Summary
Denne protokollen beskriver metoder for å registrere auditiv hjernestammen svaret fra postnatal rotte unger. For å undersøke funksjonelle utviklingen av ytre hårcellene, er eksperimentelle prosedyren for hele celle oppdateringen klemme i isolert ytre hårcellene beskrevet trinn for trinn.
Abstract
Ytre hår cellen er en av de to typene sensoriske hårcellene i sneglehuset pattedyr. De endre sin celle lengde med reseptoren potensial til å forsterke den svake vibrasjonen av lavnivå lydsignalet. Morfologi og elektrofysiologiske eiendom ytre hårcellene (OHCs) utvikle i tidlige postnatal tider. Modningen av ytre hår cellen kan bidra til utviklingen av hørselen. Men er prosessen med OHCs utvikling ikke godt studert. Dette er delvis på grunn av vanskeligheter for å måle deres funksjon av elektrofysiologiske tilnærming. Å utvikle en enkel metode for problemet over, beskriver her vi en trinnvis protokoll for å studere funksjonen i OHCs i akutt dissosiert sneglehuset fra postnatal rotter. Med denne metoden kan vi evaluere cochlea responsen på ren tone stimuli og undersøke uttrykk nivå og funksjon av motoren proteiner prestin i OHCs. Denne metoden kan også brukes til å undersøke indre hårcellene (IHCs).
Introduction
To forskjellige funksjoner av cochlea sensoriske hårcellene er avgjørende for pattedyr høring: mechanoelectric signaltransduksjon (MET) og electromotility1,2. MET kanaler i håret bunt, IHCs (IHCs) og OHCs konvertere lyd vibrasjoner på membran mulige endringer, samt de elektriske signalene innervated spiral ganglion neurons. OHCs endre cellen lengden med membran potensial og forsterke vibrasjoner i lavnivå lyd. Denne aktiviteten kalt electromotility er avledet av motor protein prestin ligger i den laterale veggen OHCs3.
I mange arter inkludert gnagere er høring funksjonen umodne i tidlig postnatal epoken4,5. Ingen handling potensial svar lydsignaler ble oppdaget i auditiv cortex før høringen utbruddet6,7. Utvikling av morfologi og funksjon av sneglehuset har vært mye studert i mus, gerbil og rotten4,5,8. Den mechanotransduction og electromotility av hårcellene er også utviklet tidlig liv epoke5.
For å vurdere hørselen følsomheten på rotter på ulike postnatal aldre, har vi utviklet en metode for auditory hjernestammen svar (ABR) i rotte unger. Hele celle oppdateringen klemme er en ideell teknologi å undersøke OHCs electrophysiologically. Men begrenset sammenlignet med oppdateringen klemmen i neurons og andre epitelceller, lav sats av hele celle etterforskningen av electromotility av isolerte OHCs.
Her beskriver vi en prosedyre for å undersøke OHCs morphologically og electrophysiologically i akutt dissosiert sneglehuset fra postnatal rotter. Denne metoden kan endres for å studere molekylære mekanismer som regulerer indre håret celle utvikling og funksjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle eksperimentelle protokoller som involverer dyr fag ble godkjent av dyr etikk av sørlige Medical University.
1. klargjør løsninger for eksperimenter
- Forberede anesthetic (se Tabell for materiale): 1,5% pentobarbital natrium oppløst i ddH2O.
- Forberede disseksjon løsningen (se Tabell for materiale): løse opp en pose av Leiboviz's L-15 pulver i 1 L ddH2O. justere pH til 7.3 med 1 M NaOH. Justere osmolaritet til 300-330 mOsm ved hjelp av en osmometer og 10 mM HEPES før bruk.
- Oppløse 2 mg/mL collagenase IV (se Tabell for materiale) i disseksjon løsning utarbeidet i trinn 1.2.
- Forberede immunostai-løsninger (se Tabell for materiale): oppløse 4% paraformaldehyde i fosfat bufret saltvann (PBS).
Forsiktig: Paraformaldehyde er giftig; Bruk passende beskyttelse. - Fortynne 0,3% permeabilitet agent i PBS. Fortynne 10% normal geit serum i PBS som blokkerer bufferen. Fortynn prestin antistoff 1:200 blokkerer buffer. Fortynn Alexa488-konjugerte antistoffer 1:600 blokkerer buffer. Fortynn Phalloidin-Tetramethylrhodamine B isothiocyanate 1:200 i PBS.
- Forberede den ekstracellulære løsningen (se Tabell for materiale): forberede Leiboviz's L-15 medium som beskrevet ovenfor (trinn 1.2).
- Forberede intracellulær løsningen (se Tabell for materiale).
2. ABR opptak
Merk: ABR innspillingen har blitt tidligere beskrevet i detalj i våre tidligere studier9.
- Bedøve Sprague Dawley (SD) rotter (1-14 dag gammel pups og 2 - måned gamle voksne, begge kjønn) med en enkelt injeksjon av 1,5% natrium pentobarbital (22 mg/kg for pups og 30 mg/kg for voksne, intraperitoneal (IP)).
- Sted bedøvet dyr i en polyetylen-skum mold å nakkens dyrets kroppen. Plassere dyret på en anti-vibrasjon tabell i et lyd-demping rom. Hold dyrets kroppstemperatur på 37,5 ° C med en varmeputen.
- Tørk hodet området med 70% (vol/vol) etanol. Med en fin saks, gjøre en 1-2 mm snitt ventrolateral til det eksterne høydepunkt å plassere referanse elektrode eller bakken. En subdermal pinne elektrode (opptak elektrode) ligger over skallen toppunktet (figur 1A).
- Ved hjelp av funksjonsgenerator, generere kalibrert tone støt (1 ms stigning/fall, 3 ms platå) av ulike frekvenser (2, 4, 8, 16, 24 og 32 kHz) og intensiteter (redusert fra 85 til 10 dB SPL i 5 dB trinn). Variere frekvens og amplitude manuelt eller bruker en datamaskin. Levere lyd stimuli gjennom en elektrostatisk høyttaler ligger 10 cm bort mot hodet av dyr.
- Filtrere (100-1000 Hz), forsterke og gjennomsnittlig (256 ganger) lyd fremkalte potensial med en mange--funksjonen prosessor for å få ABRs. ABR spor overvåkes online og lagret for frakoblet analyse. Det tar ca 40 min å fullføre ABR opptak fra en dyr.
Merk: Vanligvis tre til sju topper (bølge jeg bølge VII) med latencies mindre enn 15 ms kan identifiseres (figur 1B). ABR terskelen er definert som minimum lydnivået på hvilken bølge I og II ble oppdaget. - Euthanize før dyrene våken bedøvelsen (med en intraperitoneal injeksjon av 0,3 mL 1,5% natrium pentobarbital).
3. Organ av Corti (OC) disseksjon
- Bedøve rotte unger. For rotter mindre enn 6 dager gamle (< P6), holde dyr i en 100 mm kultur parabol og dekke parabolen med is 10 min. For rotter > P6, bedøve dyret med en enkelt injeksjon av 1,5% natrium pentobarbital (22 mg/kg, IP). Halshugge rotte unger av bedøvelsen.
- Sterilisere hodet av sprøyting med 70% etanol (vol/vol).
- Åpne skallen langs sagittal midtlinjen med saks; fjerne hjernen for å avsløre det indre øret.
- Overfør det indre øret til en 35 mm Petriskål fylt med 3 mL iskalde L-15 (figur 2A).
- Under disseksjon mikroskopet, bruk fine pinsett fjerne benete kapselen av sneglehuset (figur 2B).
- Pakke OC og tilknyttede stria vascularis (SV) fra modiolus.
- Ved å holde den basale delen av SV med tang, skille OC fra SV helt av avkobling sakte fra base til toppen (figur 2C).
- Skjær OC jevnt i tre stykker med fine saks (figur 2D).
4. immunofluorescence flekker
- Ved å bruke et 200 µL pipette tips, overføre deler av OC (trinn 3.8) på et glass lysbilde og fikse med 100 µL av 4% paraformaldehyde minst 4 h på 4 ° C.
Forsiktig: Paraformaldehyde er giftig; Bruk passende beskyttelse. - Vask vev av fortrenge paraformaldehyde med 100 µL av fersk PBS. Vask vevet tre ganger i 10 min.
- Inkuber vevet med 0,3% permeabilitet agent i PBS i 30 min ved romtemperatur.
- Forkaste permeabilitet agent i PBS og vask vevet tre ganger med PBS.
- Blokker med 10% normal geit serum i PBS 1t ved romtemperatur.
- Inkuber med anti-prestin-C-terminus antistoff (1:200) blokkering løsning for 2 timer ved romtemperatur eller 4 ° C over natten.
- Vask tre ganger med PBS i 5 min.
- Inkuber med Alexa488-konjugerte sekundære antistoffer (1:600) i blokkering løsning for 1t ved romtemperatur i mørket.
- Vask tre ganger med PBS i 5 min i mørket.
- Inkuber med rhodamine-phalloidin (1:200) i 10 min ved romtemperatur i mørket.
- Vask tre ganger med PBS i 5 min i mørket.
- Montere på et glass lysbilde med montering medium (med DAPI). Bilde med AC confocal mikroskopi ved hjelp av 405 nm, 488 nm og 594 nm lasere. Sette laser makt på 0,1-0,5 mW og skanningen fart på 0,5 rammen/s.
5. Patch klemme opptak av isolerte OHCs
- Bruk pipette puller og mikro-forger gjøre oppdateringen pipettes tips diameter 2-3 µm. tilbake fylle Pipetter intracellulær løsning. Vanligvis var første motstanden av oppdateringen pipette 2.5-3,5 MΩ i Bad løsning.
- Ved å bruke et 200 µL pipette tips, Overfør OC (fra trinn 3.8) i 35 mm Petriskål. Fordøye vevet med 100 µL av enzymatisk fordøyelsen medium (collagenase IV, se Tabellen for materiale) i 5 minutter ved romtemperatur.
- Fortrenge enzymatisk fordøyelsen mediet med 100 µL av L-15. Skjær vevet i små biter med mikro skalpell isolere hårcellene.
- Etter milde pipettering, overføre cellene til en hjemmelaget liten plast kammer (diameter ~ 1,5 cm) fylt med enzym-fri bad løsning (~ 1,5 mL, se Tabellen for materiale).
- Plass kammeret på scenen av en invertert mikroskop. Finne de sunn vises enslig OHCs.
- Legg oppdateringen Pipetter i hodet scenen av en 700B forsterker. Flytte oppdateringen Pipetter forsiktig ved en micromanipulator og plassere den rundt bunnen av ytre hår cellen (figur 3A).
- Hele celle oppdateringen klemme OHC forsegle den laterale veggen av celle kroppen. Bruke sugekraft til cellemembranen er utløst. Angi holde potensielle på-70 mV. Celler med tilgang motstand varierte fra 10 til 17 MΩ og membran motstand varierte fra 100 til 500 MΩ, og regnes som en vellykket hele celle-konfigurasjon.
- Datastyring, bruk hyperpolarizing og depolarizing spenning (250 ms varighet og alt fra −140 til +94 mV i 13 mV skritt) til å lokke fram hele celle strøm-cellen.
- Forsterke hele celle strøm, filtrere (hjørne frekvens 5 kHz) etter en 700B forsterker. Konvertere data etter en 1440A converter og butikken for frakoblet analyse.
- Måle membran kapasitans av OHCs bruker en to sinuskurve spenning stimulans protokoll kontrollert av en patch klemme programvare. Angi stimulere spenning fra-140 til 110 mV. Lagre dataene for frakoblet analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ABR brakt frem fra bedøvet rotte unger eldre enn postnatal dag 7 (P7) bruker ren tone sprekker (figur 1A). Som vist i figur 1B, fikk den ABR bølgeformene rotte unger viste bare tre til fire forskjellige bølger med små amplitude. Vanligvis ble opptil sju toppene observert i ABR bølgeformer av voksen dyr (figur 1B).
For følgende immunostai- og elektrofysiologiske måling, ble rotte indre øret nylig dissekert fra temporal benet. Vi viser de påfølgende trinnene i vev disseksjon isolere OC SV og modiolus (figur 2A-2 C). OC ble kuttet i tre deler jevnt med mikro-saks (figur 2D). Slik viser morfologi av hårcellene, var segmentene farget med phalloidin, prestin antistoffer og DAPI (figur 2E). Hår pakker (i rødt) angir apikale overflaten av hårcellene mens celle kroppen av OHCs var preget av prestin (i grønt). Kjernen var merket av DAPI (i blått) ligger i regionen bunnen av IHCs og OHCs. Som vist i figur 2E, ble ingen prestin oppdaget i OHCs av sneglehuset på P5. Prestin ble først observert P7 i OHCs i basale sneglehuset.
Etter milde fordøyelsen var OHCs isolert fra OC (figur 3A). Hele celle spenning-klemme innspillinger ble utført fra OHCs fullstendig isolert fra rotte sneglehuset. Et representativt eksempel på hele celle gjeldende innspilt fra en isolert P9 OHC svar på membran potensial endret fra −140 til +107 mV er vist i figur 3B. Merk N-figur regionen IV kurven, som indikerer tilstedeværelse av KCa nåværende som er en unik respons av OHCs. Drevet av membran spenningen, intracellulær Cl- kombinert med prestin, vises som en ikke-lineær membran kapasitans (NLC) endringer under hele celle oppdateringen klemme modus. Den typiske NLC av en moden OHC er preget av klokkeformet avhengighet av membran potensial. NLC kan utstyres med en to-stats Boltzmann funksjon og kan gjenspeile funksjonen electromotility i OHCs. Funksjonen Boltzmann for kapasitans montering er beskrevet som:
Ligningen og parameterne ble beskrevet i vår forrige papir9. To representant NLCs er vist i Figur 3 c.
Figur 1. Auditory hjernestammen svar opptak. (A) opptak elektroden ble satt inn i hodebunnen mellom to ører. Bakken og referanse elektroder plassert under det venstre og høyre høydepunkt, henholdsvis. En åpen høyttaler ble plassert 10 cm fra nesetipp av rotte. (B) to representant ABR bølgeformer svar på 16 kHz, 80 dB SPL tone sprekker. Øvre spor innspilt fra en P8 pup. Bunnen spor innspilt fra en voksen rotte. Tallene angir forskjellige topper bølgeformer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Organ av Corti dissection. (A) det indre øret dissekert fra en P9 rotte pup. Sneglehuset og vestibular regionen vises. (B) strukturen i sneglehuset ble utsatt etter fjerning av benete veggen. (C) orgelet Corti (OC) og stria vascularis (SV) ble isolert fra modiolus. (D) organ av Corti ble skåret jevnt i tre stykker. Skala barer i AD representerer 1000 µm. (E) AC Confocal bilder viser hårcellene ligger i ulike segmenter (basale, midtre og apikale) langs sneglehuset. Rhodamine-phalloidin (rød) representerer hår pakker på apikale overflaten av hårcellene. DAPI (blå) representerer kjerner i midt-nederst havn av hårcellene. Prestin (merket i grønt) ble bare uttrykt på den laterale veggen av ytre hårcellene. For midten og basale segmenter på P7 vises bare den grønne kanalen å illustrere uttrykk for prestin i OHCs. Skala linjen representerer 20 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Hele celle oppdateringen klemme opptak av isolert ytre hårcellene. (A) en isolert ytre hår celle ble forseglet i hele-celle-modus. Skala linjen representerer 10 µm. (B) A representant IV kurve registrert fra en P9 ytre hår celle. (C) ikke-lineære membranen kapasitans (NLC) innhentet fra to ytre hårcellene på ulike aldersgrupper. Kapasitans spenning svarene (åpne sirklene) var utstyrt med Boltzmann-funksjonen (vist som tykke linjer). NLC var normalisert til den tilsvarende lineær kapasitans (Clin). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I rotter yngre enn dag 11, kan ingen handling potensial svar på lyd stimulering være observert i auditiv cortex6,7. Derfor er postnatal dag 11 beskrevet som "høring utbruddet"10. Utviklingen av hørselen funksjonen før høringen utbruddet ikke var godt studert ennå. Bruke lignende metoden for voksen ABR opptak, viser vi at ABRs kan bli brakt frem av ren tone serieopptak fra rotte unger yngre enn P11 (figur 1). Men den ABR bølgeformene fra rotte unger viste litt forskjellige egenskaper fra de voksen dyr. ABR svarene er små i amplitude med relativt høye terskler. Dette resultatet innebærer at utvikler hørselen har lav følsomhet for signaler. Betydelig forskjell ble observert i ABR bølgeformer innspilt fra rotte unger. Vanligvis ble opptil sju toppene observert i voksen ABR bølgeformer9. Disse toppene med forskjellige ventetid genereres av ulike hjernestammen kjerner langs auditiv veien11. Våre resultater indikerer at bare I-IV bølgene var synlig i ABR fra rotte unger (figur 1B). Bølgene I og II representerer svarene fra sneglehuset og hørselsnerven11. Derfor indikerer resultatene at høyere nivå auditiv kjerner ikke svare på akustisk stimuli under utvikling. Disse data tyder på at sneglehuset nå funksjonelle modenhet tidligere enn sentrale hørselen. Metoden som beskrives her er viktig for å studere molekylære mekanismer som regulerer sneglehuset utvikling og hår celle funksjon.
Høy kvalitet Disseksjon av OC er avgjørende for videre studier inkludert immunostai-, Western blotting og elektrofysiologiske måling. Disse eksperimentene er utført ved hjelp av voksen SD rotter og rotte unger mellom 1 til 14 dager gamle. Rotte unger er ideelle for fine disseksjon cochlea benet er myk og kan lett fjernes ved tang uten å skade OC. Voksen rotter er spesielt forsiktig nødvendig å unngå rupturing OC under fjerning hardt-benete kapselen. Ved hjelp av fine tang, kan OC og knyttet SV løftes av fra modiolus. Den separerte OC og SV har annen tekstur (figur 2C). For rotte unger, kan OC bli kuttet i tre segmenter med en lengde på 800-1200 µm. Vær oppmerksom på at alle trinnene bør utføres i iskalde L-15 så fort som mulig for å minimere fornedrelse og vev forverring.
Isolerte deler av OC er gode forberedelser for immunostai-Western blotting og RNA analyse. Her viser vi morfologi av sensoriske hårcellene i OC av immunostaining. OHCs ha håret bunt på overflaten deres apikale mens kjernen har dem ligger basally12. Motor protein prestin uttrykkes på lateral membranen av OHCs. AC confocal tenkelig dataene indikerte at prestin var første uttrykt på P6-P7 og viste en fortsatt økning over neste uke (figur 2E). I videre studier, ble vestlige blotting og q PCR utført for å kvantifisere de observerte uttrykk endringene av prestin under utvikling (data ikke vist). Fordi hårcellene er mindretall i OC, anbefales 6 til 10 cochleae i et enkelt eksperiment å oppnå robust signaler.
Oppdateringen klemme opptak av OHCs, ble mild enzymatisk fordøyelsen utført for å skille OHCs. Hårcellene er skjør, og spesiell forsiktighet er nødvendig i dette trinnet. Bruke en 200 µL pipette tips for å overføre de vev og atskilt. Den isolerte delen av OC ble overført til en dråpe collagenase løsning (~ 100 µL) i en Petriskål i ca 5 min ved romtemperatur. Unngå lange fordøyelsen times, som vil skade cellemembranen av OHCs. Under mikroskopet, ble sunne leter OHCs valgt for oppdateringen klemme opptak. Celler viser noen tegn til krymping, hevelse, skade eller translokasjon av kjernen ble ekskludert fra neste forsøket. Sunn vises enslig OHCs og IHCs er lett å identifisere ved sin morfologiske forskjell. OHCs viser sylinderform og en større akse-diameter ratio, mens IHCs er kolbe-formet med en stram halsen12. Hele celle oppdateringen klemme i OHCs er litt vanskelig i nerveceller og andre epitelceller. For vellykket hele celle konfigurasjon lå vanligvis oppdateringen pipette nær kjernen, holdt fra øvre lateral membranen som inneholder en høy tetthet av prestin partikler (figur 3A). Etter membranen ble utløst, ble en to sinuskurve spenning stimulans protokoll brukt til cellen for å få membran kapasitans av OHCs. Med den samme teknikken, er spenning måte, det mulig å lokke fram hele celle gjeldende.
Denne metoden er en fint verktøyet å undersøke funksjonen electromotility OHCs i vitro9,13. Denne metoden kan også brukes til å undersøke funksjonen ion kanaler og Farmakologiske egenskaper av reseptorer i OHCs og IHCs14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra 973 programmet (2014CB943002) og National Natural Science Foundation av Kina (11534013, 31500841).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anesthetic | |||
| Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | 1.5% in water |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissection solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| Collagenase IV | Sigma | C5138 | 2 mg/mL in L-15 |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Immunostaining solutions | |||
| PBS | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | PH 7.3 |
| Paraformaldehyde | Sigma | 158127 | 4% in PBS |
| Triton X-100 | Amresco | ZS-0694 | 0.3% in PBS |
| Normal goat serum | Thermo Fisher Scientific | 10000C | 10% in PBS |
| prestin antibody | Santa Cruz | SC-22694 | dil 1:200 |
| Alexa Fluor 488-conjugated antibody | Thermo Fisher Scientific | A-11055 | dil 1:600 |
| Phalloidin-Tetramethylrhodamine B isothiocyanate | Sigma | P1951 | dil 1:200 |
| DAPI | Solarbio | C0060 | dil 1:20 |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Extracellular solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Intracellular solution | |||
| CsCl | Sigma | 7647-17-8 | 140 mM |
| MgCl2 | Sigma | 7791-18-6 | 2 mM |
| EGTA | Sigma | 67-42-5 | 10 mM |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Osmometer | Gonotec | OSMOMAT 3000 basic | |
| Forcep | WPI | 14095 | Tweezers dumont |
| Micropipette puller | Sutter Instrument | MODLE-P97 | |
| Micro Forge | Narishigen | MF-830 | |
| Mini Operating System | Sutter Instrument | MP-285 | |
| MultiClamp | Axon | 700B | |
| Low-Noise Data Acquisition System | Axon | 1440A | |
| ES1 speaker | Tucker-Davis Technologies | ||
| TDT system 3 | Tucker-Davis Technologies | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Software | |||
| SigGenRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| BioSigRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| jClamp | Scientific Solutions | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal | |||
| SD rat | Experimental Animal Center of Southern Medical University |
References
- He, D. Z., Zheng, J., Kalinec, F., Sacchi Kakehata, S. S. antos-, J, Tuning in to the amazing outer hair cell: membrane wizardry with a twist and shout. J Membr Biol. 209, 119-134 (2006).
- Dallos, P. Cochlear amplification, outer hair cells and prestin. Curr Opin Neurobiol. 18, 370-376 (2008).
- Zheng, J., et al. Prestin is the motor protein of cochlear outer hair cells. Nature. 405, 149-155 (2000).
- Abe, T., et al. Developmental expression of the outer hair cell motor prestin in the mouse. J Membr Biol. 215, 49-56 (2007).
- Waguespack, J., Salles, F. T., Kachar, B., Ricci, A. J. Stepwise morphological and functional maturation of mechanotransduction in rat outer hair cells. J Neurosci. 27, 13890-13902 (2007).
- Zhang, L. I., Bao, S., Merzenich, M. M. Persistent and specific influences of early acoustic environments on primary auditory cortex. Nat Neurosci. 4, 1123 (2001).
- De, V. -S. E., Chang, E. F., Bao, S., Merzenich, M. M. Critical period window for spectral tuning defined in the primary auditory cortex (A1) in the rat. J Neurosci. 27, 180-189 (2007).
- He, D. Z., Evans, B. N., Dallos, P. First appearance and development of electromotility in neonatal gerbil outer hair cells. Hearing Res. 78, 77-90 (1994).
- Hang, J., et al. Synchronized Progression of Prestin Expression and Auditory Brainstem Response during Postnatal Development in Rats. Neural Plast. , 4545826 (2016).
- Ehret, G. Development of absolute auditory thresholds in the house mouse (Mus musculus). J Am Audiol Soc. 1, 179-184 (1976).
- Møller, A. R. Hearing:anatomy, physiology, and disorders of the auditory system. , Academic Press. Dallas. (2006).
- He, D. Z., Zheng, J., Edge, R., Dallos, P. Isolation of cochlear inner hair cells. Hearing Res. 145, 156-160 (2000).
- Tang, J., Pecka, J. L., Tan, X., Beisel, K. W., He, D. Z. Z. Engineered Pendrin Protein, an Anion Transporter and Molecular Motor. J Biological Chem. 286, 31014-31021 (2011).
- Fu, M., et al. The Effects of Urethane on Rat Outer Hair Cells. Neural Plast. 2016, 1-11 (2016).
