルアデノシン（t 6 A）デヒドラターゼであるTcdAとの相互作用の研究にゲル遅延アッセイを適用した。 tRNAの環状t 6 （ct 6 A） 2への変換。 TcdAはCsdL 3としても知られており、tcdA / csdL遺伝子は、 csdAおよびcsdE遺伝子5を有するクラスターを形成し、システインスルフリナーゼ脱硫酵素（CSD）系のシステインデスルフラーゼおよび硫黄受容体をコードし、 インビボで TcdA機能を維持する必要がある3 。
ゲル遅延アッセイの背後にある論理的根拠は、遊離核酸分子は、その大きな負電荷のためにアクリルアミドまたはアガロースゲルの前面に迅速に移動するが、同じ核酸のタンパク質複合体の電気泳動移動度は劇的に減少するということである。移動度の減少は、核酸 - タンパク質複合体における「シフト」として視覚化され、これは別個のバンドとして解決する。正に帯電した、より大きな核酸 - タンパク質複合体は、ゲル上の移動度のより大きなシフトまたは減少を示す。
複合体の電荷中和は普遍的な現象であるためタンパク質 - 核酸複合体については、ゲル遅延アッセイを広範囲の複合体および核酸型に適用することができる。この方法は、単純で安価であり、最小限の設備で実験室で実施することができる。少量のタンパク質とtRNAしか必要としません。これは、通常はより多くの量の試料を消費する代替的な生物物理学的技術に対して利点である。
ゲル遅延アッセイは、転写因子の研究に広く使用されている。アッセイは、多くの異なるDNA配列の転写因子の結合動力学、強度および特異性を分析するために用いられてきた。この分野では、EMSAが最初に開発されたのは確か6,7であった 。 RNA 8,9,10,11およびtRNA分子を用いたゲル遅延アッセイもリボソーム研究に用いられている我々がここで行ったように、転写後にtRNAヌクレオシドを修飾する酵素を分析することである。
多くの異なるパラメーターが、温度、タンパク質およびtRNAサンプルの品質、および結合の強さなどのゲル遅延アッセイの結果に影響を及ぼす。実験の慎重な計画と実行は、遊離核酸とタンパク質結合種の結果の解釈にとって非常に重要です。ここでは、プロモーターがShine-Dalgarnoリボソーム結合部位を欠く発現ベクターにクローニングされたtRNA（UUU）をコードする合成遺伝子を使用し、大量のtRNA 2の合成を導く。この詳細なプロトコールは、一般的なミスを避けながらtRNAゲル遅延実験を行うための明確なガイドを提供することを意図している。
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Protocol
注意：使用前に関連するすべての物質安全データシート（MSDS）を参照してください。このプロトコルで使用される化学物質のいくつかは有毒で腐食性があります。ヒュームフードや個人用保護具（安全眼鏡、手袋、ラボコート、フルレングスのズボン、閉じたつま先の靴など ）の使用を含む、フェノールを使用してtRNAの抽出を行う場合は、適切なプラクティスを使用してください。このプロトコールは、毒性のない核酸染色を使用する。代替染色の使用は、毒性および/または発癌性（ 例えば 、エチジウムブロマイド）の場合には、染色剤の追加の予防措置および特殊処分を必要とすることがある。
1.アガロースゲルの調製
- 2gのアガロースを秤量し、ガラス瓶に加えて2％w / vアガロースゲルを調製する。
- 100mLの1×トリス - ホウ酸塩 - エチレンジアミン四酢酸（EDTA）（TBE）ランニングバッファーをアガロース含有ボトルに加える。電子レンジで加熱して溶かします。 30秒間隔で、内容物を旋回させて混合するアガロースが完全に溶解するまでこのステップを繰り返す。アガロース溶液を約50〜60℃に冷却します。
- 金型を作成するためにゲルトレーの開口部をテープで覆い、適切な櫛を配置してウェルを作り、溶融したアガロースをその中にキャストします。気泡の形成を避け、室温で凝固させる。
- 固化したら、ゲルトレーを電気泳動装置に入れ、ゲルが完全に覆われるまでTBEバッファーで満たします。
tRNAの調製
- 大腸菌におけるExpress tRNA（UUU）
- 午前中、発現ベクターpET23d-EcUUU 2 （ 大腸菌 tRNA（UUU）をコードする遺伝子を有する）で形質転換した凍結大腸菌 BL21（DE3）のバイアルを使用して、低塩Luriaブロス（LB）プレートに100μg/ mLのアンピシリンを補充した。コロニーが現れるまでプレートを逆さにして37℃のインキュベーターに入れてください（遅い午後oon）。
- よく増殖した単一コロニーを5 mL LB + 100μg/ mLアンピシリンに接種し、37℃で220 rpmで一晩増殖させます。
- 翌朝、細胞をペレット（4℃で10分間6,500 xg）し、培地を5 mLの新鮮なLB + 100μg/ mLのアンピシリンで置き換え、再懸濁する。この懸濁液を使用して、200 mL LBプラス100μg/ mLアンピシリンに接種します。 37℃、220rpmで5時間増殖させる。
- 590nm（OD 590 ）の培養物の光学密度が0.6〜0.8に達したら、tRNA（UUU）遺伝子の発現を誘発するために1mM IPTGを培養物に添加する。 37℃で3時間インキュベートする。
- 培養物を6,500 xgで10分間4℃で遠心分離して細胞を収穫する。
- 溶解および抽出
- 細胞ペレットを5mLの溶解緩衝液（0.3M酢酸ナトリウム、10mM EDTA）に再懸濁する。この時点以降、オートクレーブしたバッファーを使用し、4℃ですべてのtRNA含有サンプルを保持してtRNA分解。
- ヒュームフード内の再懸濁した細胞ペレットに1容量の酸性フェノール（pH 4.3）を加える。逆に1分間混合して細胞を溶解し、10,000×g（10分間、4℃）で遠心分離する。
- 有機（底）相を吸引しないように注意して、ピペットを用いて可溶性tRNA（UUU）（および他のtRNAプールのより小さい濃度）を含む上部の水相を集める。下層と、有機相と細胞破片からなるペレットを適切な容器に捨てる。
- 可溶性（水性）相を2.5体積％100％v / vエタノールと4℃で1時間徹底的に混合してtRNAを沈殿させます。混合物を15,000 xgで遠心分離する（30分、4℃）。
- 上清を注意深くデカントし、4mLゲル濾過バッファー（20mMリン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム、pH7.4,0.1mM EDTA）にtRNAに富むペレットを再懸濁する。再懸濁したtRNAプール5μLを2％w / vアガロースゲル上で実行する。
注意：良質のtRNAは、単一バンド（50〜100bpの間の分子サイズ）として現れる。
- tRNA（UUU）の精製
- 標準的なクロマトグラフィーの実践12に従って、予めゲルろ過緩衝液中で平衡化した高解像度分取ゲルろ過カラム（寸法：16×600mm、ベッド容量：120mL、解像度範囲：1,000〜70,000Da）に再懸濁したtRNA（UUU） （移動相）。サンプルを溶出するために流速を1 mL / minに設定します。
注：tRNA（UUU）ピークは約75.5 mLで溶出します。典型的には、培養物の0.5〜1.0mg / LのtRNAの収率が得られる。 - 2％w / vアガロースゲルで5〜10μLの各サンプルを電気泳動することにより、代表的な溶出量でサンプルを分析します。
- 標準的なクロマトグラフィーの実践12に従って、予めゲルろ過緩衝液中で平衡化した高解像度分取ゲルろ過カラム（寸法：16×600mm、ベッド容量：120mL、解像度範囲：1,000〜70,000Da）に再懸濁したtRNA（UUU） （移動相）。サンプルを溶出するために流速を1 mL / minに設定します。
試料調製
- ロペス - エステパ（ Lopez-Estepa） らによる TcdAの発現および精製。 2 。
注：250μMまでTcdAを研究に使用することができる。 - 表1の対応する量のTcdAを適切に標識された1.5mL遠心分離管にピペットで入れる。 1.6mMのトリス （2-カルボキシエチル）ホスフィン（TCEP）（最終濃度）を添加し、ピペットを用いて穏やかに混合する。蓋を閉め、混合物を室温で5分間インキュベートする。
- 10μMのアデノシン三リン酸（ATP）および50mM MgCl 2 （最終濃度）を加える。ピペットで混合し、混合物を室温で5分間インキュベートする。
- 表1に従って精製tRNA（UUU）（セクション2.3）を加え、ピペットで混合し、室温で5分間インキュベートする。
- リン酸緩衝食塩水（PBS）を最終容量100μLまで添加する。適切に混合し、10％v / vの最終濃度にグリセロールを加える。
- サンプルをボルテックスし、チューブの内容物を短時間スピンダウンします（10,000 xg、1分、4℃）。
4.ゲルローディングと電気泳動の開発
- 泳動中にチャンバーを4℃に維持するために砕氷で満たされたトレーに電気泳動ユニットを置く。
- 慎重に、5μLの各サンプルを対応するウェルにピペットで移す。適切なDNAサイズマーカーを加える。
- 電極を電源ユニットの対応するスロットに差し込みます。電源装置の電源を入れ、電圧を100Vに設定し、ゲルを90分間流します。
5. tRNA-タンパク質相互作用を観察するためのゲル染色
- 1mLの適切なDNA染色液と50mLのTBEを混合することによって染色溶液を調製する。汚染容器をアルミニウム箔で覆うことにより、汚染溶液を日光にさらさないようにしてください。
注：DNA染色は、通常10,000または20,000倍濃縮ストックとして保存されます。 - 電気泳動の90分後、慎重にトレーからゲルを取り出し、染色溶液を入れた容器に入れる。室温でロッキングスピードの速いロッカーに置きます30分間放置する。
- 染色容器からアガロースゲルを取り出し、余分な液体を取り除くためにセルロース組織または濾紙上に注意深く叩いて、トランスイルミネーターの上に直接置きます。 UV光を入れて、tRNAを含むバンドを可視化する。ゲルの写真を撮る。
- タンパク質染色（オプション）。
- 安全にDNA染色液を捨て、50mLのクーマシーブリリアントブルー（CBB）溶液で置換する。トレーを室温でロッカーに置き、一晩（> 12時間）染色する。 CBB染色溶液を捨て、余分な色素を除去するために50mL PBSで置換する。ロッカーで1時間デスティネーションしてください。
- 軽質トランスイルミネーターでタンパク質を含むtRNA複合体を視覚化し、ゲルの写真を撮ってtRNA UVゲル画像と比較します。
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Representative Results
大量のtRNA（UUU）は、強力な誘導性T7プロモーターの制御下で大腸菌でtRNA遺伝子を発現させることによって得ることができる。発現されたtRNA（UUU）は、細胞質に蓄積し、天然に豊富なtRNAのプールに富む。 EMSAグレードのtRNAを得るために、捕獲/抽出工程およびゲル濾過/研磨工程からなる2段階精製プロセスを利用した。捕獲/抽出工程は、タンパク質、細胞破片、DNA、およびtRNA（および他のRNA分子）の抽出の同時沈殿を達成するためにpH 4.3のフェノールを使用する。この段階で、全tRNAプールの量は、2％w / vアガロースゲル上での電気泳動によって評価することができる。第2のステップは、分子種に応じてRNA種を分離するゲルろ過クロマトグラフィーを組み込む。 254 nmでのUVトレースを使用して分離をモニターし、主要な溶出ピークを同定します（ 図1上）。ピーク画分の代表的なアリコートを分析のために2％w / vアガロースゲル上に流した（ 図1の 下 ）。大部分のtRNA分子は、クロマトグラフィー操作（ここでは、120mLのベッドサイズのカラムで75.5mL）の単一ピーク（中央）で共溶出する。単一の過剰発現種（tRNA（UUU）など）を含むプールを分離する場合、プール中のtRNA分子の90％以上がその特定のtRNAに属し、残りの分子は天然に豊富なtRNAに対応する。二次ピークは、tRNA含有中心ピークの前後に観察される。これまでのピークは、部分的に分解されたより大きなRNA分子（画分26および32; 図1の棒）および精製操作の終わりのピークは、非常に小さなRNAおよび混入物を含む（画分45および51; 図1のバー）。画分を中央ピークの下にプールした後（画分39〜43; UV分光法によって、および/または2％w / vアガロースゲル上での分子サイズ標準との比較によって、精製tRNAの量を定量することができる（ 図1の棒）。
TcdAおよびtRNA（UUU）サンプルは、半対数サンプリングスキーム（ 表1 ）を用いて1.0〜10.0の異なるモル比で混合し、2％w / vアガロースゲル（ 図2 ）で分離することができます。タンパク質-tRNA複合体の安定性および結合の化学量論に依存して、1つまたはいくつかのバンドをゲル上に可視化することができる。 TcdA-tRNA（UUU）では、タンパク質とtRNAの両方を含む単離されたバンドとして走る化学量論的複合体が形成される。典型的には、遊離tRNAはより速く移動し、ゲルの底で観察され得るが、より負に荷電しにくく、サイズがより大きいタンパク質-tRNA複合体はより遅く移行する傾向がある。 図2は、 TcdA-tRNA（UUU）複合体の2％w / vアガロースゲルを用いた。 図2では、TcdAのみおよびtRNAのみのバンドが陰性対照として機能する。 TcdA：tRNA（UUU）のモル比が増加するにつれて、遊離tRNAバンドを犠牲にして形成されたTcdA-tRNA（UUU）複合体の量が増加する。遊離tRNAの強度は、TcdAの量が増加するにつれて減少することに留意されたい。形成される第1の複合体は、TcdA二量体あたり1つのtRNA分子を含む2：1の化学量論的複合体である（10,20または30μMのTcdAを有するレーンで見ることができる）。 TcdA飽和度では、TcdAサブユニットの両方がそれぞれ1つのtRNA（UUU）分子に結合した2：2の化学量論的複合体を含む、より大きな分子量のTcdA-tRNA（UUU）複合体が発達する（30,50または75μM）。 TcdA（50または75μM）を有する最後の2つのレーンは、反応中のすべてのtRNAに結合し、遊離tRNAバンドを欠いている。
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図1：ゲルろ過によるtRNA（UUU）の精製。 254nmで記録した高分解能分取ゲル濾過カラムでのtRNA（UUU）のゲル濾過のクロマトグラム（上）。 tRNA（UUU）が豊富なtRNAプールを含む最高ピークは約75.5mLで溶出されます。種々のtRNA溶出画分のアリコートを用いて2％w / vアガロースゲル（底部）を流した。 M、分子サイズはしご。 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
図2：TcdAおよびtRNA（UUU）を用いたゲル遅延アッセイ。 EMSAは、TcdAへのtRNAの物理的結合の証拠を提供する。試料を2％w / vアガロースゲル上で4℃で90分間泳動させた。一定量のtRNA（UUU）、7.5μlMを可変量のTcdAと混合し（ 表1参照）、電気泳動の実行中にタンパク質-tRNA複合体を分離した。ゲルを染色し、UVトランスイルミネーターで視覚化した。各レーンは5μLのサンプルを含む。 M、分子サイズはしご。 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
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Discussion
本明細書に記載のタンパク質-tRNAアガロースゲル遅延アッセイは、多くの方法で変更することができる。第1に、ゲル中のアガロースの割合を減少させて、ここで分析したもの（120kDa）よりも有意に大きいタンパク質-tRNA複合体の分離および可視化を可能にすることができる。第2に、標的タンパク質が熱不安定性である場合、電気泳動装置を冷たい部屋に移動させるか、電気泳動室内の氷パックを使用して生成された熱をすぐに消散させることにより、温度が最大許容温度未満に保たれるように、実行中。他の緩衝液組成物（ 例えば 、0.5X TB、トリスホウ酸塩）およびランニングパラメータ（> 20V / cm）は、必要であればランタイムを短縮するように改変することができ、サンプル11に対して許容可能である。示唆されたMgCl 2濃度は、試料調製工程の間にRNA分解が観察される場合に減少され得る。なぜなら、2価のcati潜在的に核酸の切断を触媒することができる。
この技術の主な制限は、タンパク質-tsRNAのバンドが、アクリルアミドベースのゲル遅延法で見られるものよりもわずかに拡散していることであり、これはよりシャープで明瞭になる傾向がある。別の制限は、複数のサンプルの同時分析、および様々なサイズおよび電荷のタンパク質-tRNA複合体を分析する場合に、より幅広くより長いゲルが必要であることである。
既存の方法と比較して、タンパク質-tRNAアガロースゲル遅延アッセイは、試料調製から分析までの労力と時間を大幅に短縮する。アクリルアミドゲルは、有害な化学物質を含み、準備するのが面倒で、重合に長時間かかります。対照的に、アガロースゲルはシンプルで、流し込みが速く、毒性化学物質を含まない。実験は2時間で完了することができます。これには、ゲルをセットするための30分、サンプル調製のための15分（これはアガロースを冷却しながら行った）、電気泳動および可視化のために90分。
この方法の将来の応用は、このプロトコールで使用される検出方法を改良し、それをあまり豊富ではなく不安定なRNA種、またはごく少量でしか発現しないタンパク質複合体の検出に適用することができる。高感度フルオロフォアでRNAまたはタンパク質成分を標識することにより、より少量のタンパク質-RNA複合体の検出が可能になる。さらに、重複しない発光/励起ピークを有するフルオロフォアを使用することにより、異なるタンパク質および/またはRNA種が単一の実験で同時に視覚化され得る多重化実験が可能になり得る。
このプロトコルには3つの重要なステップがあります。最初で最も明らかな重要なステップは、tRNA（UUU）の発現および精製である。精製されたtRNA（UUU）の量が特定の最小検出限界（バンドあたり25〜200ngのtRNAの間）である場合）、または分解バンドがより低い分子サイズの汚染物質として明らかになる場合、tRNAは廃棄され、再精製されるべきである。 tRNA抽出中に酸性フェノール（pH4.3）を使用することは、RNAを可溶性に保ちながら選択的にDNAを沈殿させるため必須である。第2の重要なステップは、分析のためのタンパク質-tRNAサンプルの調製に関する。十分な量のタンパク質およびtRNAを使用して、形成されるすべての複合体の強固な検出を可能にしなければならない。タンパク質-tRNAのモル比は、平衡を複合体形成に向かわせるために調整しなければならない。第3の重要なステップは電気泳動である。 TBEバッファーは新鮮なもの（再使用されない）で使用する必要があります。プロテイン-tRNA複合体が安定し、変性しない温度（通常4〜10℃）でアガロースゲルを保つ必要があります。例えば、電気泳動チャンバーを氷で囲み、可能であれば、実験を実行することによって、電気泳動全体の間、アガロースゲルを冷たく保つように注意しなければならない4℃の冷たい部屋に放置する。
本発明者らは、TcdA-tRNA（UUU）をモデル系として使用し、アクリルアミド電気泳動の代わりにアガロースゲル電気泳動を使用してタンパク質tRNA複合体を分析し、直接的に分析する方法を実証した。後者は完了に時間がかかり、かなり面倒です。この方法を用いて、2％w / vアガロースゲル（8cmゲルフォーマット）での電気泳動分離を90分未満で達成することができる。これは、タンパク質-tRNA相互作用の解析に便利なツールであり、複数のサンプルを同時に分析することができます。 tRNAおよび/またはタンパク質突然変異体の変異体は、この方法を用いて結合および安定性についてスクリーニングすることができる。
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Disclosures
著者は何も開示することはない。
Acknowledgments
MCVはCIB教室プログラム「分子生物学（MACBET）」のメンバーです。これらの成果を導く研究は、スペイン競争力のある経済大臣賞（CTQ2015-66206-C2-2-RおよびSAF2015-72961-MCVへのEXP）であるSalut Carlos IIIスペイン研究所（PI12 / 01667からMCV） ）、マドリード地方政府（S2010 / BD-2316〜MCV）、欧州委員会（フレームワークプログラム7（FP7））プロジェクトComplexINC（MCVへの契約番号279039）資金提供者は、研究デザイン、データの収集と分析、出版の決定、または原稿の作成に何の役割も持たなかった。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| E. coli BL21(DE3) | Novagen | 70235 | DE3 lysogen contains T7 polymerase upon IPTG induction. |
| pET23d | Novagen | 69748-3 | pET23d confers resistance to ampicillin; T7 promoter. |
| LB Broth, Low Salt (Lennox L Broth), Granulated | Melford | GL1703 | Conventional LB Broth, High Salt, can also be used. |
| Ampicillin | Sigma-Aldrich | 10419313 | |
| Incubator Shaker (Thermostated) | NBS | Excella E24 | Any shaker incubator with temperature control can be used. |
| Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG), >=99% | Acros Organics | BP1755 | |
| Sodium acetate, anhydrous, >99% | Melford | B4017 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), Disodium salt, >99% | Acros Organics | AC327205000 | Harmful if inhaled. |
| Centrifuge (refrigerated) | Eppendorf | 5430 | |
| Centrifuge (refrigerated) rotor | Eppendorf | 5430/5430P | |
| Centrifuge | Sorvall | RC5C | |
| Centrifuge rotor | Sorvall | SLA-3000 | |
| Phenol solution, Saturated with 0.1 M citrate buffer, pH 4.3 ± 0.2 | Sigma-Aldrich | P4682 | Acute toxicity (oral, dermal, inhalation), corrosive |
| Ethanol absolute for analysis, 100% v/v | Merck Millipore | 100983 | |
| Sodium phosphate dibasic dihydrate, Na2HPO4, >=99% | Sigma-Aldrich | 71643 | |
| Potassium dihydrogen phosphate, KH2PO4 | Merck | 48,730,250 | |
| HiLoad 16/60 Superdex 75 | GE Healthcare | 28989333 | |
| Agarose | Melford | MB1200 | |
| Tris [Tris(hydroxymethyl) aminomethane HCl] | Melford | T1513 | |
| Boric Acid | Melford | B0503 | |
| Microwave | Haier | HDA-2070M | |
| TCEP [Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride] | Sigma-Aldrich | C4706 | Corrosive to metals and skin. |
| ATP [Adenosine 5′-triphosphate disodium salt hydrate], Grade I, >=99% | Sigma-Aldrich | A2383 | |
| Magnesium chloride (MgCl2), anhydrous, >=98% | Sigma-Aldrich | M8266 | |
| Sodium chloride (NaCl), >99% | Fisher Bioreagents | BP358 | |
| Potassium chloride (KCl), >99% | Melford | P0515 | |
| NZYDNA Ladder VI | NZYtech | MB8901 | |
| Power supply | Consort | EV261 | |
| Electrophoresis unit | Real Laboratory | RELSMINI10 | |
| Real Safe nucleic acid staining | Real Laboratory | RBMSAFE | 20,000X stock |
| UV Transilluminator (G:Box/EF) | Syngene | 2216498 | |
| Coomassie Brilliant Blue G | Sigma-Aldrich | B0770 | |
| Rocker (Gyro-Rocker) | Stuart | SSL3 | |
| Mixer Vortex | Fisher brand | 13214789 |
References
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