Summary
כאן, אנו מתארים שתי שיטות רומן מינהל תוך-אפי יציב בהרדמה אינהלציה עם לחץ פיזי חיות ניסוי. גם נתאר שיטת הערכה כמותית של סמים רמות הפצה במוח באמצעות מסלול האף-אל-מוח באמצעות radiolabeled14ג]-אינולין כמו מצע מודל של מקרומולקולות מסיסים במים.
Abstract
ניהול תוך-אפי דווח כדי להיות שביל פוטנציאליים עבור משלוח האף-אל-מוח של סוכני טיפולית העוקפות את מחסום הדם - מוח. עם זאת, היו כמה דיווחים בדבר לא רק ניתוח כמותי אלא גם תנאי ניהול אופטימלי של משטרי החקירות של משלוח האף-אל-מוח. התקדמות מוגבלת במחקר על מנגנונים מסלול האף-אל-מוח באמצעות מכרסמים מייצג של ליקוי משמעותי מבחינת תכנון מערכות אספקה האף-אל-מוח עבור תרופות.
כדי לקבל איזושהי התקדמות בהקשר זה, אנו פיתח, הערכה שתי שיטות רומן מינהל תוך-אפי יציב בהרדמה שאיפת חיות ניסוי. גם נתאר שיטת הערכת רמות הפצת סמים במוח דרך השביל האף-אל-מוח באמצעות התווית על-ידי רדיו [14ג]-אינולין (משקל מולקולרי: 5,000) כמו מצע מודל של מקרומולקולות מסיסים במים.
בתחילה, פיתחנו פרוטוקול ניהול תוך-אפי מבוסס פיפטה שימוש במסיכות באופן זמני openable, שאיפשר לנו לבצע ניהול אמין כלפי בעלי חיים תחת הרדמה יציב. באמצעות מערכת זו, [14ג]-אינולין היתה אפשרות להעביר את המוח עם שגיאה ניסוי קטן.
לאחר מכן פיתחנו פרוטוקול ניהול תוך-אפי פרוגרמה תעלות הפוכה מן הצד דרכי הנשימה דרך הוושט, אשר פותחה כדי למזער את ההשפעות של סיווג בשחרור ליחה (MC). טכניקה זו הובילה רמות גבוהות באופן משמעותי [14ג]-אינולין, אשר זוהה באופן כמותי הריח הנורה המוח הגדול, המוח המוארך, מאשר השיטה פיפטה. זה מופיע כי השמירה של הפתרון סמים בחלל האף היה גדל באופן משמעותי על ידי המינהל פעיל באמצעות מזרק משאבה בכיוון ההפוך המטאלקאמפ לתוך חלל האף.
לסיכום, שתי שיטות של ניהול תוך-אפי שפותחו במחקר זה צפוי להיות מאוד שימושי טכניקות להערכת פרמקוקינטיקה בחולדות. שיטת תעלות הפוכה, בפרט, עשוי להיות שימושי עבור הערכת הפוטנציאל המלא של האף-אל-מוח משלוח סמים מועמדים
Introduction
Biomedicines כמו פפטידים, oligonucleotides נוגדנים נחשבים יש פוטנציאל היישום בתור הרומן סוכני טיפולית להפרעות במערכת העצבים המרכזית עקשן שיש כיום אין טיפול מרפא. אולם, מאחר שרוב biomedicines הם מקרומולקולות מסיסים במים, משלוח מהדם למוח באמצעות ניהול תוך ורידי או אוראלי הוא קשה מאוד בשל התנגדות של מחסום הדם - מוח (BBB).
בשנים האחרונות, ניהול תוך-אפי דווח כדי להיות שביל פוטנציאליים עבור משלוח האף-אל-מוח של סוכני טיפולית אשר ימנע BBB1,2,3,4,5. עם זאת, היו דיווחים מעטים יחסית לגבי ניתוח כמותי של האף-אל-מוח מסלול משלוח6. יתר על כן, היו כמעט אין דיווחים על ניהול אופטימלי ויצר ותנאים משטרי מינון, כגון עוצמת, פעמים, פרקי זמן, מהירות, החקירות של משלוח האף-אל-מוח. הליקויים הנ ל יכול להיות מיוחסות מהסיבות הבאות: (i) אופטימלי שיטה מינהל תוך-אפי עבור עכברים טרם שתוקם, והוא הניהול תוך-אפי (ii) מאת pipetting, המשמש בדרך כלל, מאופיין בדרך כלל מאת וריאציה interindividual בקרב חיות עקב סיווג בשחרור ליחה (MC), ובכך לעיתים קרובות המוביל underestimations של הפוטנציאל משלוח האף-אל-מוח בפועל של תרופה מסוימת.
שאיפת הרדמה באמצעות איזופלוריין (חניכה: 4%, תחזוקה: 2%) עם שאיפה מסכת מכרסמים צבר השימוש הנרחב, עם המטרה של צמצום או ביטול הכאב הקשורים לניתוח מתבצע על חיות ניסוי. השימוש של מסיכות הופכת פשוטה יחסית לביצוע טיפוסי והתרופות האמריקני בחיות ניסוי בהרדמה שאיפה דרך המסלולים תת עורית, בקרום הבטן, תוך ורידי. עם זאת, במקרה של הממשל תוך-אפי, המסכה צריך יוסרו באופן זמני מן החיות עבור והתרופות האמריקני. עם תחזוקה מתחת לגיל 2% איזופלוריין, בעלי חיים בדרך כלל לעורר במהירות מן ההרדמה אינהלציה. כאשר אמצעי האחסון המינהל לכל במינון גדול, זה יכול לגרום הפתרון סמים יזרום חלל האף לתוך הוושט, ולכן מנה גדולה אחת יכול ויהיה צורך ניתן לפרק מינונים קטנים מרובים עבור ניהול תוך-אפי קטן בעלי חיים. ניהול תוך-אפי מחייבת הסרת המסכה לניהול חוזרות ולא מספיק זמן לאספקה מתמשכת חלל האף, יש הסתברות גבוהה המעוררים עכברים מן ההרדמה במהלך ההליך המינהל. זה מקשה מאוד לבצע ניהול תוך-אפי תחת הרדמה מדינה יציבה, כנראה תורמת וריאציית interindividual נצפתה האף-אל-מוח המסירה בין מכרסמים.
במחקר זה, לכן פיתחנו שתי שיטות רומן מינהל תוך-אפי יציב תחת הרדמה אינהלציה, אשר לכפות לחץ פיזי על החיות ניסיוני. עבור השיטה הראשונה, השתמשנו מסיכה זמנית openable המאפשרת ניהול תוך-אפי במהלך הרדמה אינהלציה. החלק openable של המסכה משלבת פקק סיליקון יכול לשמש על פי תזמון ניהול כדי להקל על הניהול תוך-אפי יציבה באמצעות פיפטה. השיטה השנייה, בצינורית הוכנס בניתוח לעבור מהוושט אל תוך חלל האף, מזרק משאבה היה אז מצורף לזה כך הפתרון סמים יכול ישירות ובאמינות להישלח אל תוך חלל האף תחת שאיפת יציב הרדמה. בשיטה זו ניתן לשפר את המסירה של תרופות למוח באמצעות תוואי האף-אל-מוח, כי על-ידי מזעור באופן משמעותי את ההשפעות של MC, יהיה משופר סמים retentively בחלל האף. בנוסף, אנו מתארים שיטה להערכת באופן כמותי את רמות הפצת סמים (% למוח במינון שהוחדר/g) במוח באמצעות התווית על-ידי רדיו [14ג]-אינולין [משקל מולקולרי (MW): 5,000] כמו מצע מודל של מסיסים במים מקרומולקולות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
מחקר בבעלי חיים (#AP17P004) בוצעה בהתאם להנחיות אושרה על ידי אכפת לי חיה אוניברסיטת ניהון שימוש הוועדה (בטוקיו, יפן). מחקר זה (#17-0001) אושרה על ידי מרכז הספר לרוקחות, האוניברסיטה ניהון Radioisotope.
1. בעלי החיים שבהם משתמשים עבור ניהול תוך-אפי בהרדמה אינהלציה
- בית העכברים ניסיוני בכלובים מפלדת תחת מחזור/כהה 12-h (אור-8:00-8:00 PM), עם טמפרטורה מבוקרת ומתוחזק על 23 ± 1° C, לחות של 50% ± 10%, ו- ad libitum גישה למזון ולמים.
- לפני ניסויים, עזים ומתנגד העכברים דרך שאיפה של 2% איזופלוריין, חניכה הבאים-ריכוז של 4%. לאשר את הרמה הנדרשת של ההרדמה על-ידי בדיקה היעלמותו של פני השטח בטעותו.
2. הכנת פתרון ניהול
- להכין פתרון ניהול [14ג]-אינולין (50 μM, 0.5 μCi/mL לכל עכבר) על ידי דילול בתוך תמיסת מלח באגירה פוספט, ולאחסן ב 4 ° C עד השימוש.
3. תוך-אפי הממשלים עבור עכברים
-
Micropipette השיטה באמצעות מסיכת אינהלציה באופן זמני openable (איור 1)
הערה: טכניקה זו הוא שינוי של פרוטוקול ניהול תוך-אפי באמצעות micropipette שהוקם על ידי פריי. et al. 3- לתקן עכברים במצב פרקדן על לקדמת על ידי מקליטה את איברי גופם בהרדמה אינהלציה עם 2% איזופלוריין (איור 1 א').
- לנהל הנפח הכולל של פתרון ניהול 25-μL את העכבר כל במרווחי זמן 30-s, דרך מנות 1-2 μL לחילופין מנוהל בנחיריו ימין ועל שמאל בעוד העכברים קבועים בהרדמה אינהלציה (איור 1B ו- C).
- הערה: פסולת הגז המרדים הוא לנקות באמצעים פעילים (מנדפים הוד, אבטחה קשה ducted הקבינט, ואקום, וכו ') כאשר נפתח את המסכה ואת האמצעים פסיבי (גז הרדמה פסולת cannister) סגור
-
הפוך תעלות m ethod מן הצד דרכי הנשימה דרך הוושט (איור 2)
הערה: טכניקה זו הוא שינוי של פרוטוקול קליטה תוך-אפי עבור חולדות שהוקם על ידי אני תולה. et al. 7- לתקן עכברים במצב פרקדן על לקדמת על ידי מקליטה את איברי גופם בהרדמה אינהלציה עם 2% איזופלוריין.
- שיער בצוואר מגולח, prepped באמצעות יישום betadine או chlorhexidine ולאחריה שטיפה אלכוהול.
- לחשוף את קנה הנשימה ואת הוושט על ידי הרחבת העור מתחת הגרון עם מלקחיים לאחר ביצוע חתך קטן (כ- 1.5 ס מ) עם מספריים.
- לעשות חתך (1 מ מ) לקנה באמצעות מספריים.
- הכנס בצינורית (קוטר פנימי: 0.58 מ"מ, קוטר חיצוני: מ מ 0.965) לאורך של 1.2 ס מ ולצרף בצד השני של הצינורית הפנימי של מסיכת אינהלציה.
- אעשה חתך (1 מ מ) הוושט באמצעות מספריים, להוסיף את הצינורית (קוטר פנימי: 0.28 מ מ, קוטר חיצוני: 0.61 מ"מ) לאורך של 1.4 ס מ לכיוון החלק האחורי של חלל האף, מאתרים ומפסיקים את זה (איור 2 א ו- B).
הערה: ההליכים 3.2.2 כדי 3.2.4 בוצעו תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי בהגדלה × 10. - לצרף מחט (27G × 1/2) מזרק 1-mL מלא פתרון ניהול וחבר לתכנות המיקרו-מזרק משאבה.
- להתחבר מעל המחט אל הצינורית זה היה מוכנס לתוך הוושט-3.2.5 (איור 2C).
- לנהל את הנפח הכולל של 25 μL [14ג]-פתרון אינולין בקצב קבוע (μL 5/דקה) (איור 2C ו- 2D).
4. כמותיים הניסוי באמצעות התווית על-ידי רדיו מקרומולקולות מסיסים במים ([14ג]-אינולין)
- לערוף העכברים ניסויית תחת הרדמה, לפתוח את אחת מגולוגולות שלהם, באמצעות מספריים מהצד של המוח המוארך, תוך דאגה שלא יגרמו נזק המוח.
- תמצית בקפידה את כל המוח על ידי חפנה באמצעות מיקרו-מרית של הגולגולת.
- המקום נייר סינון לחלח עם תמיסת מלח על צלחת פטרי המאוחסן על קרח.
- במקום שכל שחולצו על נייר הסינון בטעימת.
- לנגב את הדם הקפדה על פני השטח של המוח באמצעות מקלון צמר גפן לחלח עם תמיסת לחסל לפחות את השפעת [14ג]-אינולין בדם על פני השטח של המוח.
- לנתח את המוח במהירות, ולחלק אותם לשלושה חלקים: הריח הנורה המוח הגדול, המוח המוארך (כולל של פונס).
- מקום במוח דגימות רקמה solubilizer ב 50 מעלות לשעה.
- להוסיף 10 μL של קוקטייל גזים הדגימות המוח.
- העברה של aliquot 25 μL של הפתרון המינהל מומס נצנוץ בקוקטייל בקבוקון נצנוץ כדי לקבוע הרדיואקטיביות של הפתרון יישומית.
- למדוד את התפרקויות רדיואקטיביות דקה [14ג] המדגם המוח (X [14ג]המוח) והפתרון יישומית ([14ג] Xמנה ב) במונה נצנוץ נוזלי מצויד מתאים כבל מוצלב תיקון עבור 3H ו- 14ג.
5. ניתוח נתונים
- לחשב את הסמים הפצה רמות (%) עבור המנה מוזרק (מזהה %) באמצעות המשוואה הבאה:
מזהה % ⁄g המוח = (X [14ג]המוח/ [14ג] Xבמינון) × 100,
איפה Xבמוח (המוח dpm/g) הכמות [14ג] - אינולין נמדד רקמת המוח, Xב מנה (פתרון μL dpm/25) הוא הריכוז [14ג] - אינולין בפתרון לשימוש תוך-אפי המינהל.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איור 3 מראה את14ג]-אינולין רמות (מזהה % ⁄g המוח) הריח הנורה (א), המוח (B), לבין המוח המוארך (ג) שהושג באמצעות שני סוגים של המינהל תוך-אפי העריך במחקר הנוכחי. ניהול תוך-אפי באמצעות פיפטה מופעלת שיטת מסירת [14ג]-אינולין למוח באמצעות אינהלציה openable מסכות (איור 1). תחת הרדמה אינהלציה, תוצאות כמותיות חשף אין וריאציה interindividual ניסיוני בין החיות שנבדקו, כמצוין שגיאת התקן נמוכה. כאשר שיטת הניהול חלל האף הוושט הפוך בצינורית שימש לניהול [14ג] - אינולין בהרדמה אינהלציה (איור 2), רמות גבוהות באופן משמעותי [14ג] - אינולין נצפתה (הריח הנורה איור 3 א), המוח (איור 3B), לבין המוח המוארך (איור 3C), מאשר עם השיטה פיפטה. יתר על כן, בתוך המוח, גבוה יותר [14ג]-אינולין רמות אותרו את הריח הנורה ואת המוח המוארך, אשר בולט מעורבים בשביל האף-אל-מוח, מאשר המוח הגדול.
איור 1: ניהול תוך-אפי באמצעות micropipette בשיתוף עם מסיכת אינהלציה באופן זמני openable. צילומים מראה עכבר קבוע (א) עם מסכה סגור לפני ניהול, צילום מקרוב (ב) ונוף (C) כל המסכה שנפתחו בעת ניהול תוך-אפי באמצעות פיפטה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2: ניהול תוך-אפי על ידי תעלות הפוכה מן הצד דרכי הנשימה דרך הוושט באמצעות מזרק משאבה. צילומים מראה האזור הכירורגי (א), נופים מקרוב (ב) ו- (ג) כל ו- (ד) ערכה של עכבר קבוע לאחר שני סוגי בצינורית היתה כבר מוכנס לתוך הוושט וקנה הנשימה ומחובר מזרק מיקרו במסיכת אינהלציה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3: השוואה של [14ג]-רמות אינולין הריח הנורה (א), המוח (B), לבין המוח המוארך (ג) בעקבות שני סוגים של המינהל תוך-אפי. IN-A ו- B בלציין את שיטת micropipette (איור 1) ואת שיטת תעלות הפוכה (איור 2) עבור ניהול תוך-אפי, בהתאמה. באמצעות כל אחת מהשיטות, הנפח הכולל של μL 25 [14ג]-אינולין (50 μM, 0.5 μCi/mL) היה מנוהל. ניהול שיעור ב- B היה μL 5/min. כל עמודה מייצגת את זאת אומרת ± S.E. (n = 4). p < 0.01 (הסטודנט t-מבחן) אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
האף-אל-מוח מסירת תרופות צפויה להיות השפעה מובהקת על הפרעות במערכת העצבים המרכזית, כי מסלול זה מייצג את נתיב תחבורה ישירה עוקף BBB. שלושה מסלולים האף-אל-מוח שונים דווח תאריך8. הראשון הוא מסלול עצב הריח, אשר עובר מן רירית חוש הריח של רירית האף הקדמי דרך העצב הריח. השני הוא מסלול העצב, אשר מעביר של רירית מערכת הנשימה של רירית האף לגזע המוח ב hindbrain דרך העצב המשולש. השלישי הוא מסלול CSF, אשר מופץ ברחבי המוח דרך CSF. מסלול האף-אל-מוח משכה תשומת לב רבה ביחס הממשל של מקרומולקולות הידרופיליות, הנוטים באברך BBB, וכן כאמצעי להעברת biomedicines מערכת העצבים המרכזית8, 9 , 10 , 11 , 12. עם זאת, מספר מחקרים קודמים בבירור תיארו שיטות הניהול תוך-אפי לבעלי-חיים קטנים על מנת לוודא את המסירה של תרופות באמצעות מסלול האף-אל-מוח. בהתאם לכך, חלה התקדמות איטית מאוד במחקר הקשור מנגנוני מסירה האף-אל-מוח סמים באמצעות בעלי חיים קטנים, אשר מייצג של ליקוי משמעותי מבחינת תכנון מערכות אספקה האף-אל-מוח עבור תרופות. לפיכך, במחקר זה, פיתחנו פרוטוקולים שני עבור ניהול תוך-אפי בהרדמה אינהלציה כדי לחקור את חלוקת תרופות המועמד שונים, כגון biomedicines, שמכוונות מחלות מערכת העצבים המרכזית. אנחנו גם תיאר שיטה שבה ניתן להשתמש עבור הערכה כמותית.
לשיטת הניהול תוך-אפי מאת פיפטה שימוש במסיכות שאיפת באופן זמני openable שפותחו במחקר זה מאפשר לבצע ניהול אמין עם בעלי חיים במצב של הרדמה יציב ללא התעוררות, כמו המסיכות אינם חייבים ניתן להסיר (איור 1). בעזרת טכניקה זו, להדגים את המסירה של מקרומולקולה מסיסים במים (אינולין; MW: 5,000) במוח. כפי אינולין אינו לחדור BBB, זה יכול לשמש כסמן שטח אמצעי האחסון קרישה תוך-כלית (כ 10-15 μL/g. המוח) המוח של עכברוש13. השגנו כמותיים תוצאות מצוינות. עם שגיאה ניסוי קטן. הרמה של [14ג]-אינולין במוח היה גבוה יותר בבירור לאחר ניהול תוך-אפי יותר לאחר עירוי לוריד (נתונים לא מוצג). לפיכך, הקמנו כי טכניקה זו מייצג גישה מעשית לניהול תוך-אפי, המאפשרת ניהול המקובלת באמצעות פיפטה בעוד הנושאים להישאר תחת הרדמה אינהלציה (איור 2). שאיפת עשוי להשפיע על קרום אפיתל האף והרדמה, כתוצאה מכך, להגדיל את החדירות דרך האף האפיתל. מחקרים נוספים נדרשים כדי לאפיין משלוח המוח באמצעות השיטה תעלות הפוכה בהרדמה אינהלציה, לעומת הרדמה קונבנציונלי כגון ניהול בקרום הבטן.
אנחנו לאחר מכן חקר באמצעות תעלות הפוכה מן הצד דרכי הנשימה דרך הוושט, אשר פותחה כדי למזער את ההשפעות של MC. בחולדות, השיטה של תולה מחייבת ניתוח לסגירת הוושט ולאחר מכן כדי לנהל מהכניסה את האף כדי לצמצם את ההשפעה MC. בעכברים, זה פיזית קשה לבצע תעלות מהכניסה של האף, ניהול תוך-אפי עלול לגרום התעטשות. השיטה שלנו תעלות הפוכה מקשר את הצינורית ישירות מוכנס לתוך חלל האף של הוושט אל מיקרו-מזרק משאבה, אשר יש את היתרון שניתן לסגור את הוושט ואת דרכי הנשימה על ידי ניתוח ולבצע בו זמנית תוך-אפי ניהול. ההתאמה של המשאבה מיקרו-מזרק מקלה על ניהול באמצעות המחירים מינון מדויק ואמצעי אחסון. בעזרת טכניקה זו, הקלטנו את רמות גבוהות באופן משמעותי של מקרומולקולות הידרופילית מנוהלת הריח הנורה, המוח הגדול, המוח המוארך של עכברים מאשר בעת שימוש בשיטת פיפטה (איור 3). זה נראה כי עם המינהל תוך-אפי באמצעות פיפטה של, הפתרון הוא מנוהל באופן. פסיבי בהתאם נשימה ספונטנית, כך הפתרון נוטה להיות מסולקים לכיוון קנה הנשימה והושט מאת MC. לעומת זאת, עם ניהול לתוך חלל האף דרך הצינורית הפוכה הוושט, הפתרון מנוהל באופן פעיל באמצעות מזרק משאבה לתוך חלל האף. נראה כי גישה זו מגביר באופן משמעותי השמירה של הפתרון סמים בחלל האף, המוביל אל רמות גבוהות יותר התפלגות במוח. יתר על כן, גילינו רמות גבוהות יותר של הפתרון המנוהל הריח הנורה, המוח המוארך, אשר בולט מעורבים בשביל האף-אל-מוח, מאשר המוח הגדול. בהתאם לכך, להדגים כי המינהל אל תוך חלל האף דרך הצינורית הפוכה הוושט היא שיטה מעשית להערכת הפוטנציאל המלא של מסירת האף-אל-מוח סמים מועמדים.
לסיכום, שתי שיטות של ניהול תוך-אפי שפיתחנו במחקר זה צפוי להיות מאוד שימושי טכניקות להערכת פרמקוקינטיקה של חיות קטנות דרך השביל האף-אל-מוח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
מחקר זה נתמך בחלקה על ידי פרטיים אוניברסיטת מחקר מיתוג הפרויקט MEXT; מענק הסיוע עבור מדעי Research (C) (17 K 08249 [אל טי-קיי, ט. ס]) מן האגודה יפן לקידום המדע (JSPS); מענק למחקר קואופרטיב של הקרן אוסאצ'י לקידום של ביוכימיה [ל ט. ס], קרן המדע טקדה [אל טי-קיי]. אנו מודים מר הוא נקרא יויה ניטו, גב' אסאמי אקיקו על סיוע טכני חשוב שלהם בביצוע הניסויים.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ddY mouse | Japan SLC, Inc. | Male, 4-6 weeks, 20-30 g | |
| Isoflurane | Pfizer | v002139 | |
| Isoflurane setup | SHINANO manufacturing CO. LTD. | SN-487-OTAir, SN-489-4 | |
| Isoflurane mask | SHINANO manufacturing CO. LTD. | For small rodents | |
| Isoflurane mask (openable type) | SHINANO manufacturing CO. LTD. | Special orders | |
| Anesthesia Box | SHINANO manufacturing CO. LTD. | SN-487-85-02 | |
| Animal experiments scissors-1 | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | B-27H | |
| Animal experiments scissors-2 | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | B-13H | |
| Tweezers-1 | FINE SCIENCE TOOLS Inc. | 11272-30 | Dumont #7 Dumoxel |
| Tweezers-2 | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | A-12-1 | |
| Cannula tube (PE-50) | Becton, Dickinson and Company. | 5069773 | I.D.: 0.58 mm, O.D.: 0.965 mm |
| Cannula tube (SP-10) | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | KN-392 | I.D.: 0.28 mm, O.D.: 0.61 mm |
| Shaver | MARUKAN, LTD. | DC-381 | |
| Stereoscopic microscope | Olympus Corporation | SZ61 | |
| Needle 27G 1/2 in 13 mm | TERUMO CORPORATION | NN-2738R | |
| 1 mL syringe | TERUMO CORPORATION | SS-01T | |
| Syringe pump | Neuro science | NE-1000 | |
| Cellulose membrane | Toyo Roshi Kaisya, Ltd. | 00011090 | |
| Micro spatula | Shimizu Akira Inc. | 91-0088 | |
| Micropipette (0.5-10 uL) | Eppendorf AG | Z368083 | |
| Pipette chip | Eppendorf AG | 0030 000.811 | |
| Tape | TimeMed Labeling System, Inc. | T-534-R | For fixing mouse |
| [14C]-Inulin | American Radiolabeled Chemicals Inc. | ARC0124A | 0.1 mCi/mL |
| EtOH | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 054-00461 | |
| Liquid scintillation counter | Perkin Elmer Life and Analytical Sciences, Inc | Tri-Carb 4810TR |
References
- Sakane, T., Yamashita, S., Yata, N., Sezaki, H. Transnasal delivery of 5-fluorouracil to the brain in the rat. Journal of Drug Targeting. 7 (3), 233-240 (1999).
- Illum, L. Transport of drugs from the nasal cavity to the central nervous system. European Journal of Pharmaceutical Science. 11 (1), 1-18 (2000).
- Hanson, L. R., Frey, W. H. 2nd Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease. BMC Neuroscience. 9 (Suppl 3), S5 (2008).
- Chapman, C. D., et al. Intranasal treatment of central nervous system dysfunction in humans. Pharmaceutical Research. 30 (10), 2475-2484 (2012).
- Kanazawa, T. Development of non-invasive drug delivery system to the brain for brain diseases therapy. Yakugaku-Zasshi. 138 (4), 443-450 (2018).
- Kozlovskaya, L., Abou-Kaoud, M., Stepensky, D. Quantitative analysis of drug delivery to the brain via nasal route. Journal of Controlled Release. 189, 133-140 (2014).
- Hirai, S., Yashiki, T., Matsuzawa, T., Mima, H. Absorption of drugs from the nasal mucosa of rat. International Journal of Pharmaceutics. 7 (4), 317-325 (1981).
- Lochhead, J. J., Thorne, R. G. Intranasal delivery of biologics to the central nervous system. Advances in Drug Delivery Reviews. 64 (7), 614-628 (2011).
- Lalatsa, A., Schatzlein, A. G., Stepensky, D. Strategies to deliver peptide drugs to the brain. Molecular Pharmaceutics. 11 (4), 1081-1093 (2014).
- Kanazawa, T. Brain delivery of small interfering ribonucleic acid and drugs through intranasal administration with nano-sized polymer micelles. Medical Devices. 8, 57-64 (2015).
- Kanazawa, T., et al. Enhancement of nose-to-brain delivery of hydrophilic macromolecules with stearate- or polyethylene glycol-modified arginine-rich peptide. International Journal of Pharmacology. 530 (1-2), 195-200 (2017).
- Kamei, N., et al. Effect of an enhanced nose-to-brain delivery of insulin on mild and progressive memory loss in the senescence-accelerated mouse. Molecular Pharmaceutics. 14 (3), 916-927 (2017).
- Suzuki, T., Oshimi, M., Tomono, K., Hanano, M., Watanabe, J. Investigation of transport mechanism of pentazocine across the blood-brain barrier using the in situ rat brain perfusion technique. Journal of Pharmaceutical Science. 91 (11), 2346-2353 (2002).
