Summary
Этот протокол описывает методы для записи слуховой мозга ответ от послеродового крыса щенков. Для изучения функционального развития внешних волосковых клеток, экспериментальная процедура поклеточного фиксации записи в изолированные внешние клетки волос описан шаг за шагом.
Abstract
Внешние клетки волос является одним из двух типов Сензорные клетки волос в млекопитающих улитки. Они изменяют их длина ячейки с рецепторами потенциал, чтобы усилить слабые вибрации низкого уровня звукового сигнала. Морфология и электрофизиологические свойства внешних волосковых клеток (OHCs) развиваться в начале послеродового возраста. Созревание внешние клетки волос может способствовать развитию слуховой системы. Однако процесс развития OHCs не хорошо изучены. Это отчасти трудно измерить их функции электрофизиологических подход. С целью разработки простой способ решить эту проблему, здесь мы опишем пошаговое протокол для изучения функции OHCs в остро диссоциированных улитки от послеродового крыс. С помощью этого метода мы можем оценить улитковый ответ на стимулы чистый тон и изучить уровень выражения и функции Престин мотор белка в OHCs. Этот метод может также использоваться для изучения внутренние волосковые клетки (дивидедов).
Introduction
Две различные функции улитковый Сензорные клетки волос крайне важны для млекопитающих слуха: mechanoelectric трансдукции (мет) и electromotility1,2. По каналам MET расположен в пучок волосы, дивидедов (дивидедов) и OHCs конвертировать звуковые вибрации мембраны потенциальных изменений, а также электрические сигналы нейронов ганглия иннервируемые спираль. OHCs изменить длину их клетки с мембранного потенциала и усилить вибрации низкого уровня звука. Это действие называется electromotility является производным от Престин двигательные белки, расположенные в боковой стенке OHCs3.
У многих видов, включая грызунов функция слуха незрелых в раннем постнатальном эпохи4,5. Не потенциал действия в ответ на звуковые сигналы могут быть обнаружены в аудиальном кортексе до6,начала слушания7. Разработка морфологии и функция улитки широко изучена в мышь и песчанки, крыса4,5,8. Mechanotransduction и electromotility клетки волос также разработал в начале жизни эпохи5.
Для того чтобы оценить чувствительность слуха крыс на послеродовой разных возрастов, мы разработали метод для слухового мозга ответ (ABR) запись в крыса щенков. Поклеточного фиксации это идеальная технология для расследования OHCs electrophysiologically. Однако по сравнению с фиксации в нейроны и другие клетки эпителия, низкий уровень уплотнения поклеточного ограниченное расследование electromotility изолированных OHCs.
Здесь мы описываем процедуры для расследования OHCs морфологически и electrophysiologically в остро диссоциированных улитки от послеродового крыс. Этот метод может быть изменен для изучения молекулярных механизмов, которые регулируют развитие внутренней волосы клеток и функции.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все экспериментальные протоколы с участием животных темы были утверждены Комитетом Этика животных Южной медицинского университета.
1. подготовить решения для экспериментов
- Подготовьте анестетиков (см. Таблицу материалы): 1.5% Пентобарбитал натрия растворяют в ddH2O.
- Приготовляют раствор диссекции (см. Таблицу материалы): Растворите одну сумку Leiboviz в L-15 порошка в 1 Л с 1 M NaOH ddH2O. Adjust pH 7,3. Отрегулируйте осмолярности до 300-330 мОсм, используя осмометре и 10 мм HEPES перед использованием.
- Растворите 2 мг/мл коллагеназы IV (см. Таблицу материалы) в рассечение раствор, приготовленный на шаге 1.2.
- Подготовка иммуноокрашивания решения (см. Таблицу материалы): распустить параформальдегида 4% в-фосфатный буфер (PBS).
Предупреждение: Параформальдегида токсичен; надевайте соответствующую защиту. - Разбавьте агент проницаемость 0,3% в PBS. Развести 10% нормальной козьего сыворотки в PBS в блокирующем буфере. Разбавьте антитела Престин 1: 200, в блокирующем буфере. Разбавьте 1: 600 Alexa488-конъюгированных антител в блокирующем буфере. Разбавьте 1: 200 Изотиоцианаты B Фаллоидин-тетраметилродамина в PBS.
- Подготовить внеклеточного решение (см. Таблицу материалы): подготовка среднего L-15 Leiboviz, как описано выше (шаг 1.2).
- Подготовить внутриклеточных решение (см. Таблицу материалы).
2. ABR запись
Примечание: ABR записи ранее описаны подробно в наших предыдущих исследований9.
- Анестезировать крысах Sprague-Dawley (SD) (1-14 день старого детенышей и 2 - месячного взрослых, обоих полов) с одной инъекции Пентобарбитал натрия 1,5% (22 мг/кг для щенков и 30 мг/кг для взрослых, внутрибрюшинного (и.п.)).
- Место наркотизированных животного в Полиэтилен вспененный плесень обездвижить животное тело. Поместите животное на столе в комнате кулисный звук вибрации. Держите температуру тела животного на 37,5 ° C с грелку.
- Протрите области головы с 70% (vol/vol) этанола. С помощью тонкой ножницы, сделать 1-2 мм разрез вентролатеральные внешних Пинна поместить электрод сравнения или землю. Подкожные иглы электрода (запись электрода) находится над черепа вершин (рис. 1A).
- С помощью функции генератора, генерировать калиброванные тон очередей (1 ms падение/подъем, плато 3 мс) различных частот (2, 4, 8, 16, 24 и 32 кГц) и интенсивности (снизилась с 85 до 10 дБ SPL с шагом 5 дБ). Изменять частоту и амплитуду вручную или с помощью компьютера. Предоставлять звуковые раздражители через электростатический громкоговоритель, расположенный 10 см от сторону головы животного.
- Фильтр (100-1000 Гц), усиливают и средний (256 раз) звук вызвал потенциал с помощью многофункциональных процессора получить abr. Следы ABR контролируется онлайн и хранятся для анализа в автономном режиме. Чтобы завершить запись с одного животного ABR около 40 минут.
Примечание: Как правило, три-семь пиков (волны я волна VII) с задержкой менее 15 мс может быть определены (рис. 1B). ABR порог определяется как минимальный уровень звука в которой волна I и II могут быть обнаружены. - Усыпить перед животные просыпаются от анестезии (с внутрибрюшинной инъекции Пентобарбитал натрия 0,3 мл 1,5%).
3 рассечение орган из Корти (OC)
- Анестезировать крыса щенков. Для крыс менее 6 дней (< P6), держать животное в 100 мм культуры блюдо и обложка блюдо со льдом на 10 мин. Для крыс > P6, анестезировать животное с одной инъекции Пентобарбитал натрия 1,5% (22 мг/кг, и.п.). Обезглавить потомства крыс после анестезии.
- Стерилизуйте голову путем распыления с 70% этанола (vol/vol).
- Откройте череп вдоль сагиттальной срединной линии с ножницами; Удаление мозга подвергать внутреннего уха.
- Перенесите внутреннего уха в 35-мм Петри, заполнены с 3 мл ледяной L-15 (рис. 2A).
- Под микроскопом рассечение использование тонкой щипцы для удаления костлявые капсула улитки (рис. 2B).
- Берем OC и связанных с ними каннелюры vascularis (SV) от modiolus.
- Путем проведения базальная часть SV пинцетом, отдельных OC от SV полностью путем раскрутки медленно от основания к вершине (рис. 2 c).
- Равномерно вырежьте OC на три части с помощью тонкой ножницы (Рисунок 2D).
4. иммунофлюоресценции пятнать
- С помощью кончика пипетки 200 мкл, передача сегментов OC (шаг 3,8) на стекло слайд и исправить с 100 мкл параформальдегида 4% для по крайней мере 4 ч при 4 ° C.
Предупреждение: Параформальдегида токсичен; надевайте соответствующую защиту. - Вымойте ткань смещая параформальдегида с 100 мкл свежих PBS. Вымойте ткань три раза за 10 мин.
- Инкубируйте ткани с 0,3% проницаемость агентом в PBS на 30 минут при комнатной температуре.
- Отказаться от проницаемости агента в PBS и стирать ткани три раза с PBS.
- Блок с 10% нормальной козьего сыворотки в PBS на 1 ч при комнатной температуре.
- Проинкубируйте с анти Престин C-конечная антитела (1: 200) в блокировании решение для 2 ч при комнатной температуре или при температуре 4 ° C на ночь.
- Вымойте три раза с PBS на 5 мин.
- Проинкубируйте с Alexa488-конъюгированных вторичные антитела (1: 600) в блокирующие решение за 1 час при комнатной температуре в темноте.
- Вымойте три раза с PBS для 5 мин в темноте.
- Проинкубируйте втечение 10 мин при комнатной температуре в темноте с родамин Фаллоидин (1: 200).
- Вымойте три раза с PBS для 5 мин в темноте.
- Крепление на стекло слайд с монтажа средних (содержащие DAPI). Изображение с помощью конфокальной микроскопии с помощью 405 нм, 488 нм и 594 нм лазеры. Установить мощность лазера на 0,1-0,5 МВт и сканирования скорость на 0,5 кадр/сек.
5. фиксации записи изолированных OHCs
- Использовать съемник пипетки и микро кузнец сделать патч пипетки с наконечник диаметром 2-3 мкм. обратно заполните пипетки с внутриклеточной решения. Как правило первоначальное сопротивление патч пипеткой был 2,5-3,5 MΩ в раствор для ванн.
- С помощью кончика пипетки 200 мкл, передача кусок OC (от шага 3.8) в 35 мм Петри. Дайджест ткани с 100 мкл ферментативного пищеварения среды (коллагеназа IV, смотрите Таблицу материалы) за 5 мин при комнатной температуре.
- Сместить среднего ферментативного пищеварения с 100 мкл L-15. Вырежьте ткань на мелкие кусочки с помощью микро скальпель изолировать волосковых клеток.
- После нежной закупорить, передачи клетки в камеру домашнее небольшие пластиковые (диаметр ~ 1,5 см) заполнены раствором фермента бесплатная баня (~ 1,5 мл, смотрите Таблицу материалы).
- Разместите камеру на сцене инвертированным микроскопом. Найти здоровый появляются одиночные OHCs.
- Загрузите патч пипетку в главный этап 700B усилителя. Переместите пипетку патч тщательно, микроманипулятор и расположите его вокруг нижней части внешнего клетки волос (рис. 3A).
- Зажим поклеточного патч OHC запечатывая боковой стенки клетки тела. Применить легкие всасывания до тех пор, пока разрыв мембраны клетки. Установите потенциальных холдинга на -70 mV. Клетки с доступа к сопротивлению, составлял от 10 до 17 MΩ и мембраны варьировались от 100 до 500 MΩ и считается успешным поклеточного конфигурации.
- С помощью компьютерного управления, применяются гиперполяризирующий и расшатывания напряжения (длительность 250 мс и начиная от −140 до + 94 МВ в 13 MV) ячейку, чтобы выявить поклеточного течений.
- Усиливают поклеточного течений, фильтр (угловой частоты 5 кГц) по 700B усилитель. Преобразуйте данные по 1440A конвертер и хранилище для анализа в автономном режиме.
- Измерьте емкость мембраны OHCs протоколу две синусоиды напряжения стимул контролируется программное обеспечение зажим патч. Установите диапазон напряжения стимулировать от -140 до 110 МВ. Храните данные для анализа в автономном режиме.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ABR можно собрать из наркотизированных крыс щенков старше послеродовой день 7 (P7) с использованием очередей чистый тон (Рисунок 1A). Как показано на рисунке 1B, ABR сигналов, полученных от крыс щенков, показали только три или четыре различных волн с небольшой амплитудой. Обычно до семь пиков наблюдались в ABR сигналов взрослых животных (рис. 1B).
Для следующих иммуноокрашивания и электрофизиологические измерения крыса внутреннего уха был свеже расчлененный от височной кости. Мы показываем последовательных шагов рассечение тканей изолировать OC от SV и modiolus (рисунок 2A–2 C). OC было разрезать на три части равномерно с микро ножницы (Рисунок 2D). Чтобы показать словотолкование клетки волос, сегменты окрашивали Фаллоидин, Престин антитела и DAPI (Рисунок 2E). Пучки волос (в красном) указывают на апикальной поверхности клетки волос, тогда как клетки тело OHCs был отмечен Престин (в зеленом). Ядро было названо по DAPI (в синем), расположенная в регионе нижней дивидедов и OHCs. Как показано на рисунке 2E, не Престин был обнаружен в OHCs улитки в P5. Престин был впервые отмечен на P7 в OHCs, расположенный в базальной улитки.
После нежной пищеварение OHCs были изолированы от OC (рис. 3A). Целом клеточной мембраной записи были выполнены из OHCs, остро изолированы от крыс улитки. Репрезентативного примера поклеточного тока записан с изолированной P9 OHC в ответ мембранного потенциала изменилось от −140 до 107 МВ показано на рисунке 3B. Обратите внимание на регионе N-форма кривой-V, указывающих на наличие KCa текущий уникальный ответ OHCs. Движимый напряжение мембраны, внутриклеточных Cl– в сочетании с Престин, появляясь как нелинейная мембраны емкость (НЛК) изменения под режим зажим поклеточного патч. Типичный NLC зрелой OHC характеризуется колоколообразной зависимость мембранного потенциала. НКТ могут быть установлены с функцией Больцмана двух государств и может отражать electromotility функции OHCs. Функцию Больцмана для емкости установки описывается как:
Уравнения и параметры были описаны в наш предыдущий документ9. Два представителя NLCs показаны на рисунке 3 c.
Рисунок 1. Слуховой мозга ответ запись. (A) электрода записи был вставлен в волосистой части головы между двумя ушами. Справочник по городу и электроды были помещены под левой и правой Пинна, соответственно. Открытое поле спикер был помещен 10 см от кончика носа крысы. (B) два представителя ABR волновые формы в ответ на 16 кГц, 80 дБ SPL тон очередей. Верхняя трассировки записанных из P8 щенка. Дно трассировки записанных из взрослых крыс. Цифры указывают на различные вершины кривых. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2. Рассечение Корти орган о. (A) внутреннего уха расчлененный от щенка крыса P9. Улитки и вестибулярные региона отображаются. (B) структура улитки была разоблачена после удаления костные стенки. (C) орган Корти (OC) и каннелюры vascularis (SV) были изолированы от modiolus. (D) орган из Корти было нарезать ровно три. Масштаб баров в A-D представляют 1000 мкм. (E) конфокальный изображения показывают волосковых клеток, расположенных в различных сегментах (базальную, среднего и апикальных) вдоль улитки. Родамин Фаллоидин (красный) представляет собой пучки волос, расположенный на апикальной поверхности клетки волос. DAPI (синий) представляет ядер, расположенный в середине нижней части клетки волос. Престин (помечена зеленым цветом) только была выражена на боковой стенке наружной волосковых клеток. Только зеленый канал показано для среднего и базальной сегментов на P7, чтобы проиллюстрировать выражение Престин в OHCs. Представляет линейку 20 мкм. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3. Патч поклеточного зажим запись изолированные внешние волосковых клеток. (A) изолированные внешние волосы ячейка была запечатана в целом ячейка режиме. Линейки шкалы представляет 10 мкм. (B) A представитель I-V кривой Записанная из P9 внешние клетки волос. (C) нелинейных мембраны емкость (НЛК) получены из двух внешних волосковых клеток в разных возрастов. Емкость напряжения ответы (кружков) были установлены в функцию Больцмана (показано как толстые линии). НКТ были нормализованы в соответствующий линейной емкости (Clin). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В крыс моложе 11 день без потенциал действия в ответ на звуковой стимуляции можно наблюдать в аудиальном кортексе6,7. Таким образом послеродовой день 11 описывается как «слуха onset»10. Развитие слуха функции до начала слушания не было хорошо изучены пока. Используя аналогичный метод для взрослых ABR записи, мы демонстрируем, что abr может вызвали на чистый тон взрыв из крыса щенков моложе P11 (рис. 1). Однако ABR сигналов, полученных от крыс щенков показали некоторые различные функции, от тех взрослых животных. Амплитуды с относительно высокими порогами малы АРП ответы. Этот результат означает, что развивающихся слуховая система имеет низкую чувствительность к звуковых сигналов. В ABR сигналов, записанные с крыса щенков было отмечено существенное различие. Обычно до семь пиков наблюдались у взрослых ABR сигналов9. Эти пики с различными задержки генерируются различные мозга ядер вдоль слуховые пути11. Наши результаты показывают, что только волны IV были обнаруживаемыми в ABR из крыса щенков (Рисунок 1B). I и II представляют ответы от улитки и слухового нерва11волны. Таким образом результаты показывают, что выше уровня слуховых ядер не ответить на акустических стимулов во время разработки. Эти данные позволяют предположить что улитки достижения функциональной зрелости раньше, чем Центральная слуховой системы. Метод, который мы описываем здесь имеет важное значение для изучения молекулярных механизмов, которые регулируют функции развития и волосы клеток улитки.
Высокое качество вскрытия OC имеет решающее значение для дальнейших экспериментов, включая иммуноокрашивания, западной blotting и электрофизиологические измерения. Эти эксперименты были проведены с использованием взрослых крыс SD и крыса щенков от 1 до 14 дней старых. Крыса щенков идеально подходит для тонкой рассечение как улитковый кости мягкие и могут быть легко удалены пинцет без повреждения OC. Для взрослых крыс особая осторожность требуется избежать сверлении OC при удалении жесткий костные капсулу. С помощью тонкой щипцы, OC и связанные SV можно снять из modiolus. Раздельный OC и SV имеют различные текстуры (рис. 2 c). Для потомства крыс OC можно разрезать на три сегмента, с длиной 800-1200 мкм. Пожалуйста, обратите внимание, что все действия должны выполняться в ледяной L-15 как можно быстрее, чтобы свести к минимуму деградации и ухудшению тканей.
Изолированные сегменты OC являются хорошей подготовки к иммуноокрашивания, западной blotting и РНК анализа. Здесь мы покажем морфология Сензорные клетки волос в OC, иммуноокрашивания. OHCs имеют пучки волос на апикальной поверхности, тогда как ядро имеет их расположен basally12. Престин двигательные белки выражается на боковых мембраны OHCs. Конфокальный визуализации данных указал, что Престин впервые была выражена в P6-P7 и показал дальнейшее увеличение на следующей неделе (Рисунок 2E). В дальнейших экспериментов Западный blotting и q-PCR были выполнены для количественного определения уровня изменения Престин наблюдаемое выражение во время разработки (данные не показаны). Потому что клетки волос являются меньшинством в OC, 6-10 cochleae рекомендуются в одном эксперименте для достижения надежной сигналов.
Для записи патч зажим OHCs отделить OHCs была выполнена мягкая ферментативного пищеварения. Волосковые клетки являются хрупкими, и в этот шаг требуется особая осторожность. Для передачи ткани и разделенных ячеек, используйте наконечник пипетки 200 мкл. Изолированного сегмента OC был передан капля раствора коллагеназы (~ 100 мкл) в чашку Петри для около 5 мин при комнатной температуре. Избегайте длительного пищеварение раз, которые могут повредить клеточную мембрану OHCs. Под микроскопом здоровые смотря OHCs были отобраны для записи зажим патч. Клетки, усадка, отеки, появились признаки каких-либо повреждений, или транслокации ядра были исключены из следующий эксперимент. Здоровые, появляются одиночные OHCs и дивидедов легко определить по их морфологические различия. OHCs Показать цилиндрическую форму и больше диаметру оси, тогда как дивидедов колбу образный с жесткой шеи12. Поклеточного фиксации в OHCs является довольно трудно, от тех в нейроны и другие эпителиальных клеток. Для успешной настройки поклеточного пипеткой патч был обычно расположен вблизи ядра, вдали от верхней боковой мембраны, содержащие высокую плотность Престин частиц (рис. 3A). После того, как был разрыв мембраны, две синусоиды напряжения стимул протокол был применен к ячейке с целью получения мембраны емкость OHCs. В той же технике с использованием напряжения шаги, возможна вызывают поклеточного ток.
Этот метод является хорошим инструментом для изучения electromotility функции OHCs в vitro9,13. Этот метод может также использоваться для изучения функции ионных каналов, а также фармакологические свойства рецепторов в OHCs и дивидедов14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана грантов из 973 программы (2014CB943002) и Национальный фонд Китая естественных наук (11534013, 31500841).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthetic | |||
| Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | 1.5% in water |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissection solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| Collagenase IV | Sigma | C5138 | 2 mg/mL in L-15 |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Immunostaining solutions | |||
| PBS | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | PH 7.3 |
| Paraformaldehyde | Sigma | 158127 | 4% in PBS |
| Triton X-100 | Amresco | ZS-0694 | 0.3% in PBS |
| Normal goat serum | Thermo Fisher Scientific | 10000C | 10% in PBS |
| prestin antibody | Santa Cruz | SC-22694 | dil 1:200 |
| Alexa Fluor 488-conjugated antibody | Thermo Fisher Scientific | A-11055 | dil 1:600 |
| Phalloidin-Tetramethylrhodamine B isothiocyanate | Sigma | P1951 | dil 1:200 |
| DAPI | Solarbio | C0060 | dil 1:20 |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Extracellular solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Intracellular solution | |||
| CsCl | Sigma | 7647-17-8 | 140 mM |
| MgCl2 | Sigma | 7791-18-6 | 2 mM |
| EGTA | Sigma | 67-42-5 | 10 mM |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Osmometer | Gonotec | OSMOMAT 3000 basic | |
| Forcep | WPI | 14095 | Tweezers dumont |
| Micropipette puller | Sutter Instrument | MODLE-P97 | |
| Micro Forge | Narishigen | MF-830 | |
| Mini Operating System | Sutter Instrument | MP-285 | |
| MultiClamp | Axon | 700B | |
| Low-Noise Data Acquisition System | Axon | 1440A | |
| ES1 speaker | Tucker-Davis Technologies | ||
| TDT system 3 | Tucker-Davis Technologies | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Software | |||
| SigGenRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| BioSigRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| jClamp | Scientific Solutions | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal | |||
| SD rat | Experimental Animal Center of Southern Medical University |
References
- He, D. Z., Zheng, J., Kalinec, F., Sacchi Kakehata, S. S. antos-, J, Tuning in to the amazing outer hair cell: membrane wizardry with a twist and shout. J Membr Biol. 209, 119-134 (2006).
- Dallos, P. Cochlear amplification, outer hair cells and prestin. Curr Opin Neurobiol. 18, 370-376 (2008).
- Zheng, J., et al. Prestin is the motor protein of cochlear outer hair cells. Nature. 405, 149-155 (2000).
- Abe, T., et al. Developmental expression of the outer hair cell motor prestin in the mouse. J Membr Biol. 215, 49-56 (2007).
- Waguespack, J., Salles, F. T., Kachar, B., Ricci, A. J. Stepwise morphological and functional maturation of mechanotransduction in rat outer hair cells. J Neurosci. 27, 13890-13902 (2007).
- Zhang, L. I., Bao, S., Merzenich, M. M. Persistent and specific influences of early acoustic environments on primary auditory cortex. Nat Neurosci. 4, 1123 (2001).
- De, V. -S. E., Chang, E. F., Bao, S., Merzenich, M. M. Critical period window for spectral tuning defined in the primary auditory cortex (A1) in the rat. J Neurosci. 27, 180-189 (2007).
- He, D. Z., Evans, B. N., Dallos, P. First appearance and development of electromotility in neonatal gerbil outer hair cells. Hearing Res. 78, 77-90 (1994).
- Hang, J., et al. Synchronized Progression of Prestin Expression and Auditory Brainstem Response during Postnatal Development in Rats. Neural Plast. , 4545826 (2016).
- Ehret, G. Development of absolute auditory thresholds in the house mouse (Mus musculus). J Am Audiol Soc. 1, 179-184 (1976).
- Møller, A. R. Hearing:anatomy, physiology, and disorders of the auditory system. , Academic Press. Dallas. (2006).
- He, D. Z., Zheng, J., Edge, R., Dallos, P. Isolation of cochlear inner hair cells. Hearing Res. 145, 156-160 (2000).
- Tang, J., Pecka, J. L., Tan, X., Beisel, K. W., He, D. Z. Z. Engineered Pendrin Protein, an Anion Transporter and Molecular Motor. J Biological Chem. 286, 31014-31021 (2011).
- Fu, M., et al. The Effects of Urethane on Rat Outer Hair Cells. Neural Plast. 2016, 1-11 (2016).
