Summary
هنا، نحن تصف أسلوبي الرواية مستقرة الإدارة داخل الآنف تحت التخدير استنشاق مع حد أدنى من الإجهاد البدني للحيوانات التجريبية. ونحن أيضا وصف أسلوب للتقييم الكمي لمستويات توزيع المخدرات في الدماغ عبر مسار الآنف إلى المخ باستخدام راديولابيليد [14ج]-الاينولين كركيزة نموذجية من الجزيئات الكبيرة للذوبان في الماء.
Abstract
وقد أبلغ الإدارة داخل الآنف لتكون مساراً محتملة لتسليم الآنف إلى المخ من العوامل العلاجية التي تلتف حاجز الدم في الدماغ. ومع ذلك، كانت هناك تقارير قليلة فيما يتعلق تحليل كمي بل أيضا شروط الإدارة المثلى والجرعات الأنظمة العلاجية للتحقيقات المتعلقة بالتسليم الآنف إلى المخ. التقدم المحدود في البحث عن آليات مسار الآنف إلى الدماغ القوارض باستخدام يمثل عائقا كبيرا من حيث تصميم نظم إيصالها الآنف إلى المخ للمخدرات مرشح.
إلى تحقيق بعض التقدم في هذا الصدد، نحن المتقدمة وتقييم أساليب رواية اثنين مستقرة الإدارة داخل الآنف تحت التخدير استنشاق للحيوانات التجريبية. ونحن أيضا وصف أسلوب لتقييم مستويات توزيع المخدرات في الدماغ عن طريق الآنف بالدماغ المسار استخدام الراديو المسمى [14ج]-الاينولين (الوزن الجزيئي: 5,000) كركيزة نموذجية من الجزيئات الكبيرة للذوبان في الماء.
وفي البداية، قمنا بتطوير بروتوكول المستندة إلى ماصة إدارة داخل الآنف باستخدام أقنعة أوبينابل مؤقتاً، مما مكننا من القيام بإدارة موثوقة للحيوانات تحت التخدير مستقرة. باستخدام هذا النظام، [14ج]-يمكن تسليم الاينولين إلى الدماغ مع القليل من الخطأ التجريبي.
وفي وقت لاحق وضعنا بروتوكولا إدارة داخل الآنف يترتب عليه عكس كانولاتيون من جانب مجرى الهواء عن طريق المريء، الذي تم تطويره للتقليل من آثار إزالة mucociliary (MC). هذا الأسلوب أدى إلى مستويات أعلى بكثير من [14ج]-الاينولين، التي تم الكشف عنها كمياً في لمبة شمي والمخ، ولب سيسائيه، من الأسلوب ماصة. هذا يظهر أن يكون سبب الاحتفاظ بالحل المخدرات في تجويف الآنف زيد إلى حد كبير بالإدارة النشطة باستخدام مضخة الحقن في اتجاه المعاكس لمولودية في تجويف الآنف.
وفي الختام، يمكن أن يتوقع طريقتين للإدارة داخل الآنف نمواً في هذه الدراسة أن تقنيات مفيدة للغاية لتقييم الدوائية في القوارض. الأسلوب كانوليشن العكسية، على وجه الخصوص، يمكن أن تكون مفيدة لتقييم الإمكانات الكاملة لإيصال المخدرات المرشحين الآنف إلى المخ.
Introduction
وتعتبر بيوميديسينيس مثل الببتيدات والنوكليوتيد والأجسام المضادة يكون التطبيق المحتملة كرواية العوامل العلاجية لاضطرابات الجهاز العصبي المركزي الصهر التي لديها حاليا لا العلاج العلاجية. بيد أن بيوميديسينيس معظم الجزيئات الكبيرة للذوبان في الماء، التسليم من الدم إلى الدماغ عن طريق الإدارة عن طريق الحقن أو عن طريق الفم صعبة للغاية بسبب مقاومة حاجز الدم في الدماغ (BBB).
وفي السنوات الأخيرة، سجلت الإدارة داخل الآنف لتكون مساراً محتملة لتسليم الآنف إلى المخ من العوامل العلاجية التي تتجنب بي بي بي1،2،3،،من45. ومع ذلك، كانت هناك تقارير قليلة نسبيا فيما يتعلق بالتحليل الكمي لمسار الآنف إلى المخ التسليم6. وعلاوة على ذلك، لم تكن هناك تقريبا أي تقارير في ظروف المنشأة الإدارة المثلى ونظم الجرعات، مثل الحجم، الأوقات، الفترات الزمنية، والسرعة، للتحقيقات المتعلقة بالتسليم الآنف إلى المخ. أوجه القصور المذكورة أعلاه يمكن أن تعزى للأسباب التالية: (ط) أسلوب أمثل للإدارة داخل الآنف للفئران ولم تنشأ، وعادة ما تتسم الإدارة (ثانيا) داخل الآنف قبل بيبيتينج، الذي يستخدم عادة، قبل إينتيرينديفيدوال من الاختلاف بين الحيوانات بسبب إزالة mucociliary (MC)، الأمر الذي غالباً ما يؤدي إلى البسط الإمكانات الآنف إلى المخ التسليم الفعلي لدواء معين.
التخدير استنشاق استخدام isoflurane (بدء: 4%، صيانة: 2%) مع استنشاق قناع للقوارض قد اكتسب الاستخدام على نطاق واسع، بهدف الحد من أو القضاء على الألم المقترنة بعملية جراحية أجريت على الحيوانات التجريبية. استخدام أقنعة يجعلها واضحة نسبيا لأداء إدارة المخدرات نموذجية في الحيوانات التجريبية تحت التخدير استنشاق عبر الطرق عن طريق الحقن تحت الجلد وداخل. ومع ذلك، في حالة الإدارة داخل الآنف، يحتاج القناع المراد إزالتها مؤقتاً من الحيوانات للدواء. مع الحفاظ على أقل من 2 في المائة إيسوفلوراني، الحيوانات عادة توقظ سريعاً من التخدير استنشاق. عندما يكون حجم الإدارة كل جرعة كبيرة، يمكن أن يسبب هذا الحل المخدرات تتدفق المريء من تجويف الآنف، وذلك قد تحتاج جرعة كبيرة واحدة إلى تقسيمها إلى جرعات صغيرة متعددة للإدارة داخل الآنف الصغيرة الحيوانات. كما يتطلب الإدارة داخل الآنف، إزالة القناع للإدارة المتكررة والوقت الكافي لإيصال تجويف الآنف المستمر، هناك احتمال كبير أن الفئران سوف توقظ من التخدير أثناء إجراء الإدارة. وهذا يجعل من الصعب جداً لأداء الإدارة داخل الآنف تحت مخدر دولة مستقرة، وربما يساهم في تباين interindividual الملاحظة إيصالها الآنف إلى المخ بين القوارض.
في هذه الدراسة، طورنا التالي طريقتين رواية إدارة مستقرة داخل الآنف تحت التخدير استنشاق، الذي فرض حد أدنى من الإجهاد البدني في الحيوانات التجريبية. للطريقة الأولى، استخدمنا قناع مؤقتاً أوبينابل التي تمكن الإدارة داخل الآنف أثناء التخدير استنشاق. يتضمن الجزء أوبينابل من القناع سيليكون المكونات التي يمكن استخدامها وفقا لتوقيت الإدارة لتسهيل الإدارة داخل الآنف مستقرة باستخدام ماصة. للأسلوب الثاني، قنية أدرجت جراحيا لتمريرها من المريء في تجويف الآنف، ومن ثم كان يعلق مضخة الحقن حيث أن الحل المخدرات يمكن مباشرة وبشكل موثوق تسليم في تجويف الآنف باستنشاق مستقرة لهذا التخدير. هذا الأسلوب يمكن تعزيز إيصال المخدرات إلى الدماغ عن طريق الآنف إلى المخ، لأنه سيتحسن كثيرا التقليل من آثار MC، المخدرات ريتينتيفيلي في تجويف الآنف. وبالإضافة إلى ذلك، يصف لنا طريقة لتقييم مستويات توزيع المخدرات (% للدماغ حقن جرعة/g) في الدماغ باستخدام الراديو المسمى [14ج] كمي-الاينولين [الوزن الجزيئي (ميغاواط): 5,000] كركيزة نموذجية للذوبان في الماء الجزيئات الكبيرة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وأجرى هذه الدراسة الحيوانية (#AP17P004) وفقا للمبادئ التوجيهية التي أقرتها جامعة نيهون العناية بالحيوان واستخدام اللجنة (طوكيو، اليابان). واعتمد هذه الدراسة (#17-0001) مركز النظائر المشعة بكلية الصيدلة، جامعة نيهون.
1-الحيوانات المستخدمة للإدارة داخل الآنف تحت التخدير استنشاق
- بيت الفئران التجريبية في أقفاص الفولاذ المقاوم للصدأ تحت دائرة الضوء/الظلام 12-ح (الضوء على 08:00 ص-08:00 م)، مع درجة حرارة التي تسيطر عليها الإبقاء على 23 ± 1 درجة مئوية، والرطوبة 50% ± 10%، و إعلانية libitum الوصول إلى الغذاء والماء.
- قبل التجريب، تخدير الفئران عن طريق استنشاق إيسوفلوراني 2%، بدء التالية بتركيز 4%. تأكيد المستوى المطلوب من أنيسثيتيزيشن عن طريق التحقق من اختفاء الاستقامة السطحية.
2-إعداد حل الإدارة
- تعد حلاً إدارة [14ج]-الاينولين (50 ميكرومتر، μCi/mL 0.5 للماوس) بإضعاف في مخزنة الفوسفات المالحة، وتخزينها في 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.
3-داخل الآنف الإدارات للفئران
-
طريقة ميكروبيبيتي باستخدام قناع استنشاق أوبينابل مؤقتاً (رقم 1)
ملاحظة: هذا الأسلوب إدخال تعديل على البروتوكول الإدارة داخل الآنف باستخدام ميكروبيبيتي المنشأة بواسطة فراي et al. 3- إصلاح الفئران في موقف ضعيف في corkboard بتسجيل أطرافهم تحت التخدير استنشاق مع 2% إيسوفلوراني (الشكل 1A).
- إدارة إجمالي حجم 25 ميكروليتر الإدارة الحل لكل الماوس عند فواصل زمنية 30-s، عبر جرعات 1-2 ميكروليتر تدار بدلاً من ذلك إلى الخياشيم والأيسر بينما يتم إصلاحها الفئران تحت التخدير استنشاق (الشكل 1 باء و جيم).
- ملاحظة: النفايات غاز مخدر هو مسح بالوسائل النشطة (الأبخرة هود، مجلس الوزراء السلامة الأحيائية الصلبة أنبوبي، الفراغ، إلخ) عندما يتم فتح القناع ووسائل سلبية (قارورة غاز مخدر) عند إغلاق
-
عكس كانولاتيون m سلوب من جانب مجرى الهواء عن طريق المريء (الشكل 2)
ملاحظة: هذا الأسلوب إدخال تعديل على البروتوكول الاستيعاب داخل الآنف للفئران التي أنشأتها هيراي et al. 7- إصلاح الفئران في موقف ضعيف في corkboard بتسجيل أطرافهم تحت التخدير استنشاق مع إيسوفلوراني 2%.
- حلق شعر في الرقبة وهيأهم عبر تطبيق تدين أو الكلورهيكسيدين متبوعاً شطف الكحول.
- كشف في القصبة الهوائية والمريء عن طريق توسيع الجلد أسفل الحلق مع الملقط بعد إجراء شق صغير (1.5 سم) مع المقص.
- جعل شق (1 مم) في القصبة الهوائية باستخدام مقص.
- إدراج قنية (قطرها الداخلي: 0.58 mm، القطر الخارجي: 0.965 ملم) بطول 1.2 سم ونعلق على الطرف الآخر من القنية داخل قناع استنشاق.
- جعل شق (1 مم) في المريء باستخدام مقص، إدراج قنية (قطرها الداخلي: 0.28 ملم، وقطرها الخارجي: مم 0.61) بطول 1.4 سم نحو الجزء الخلفي من تجويف الآنف، واضطر أنه (الشكل 2 أ وب).
ملاحظة: نفذت إجراءات 3.2.2 إلى 3.2.4 تحت مجهر مجسم في التكبير × 10. - إرفاق إبرة (27 × 1/2) إلى 1 مل حقنه مليئة بحل إدارة والاتصال بمضخة المحاقن الصغيرة القابلة لبرمجة.
- الاتصال أعلاه إبرة إلى القنية التي قد تم إدراجها في المريء في 3.2.5 (الشكل 2).
- إدارة إجمالي حجم 25 ميكروليتر [14ج]-حل الاينولين بمعدل ثابت (5 ميكروليتر/دقيقة) (الشكل 2 و 2D).
4-الكمية تجربة استخدام الراديو المسمى الجزيئات الكبيرة للذوبان في الماء ([14ج]-الاينولين)
- قطع رأس الفئران التجريبية تحت التخدير وفتح يصل بهم كرانيومس، استخدام المقص ومن جانب سيسائيه لب، مع الحرص على عدم الأضرار العقول.
- استخراج بعناية في الدماغ كله بتجريف الصغرى-ملعقة من الجمجمة باستخدام.
- مكان ورقة تصفية مبلل مع المحلول الملحي على طبق بيتري الذي تم تخزينه على الجليد.
- ضع أدمغة المستخرج على ورقة تصفية ترطب.
- تمحو الدم التمسك بسطح المخ مع مسحه القطن مبلل مع المحلول الملحي للقضاء على الأقل التأثير [14ج]-الاينولين في الدم على سطح الدماغ.
- تشريح أدمغة سريعاً، وتقسيمها إلى ثلاثة أجزاء: لمبة شمي والمخ، ولب سيسائيه (بما في ذلك بونس).
- وضع العينات الدماغ في الأنسجة سولوبيليزير عند 50 درجة مئوية ح 1.
- إضافة 10 ميكروليتر من التﻷلؤ السائل كوكتيل لعينات المخ.
- نقل من قاسمة 25 ميكروليتر من الإدارة الحل حله في التﻷلؤ كوكتيل لقنينة التﻷلؤ لتحديد النشاط الإشعاعي للحل المطبق.
- قياس ديسينتيجريشنز كل دقيقة من [14ج] النشاط الإشعاعي في العينة الدماغ (X [14ج]الدماغ) والحلول التطبيقية ([14ج] Xفي الجرعة) في عداد التﻷلؤ سائل مجهزة بمناسبة تصحيح كروس 3ح و 14جيم
5-بيانات التحليل
- حساب المخدرات مستويات التوزيع (%) لحقن جرعة (معرف %) باستخدام المعادلة التالية:
معرف % ⁄g الدماغ = (X [14ج]الدماغ/[14ج] Xفي الجرعة) × 100،
حيث سالمخ (الدماغ dpm/g) هو مقدار [14ج]-قياس الاينولين في أنسجة المخ وهو العاشرفي الجرعة (حل dpm/25 ميكروليتر) التركيز [14ج]-الاينولين في الحل المستخدم للإدارة داخل الآنف.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ويبين الشكل 3 [14ج]-مستويات inulin (معرف % ⁄g الدماغ) في لمبة شمي (A) والمخ (ب)، ولب سيسائيه (ج) التي تم الحصول عليها باستخدام هذين النوعين من الإدارة داخل الآنف المقررة في هذه الدراسة. الإدارة داخل الآنف باستخدام ماصة الأسلوب تمكين التسليم [14ج]-الاينولين في المخ باستخدام أقنعة استنشاق أوبينابل (الشكل 1). تحت التخدير استنشاق، كشفت النتائج الكمية لا تباين interindividual التجريبية بين الحيوانات النظر، كما أشار إلى ذلك الخطأ القياسي المنخفض. عندما تم استخدام أسلوب الإدارة تجويف الآنف قنية عكس المريء لإدارة [14ج] الاينولين-الاينولين تحت التخدير استنشاق (الشكل 2)، مستويات أعلى بكثير من [14ج]-لوحظت في (لمبة شمي الشكل 3 ألف)، المخ (الشكل 3B) ولب سيسائيه (الشكل 3)، مما بطريقة ماصة. وعلاوة على ذلك، داخل المخ، أعلى [14ج]-تم الكشف عن مستويات الاينولين في لمبة شمي ولب سيسائيه، التي تشارك مكاناً بارزا في مسار الآنف إلى المخ، مما في المخ.
رقم 1: الإدارة داخل الآنف باستخدام ميكروبيبيتي بالاقتران مع قناع استنشاق مؤقتاً أوبينابل. صوراً تظهر ماوس ثابت (A) مع قناع مغلقة أمام الإدارة، و (ب) عن قرب وآراء القناع فتح كامل (ج) أثناء إدارة داخل الآنف باستخدام ماصة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: الإدارة داخل الآنف بعكس كانوليشن من جانب مجرى الهواء عن طريق المريء باستخدام مضخة الحقن. وقد تم إدراجها في المريء والقصبة الهوائية صوراً تظهر المنطقة (أ) العمليات الجراحية ووجهات النظر (ب) عن قرب وأكملها (ج) (د) مخطط بالماوس ثابتة بعد نوعين من القنية ومتصلا الصغير حقنه في قناع استنشاق. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: مقارنة بين [14ج]-مستويات الاينولين في لمبة شمي (A) والمخ (ب)، ولب سيسائيه (ج) عقب هذين النوعين من الإدارة داخل الآنف. في-أ وب في تبين أسلوب ميكروبيبيتي (الشكل 1) وأسلوب كانولاتيون العكسي (الشكل 2) للإدارة داخل الآنف، على التوالي. استخدام كل طريقة، إجمالي حجم 25 ميكروليتر [14ج]-كانت تدار inulin (50 ميكرومتر، 0.5 μCi/mL). كان معدل الإدارة في ب 5 ميكروليتر/دقيقة. يمثل كل عمود ± يعني المطران (n = 4). ف < 0.01 (الطالب t-اختبار) الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الآنف إلى المخ إيصال الأدوية يتوقع أن يكون له تأثير واضح على اضطرابات الجهاز العصبي المركزي لهذا المسار يمثل مسار نقل مباشر الذي يتجاوز BBB. أبلغ ثلاثة مسارات مختلفة من الآنف إلى الدماغ بتاريخ8. الأول هو مسار عصب شمي، الذي يمر من الغشاء المخاطي حاسة الشم في الغشاء المخاطي الأنفي فوريبرين عن طريق عصب شمي. والثاني هو مسار العصب trigeminal، الذي يمر من الغشاء المخاطي التنفسي في الغشاء المخاطي الأنفي للدماغ في هيندبرين عن طريق العصب trigeminal. والثالث هو مسار الخدمات القطرية، التي توزع في جميع أنحاء الدماغ عن طريق الخدمات القطرية. مسار الآنف إلى المخ وقد اجتذب اهتماما كبيرا فيما يتعلق بإدارة ماء الجزيئات الكبيرة، التي تميل إلى إعاقة BBB، وكوسيلة لإيصال بيوميديسينيس إلى الجهاز العصبي المركزي8، 9 , 10 , 11 , 12-ومع ذلك، قليلة هي الدراسات السابقة قد مبينة بوضوح أساليب الإدارة داخل الآنف للحيوانات الصغيرة بغية التحقق من إيصال المخدرات مرشح عبر مسار الآنف إلى المخ. وبناء على ذلك، كان هناك تقدما بطيئا جداً في البحوث المتصلة بالمخدرات الآنف بالدماغ آليات التسليم استخدام الحيوانات الصغيرة، مما يمثل عائقا كبيرا من حيث تصميم نظم إيصالها الآنف إلى المخ للمخدرات مرشح. ولذلك، في هذه الدراسة، قمنا بتطوير بروتوكولات اثنين للإدارة داخل الآنف تحت التخدير استنشاق للتحقيق في توزيع المخدرات مرشح مختلف، مثل بيوميديسينيس، التي تستهدف أمراض الجهاز العصبي المركزي. نحن أيضا وصف أسلوب التي يمكن استخدامها لتقييم كمي.
أسلوب الإدارة داخل الآنف ماصة استخدام أقنعة استنشاق أوبينابلي مؤقتاً وضعت في هذه الدراسة يجعل من الممكن لأداء إدارة موثوق بها مع الحيوانات في حالة التخدير مستقرة دون الصحوة، كما لا يجب أقنعة يتم إزالة (الشكل 1). باستخدام هذا الأسلوب، قد دللنا على إيصال جزيء ضخم للذوبان في الماء (الاينولين؛ ميغاواط: 5,000) في الدماغ. كما تخترق الاينولين BBB، يمكن استخدامه كعلامة مساحة التخزين داخل الأوعية (حوالي 10-15 ميكروليتر/ز المخ) في الدماغ الفئران13. حصلنا على نتائج كمية ممتازة مع القليل من الخطأ التجريبي. المستوى [14ج]-الاينولين في الدماغ بوضوح أعلى بعد الإدارة داخل الآنف من بعد الإدارة عن طريق الحقن الوريدي (البيانات لا تظهر). وبناء على ذلك، أنشأنا أن هذا الأسلوب يمثل نهجاً صالحاً للإدارة داخل الآنف التي تمكن الإدارة التقليدية باستخدام ماصة بينما المواضيع التي لا تزال تحت التخدير استنشاق (الشكل 2). التخدير استنشاق قد تؤثر على غشاء طلائي الآنف، ونتيجة لذلك زيادة النفاذية عبر ظهارة الآنف. إجراء المزيد من الدراسات مطلوبة لتميز التسليم الدماغ باستخدام الأسلوب كانوليشن عكس تحت التخدير استنشاق، مقارنة مع التخدير التقليدية مثل داخل الإدارة.
نحن في وقت لاحق حققت الإدارة عن طريق عكس كانوليشن من جانب مجرى الهواء عن طريق المريء، الذي تم تطويره للتقليل من آثار MC. بالنسبة للفئران، يتطلب الأسلوب هيراي لعملية جراحية لإغلاق المريء ومن ثم إدارة من المدخل للأنف لتقليل تأثير MC. في الفئران، من الصعب فعلياً لأداء كانوليشن من مدخل الآنف، والإدارة داخل الآنف قد يسبب العطس. لدينا أسلوب cannulation عكس يربط قنية إدراجها مباشرة في تجويف الآنف من المريء إلى مضخة حقنه الصغير، الذي يتميز بأنه من الممكن إغلاق المريء ومجرى الهواء عن طريق الجراحة، والقيام في نفس الوقت بداخل الآنف الإدارة. التكيف ضخ حقنه صغيرة يسهل الإدارة باستخدام معدلات الجرعات الدقيقة ووحدات التخزين. باستخدام هذا الأسلوب، سجلنا مستويات أعلى بكثير من الجزيئات ماء تدار في لمبة شمي والمخ، ولب سيسائيه الفئران من عند استخدام الأسلوب ماصة (الشكل 3). وهذا يبدو أن سبب سلبية إدارة الحل مع الإدارة داخل الآنف باستخدام ماصة، وفقا للتنفس العفوي، وأن الحل الذي يميل إلى إلغاء نحو القصبة الهوائية والمريء بمولودية. وفي المقابل، يدار الحل مع الإدارة في تجويف الآنف عن طريق قنية عكس المريء، بنشاط باستخدام مضخة الحقن في تجويف الآنف. ويبدو أن هذا النهج يزيد إلى حد كبير من الاحتفاظ بالحل المخدرات في تجويف الآنف، مما يؤدي مستويات أعلى من توزيع في الدماغ. وعلاوة على ذلك، اكتشفنا مستويات أعلى من الحل التي تدار في لمبة شمي ولب سيسائيه، التي تشارك مكاناً بارزا في مسار الآنف إلى المخ، مما في المخ. وبناء على ذلك، أثبتنا أن الإدارة في تجويف الآنف عن طريق قنية عكس المريء وسيلة فعالة لتقييم الإمكانيات الكاملة لتقديم المرشحين المخدرات الآنف إلى المخ.
وفي الختام، يمكن أن يتوقع طريقتين للإدارة داخل الآنف الذي وضعنا في هذه الدراسة أن تقنيات مفيدة للغاية لتقييم الدوائية في الحيوانات الصغيرة عبر مسار الآنف إلى المخ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
هذه الدراسة وأيده في الجزء "الخاص جامعة العلامة التجارية مشروع البحث" من يأمرون؛ معونات ل Research (C) العلمية (08249 ك 17 [أن ت وت. س.]) من الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (JSPS)؛ منحة للبحوث التعاونية من مؤسسة هاماغتشي للنهوض بالكيمياء الحيوية [إلى ت. س.]، ومؤسسة العلوم وتاكيدا [أن ت]. ونشكر السيد يويا Nito والسيدة أكيكو أسامي لمساعدتها التقنية القيمة في إجراء التجارب.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ddY mouse | Japan SLC, Inc. | Male, 4-6 weeks, 20-30 g | |
| Isoflurane | Pfizer | v002139 | |
| Isoflurane setup | SHINANO manufacturing CO. LTD. | SN-487-OTAir, SN-489-4 | |
| Isoflurane mask | SHINANO manufacturing CO. LTD. | For small rodents | |
| Isoflurane mask (openable type) | SHINANO manufacturing CO. LTD. | Special orders | |
| Anesthesia Box | SHINANO manufacturing CO. LTD. | SN-487-85-02 | |
| Animal experiments scissors-1 | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | B-27H | |
| Animal experiments scissors-2 | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | B-13H | |
| Tweezers-1 | FINE SCIENCE TOOLS Inc. | 11272-30 | Dumont #7 Dumoxel |
| Tweezers-2 | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | A-12-1 | |
| Cannula tube (PE-50) | Becton, Dickinson and Company. | 5069773 | I.D.: 0.58 mm, O.D.: 0.965 mm |
| Cannula tube (SP-10) | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | KN-392 | I.D.: 0.28 mm, O.D.: 0.61 mm |
| Shaver | MARUKAN, LTD. | DC-381 | |
| Stereoscopic microscope | Olympus Corporation | SZ61 | |
| Needle 27G 1/2 in 13 mm | TERUMO CORPORATION | NN-2738R | |
| 1 mL syringe | TERUMO CORPORATION | SS-01T | |
| Syringe pump | Neuro science | NE-1000 | |
| Cellulose membrane | Toyo Roshi Kaisya, Ltd. | 00011090 | |
| Micro spatula | Shimizu Akira Inc. | 91-0088 | |
| Micropipette (0.5-10 uL) | Eppendorf AG | Z368083 | |
| Pipette chip | Eppendorf AG | 0030 000.811 | |
| Tape | TimeMed Labeling System, Inc. | T-534-R | For fixing mouse |
| [14C]-Inulin | American Radiolabeled Chemicals Inc. | ARC0124A | 0.1 mCi/mL |
| EtOH | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 054-00461 | |
| Liquid scintillation counter | Perkin Elmer Life and Analytical Sciences, Inc | Tri-Carb 4810TR |
References
- Sakane, T., Yamashita, S., Yata, N., Sezaki, H. Transnasal delivery of 5-fluorouracil to the brain in the rat. Journal of Drug Targeting. 7 (3), 233-240 (1999).
- Illum, L. Transport of drugs from the nasal cavity to the central nervous system. European Journal of Pharmaceutical Science. 11 (1), 1-18 (2000).
- Hanson, L. R., Frey, W. H. 2nd Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease. BMC Neuroscience. 9 (Suppl 3), S5 (2008).
- Chapman, C. D., et al. Intranasal treatment of central nervous system dysfunction in humans. Pharmaceutical Research. 30 (10), 2475-2484 (2012).
- Kanazawa, T. Development of non-invasive drug delivery system to the brain for brain diseases therapy. Yakugaku-Zasshi. 138 (4), 443-450 (2018).
- Kozlovskaya, L., Abou-Kaoud, M., Stepensky, D. Quantitative analysis of drug delivery to the brain via nasal route. Journal of Controlled Release. 189, 133-140 (2014).
- Hirai, S., Yashiki, T., Matsuzawa, T., Mima, H. Absorption of drugs from the nasal mucosa of rat. International Journal of Pharmaceutics. 7 (4), 317-325 (1981).
- Lochhead, J. J., Thorne, R. G. Intranasal delivery of biologics to the central nervous system. Advances in Drug Delivery Reviews. 64 (7), 614-628 (2011).
- Lalatsa, A., Schatzlein, A. G., Stepensky, D. Strategies to deliver peptide drugs to the brain. Molecular Pharmaceutics. 11 (4), 1081-1093 (2014).
- Kanazawa, T. Brain delivery of small interfering ribonucleic acid and drugs through intranasal administration with nano-sized polymer micelles. Medical Devices. 8, 57-64 (2015).
- Kanazawa, T., et al. Enhancement of nose-to-brain delivery of hydrophilic macromolecules with stearate- or polyethylene glycol-modified arginine-rich peptide. International Journal of Pharmacology. 530 (1-2), 195-200 (2017).
- Kamei, N., et al. Effect of an enhanced nose-to-brain delivery of insulin on mild and progressive memory loss in the senescence-accelerated mouse. Molecular Pharmaceutics. 14 (3), 916-927 (2017).
- Suzuki, T., Oshimi, M., Tomono, K., Hanano, M., Watanabe, J. Investigation of transport mechanism of pentazocine across the blood-brain barrier using the in situ rat brain perfusion technique. Journal of Pharmaceutical Science. 91 (11), 2346-2353 (2002).
