Summary
Her beskriver vi to nye metoder til stabil intranasal administration under inhalation anæstesi med minimal fysisk stress for forsøgsdyr. Vi også beskrive en metode til kvantitativ evaluering af narkotika distribution niveauer i hjernen via næse-til-hjerne vej ved hjælp af radiolabeled [14C]-inulinsirup som model substrat af vandopløselige makromolekyler.
Abstract
Intranasal administration er blevet rapporteret til at være en potentiel vej for næse til hjernen levering af terapeutiske agenter, der omgår blod - hjerne barrieren. Der har dog været nogle rapporter vedrørende ikke kun den kvantitative analyse, men også optimal administration betingelser og dosering regimer for undersøgelser af næse-til-hjerne levering. Den begrænsede fremskridt inden for forskning i næse-til-hjerne vej mekanismer ved hjælp af gnavere udgør en betydelig hindring for designe næse til hjernen levering systemer for kandidat narkotika.
For at opnå nogle fremskridt i denne henseende, vi udviklet og evalueret to nye metoder til stabil intranasal administration under inhalation anæstesi af forsøgsdyr. Vi også beskrive en metode til evaluering af narkotika distribution niveauer i hjernen via næse-til-hjerne vej ved hjælp af radio-mærket [14C]-inulinsirup (molekylvægt: 5.000) som model substrat af vandopløselige makromolekyler.
I første omgang, udviklede vi en pipette-baseret intranasal administration protokol bruger midlertidigt oplukkelige masker, som gjorde det muligt at udføre pålidelige administration til dyr under stabile anæstesi. Ved hjælp af dette system, [14C]-inulinsirup kunne leveres til hjernen med lille eksperimentel fejl.
Efterfølgende udviklede vi en intranasal administration protokollen indebærer omvendt cannulation fra luftvejene side gennem spiserøret, som blev udviklet til at minimere virkningerne af mucociliary clearance (MC). Denne teknik førte til et betydeligt højere niveau af [14C]-inulin, som kvantitativt blev fundet i de olfaktoriske pære, cerebrum og medulla oblongata, end metoden pipette. Dette synes at være fordi fastholdelse af drug opløsning i næsehulen blev væsentligt forøget ved aktivt administration ved hjælp af en sprøjte pumpe i en retning modsat MC ind i næsehulen.
Til sidst, kan de to metoder til intranasal administration udviklet i denne undersøgelse forventes at være yderst nyttige teknikker til evaluering af farmakokinetik hos gnavere. Metoden reverse cannulation i særdeleshed kunne være nyttigt for at vurdere den fulde potentiale af næse-til-hjerne levering af lægemiddelkandidater.
Introduction
Biomedicin som peptider, oligonukleotider og antistoffer er anset for at have potentiel anvendelse som nye terapeutiske agenter for ildfaste centralnervesystemet lidelser, der i øjeblikket har ingen helbredende behandling. Men fordi de fleste biomedicin er vandopløselige makromolekyler, levering fra blodet ind i hjernen via mundtlig eller intravenøs administration er meget vanskelig på grund af impedans af blod - hjerne barrieren (BBB).
I de seneste år, er intranasal administration blevet rapporteret til at være en potentiel vej for næse til hjernen levering af terapeutiske agenter, der undgår BBB1,2,3,4,5. Der har dog været relativt få rapporter om kvantitativ analyse af næse-til-hjerne vej levering6. Derudover har der været næsten ingen rapporter om etableret optimal administration betingelser og dosering regimer, såsom volumen, gange tid-perioder, og hastighed, for undersøgelser af næse-til-hjerne levering. De ovennævnte mangler kan tilskrives af følgende grunde: (i) en optimal metode til intranasal administration af mus har endnu at blive etableret, og (ii) intranasal administration af pipettering, der anvendes generelt, er typisk karakteriseret af interindividual variation blandt dyr på grund af mucociliary clearance (MC), hvilket ofte fører til underestimations af den faktiske næse til hjernen levering potentiale af et bestemt lægemiddel.
Inhalation anæstesi ved hjælp af isofluran (indledning: 4%, vedligeholdelse: 2%) med en indånding maske for gnavere har fået udbredt anvendelse, med formålet at mindske eller fjerne smerter forbundet med kirurgi udføres på forsøgsdyr. Brug af masker gør det relativt let at udføre typiske drug administration i forsøgsdyr under inhalation anæstesi via de subkutane, intraperitoneal, og intravenøs ruter. Men i tilfælde af intranasal administration, masken skal fjernes midlertidigt fra dyr for drug administration. Med vedligeholdelse under 2% isofluran, dyr typisk vække hurtigt fra inhalation anæstesi. Når administration volumen per dosis er stort, det kunne forårsage drug løsning til at flyde fra næsehulen ind i spiserøret, og derfor en enkelt stor dosis kan være nødvendigt at være opdelt i flere mindre doser for intranasal administration til små dyr. Som intranasal administration nødvendiggør maske fjernelse for gentagen administration og tilstrækkelig tid til vedvarende næsehulen levering, er der en høj sandsynlighed for, at mus ville vække fra anæstesi under administrationsproceduren. Dette gør det meget vanskeligt at udføre intranasal administration under en stabil bedøvelsesmiddel stat, og bidrager formentlig til den observerede interindividual variation af næse-til-hjerne levering blandt gnavere.
I denne undersøgelse udviklede vi derfor to nye metoder til stabil intranasal administration under inhalation anæstesi, som pålægger minimal fysisk stress på de eksperimentelle dyr. For den første metode brugte vi et midlertidigt oplukkelige maske, der giver mulighed for intranasal administration under inhalation anæstesi. Den oplukkelige del af masken inkorporerer en silikone stik, der kan anvendes ifølge administration timing for at lette stabil intranasal administration ved hjælp af en pipette. For den anden metode, en kanyle er kirurgisk indsat for at passere fra spiserøret til næsehulen, og en sprøjten pumpe blev derefter fastgjort til dette således at stoffet løsning kunne direkte og pålideligt leveret ind i næsehulen under stabile indånding anæstesi. Denne metode kan forbedre leveringen af narkotika ind i hjernen via ruten næse til hjernen, fordi ved at væsentligt minimere virkningerne af MC, ville blive forbedret, drug retentively i næsehulen. Hertil kommer, vi beskriver en metode til kvantitativ evaluering narkotika distribution niveauer (% for injiceres dosis/g hjernen) i hjernen ved hjælp af radio-mærket [14C]-inulinsirup [molekylvægt (MW): 5.000] som model substrat af vandopløselige makromolekyler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dette dyr undersøgelse (#AP17P004) blev udført i overensstemmelse med de retningslinjer, der er godkendt af Nihon Universitet Animal Care og brug Udvalget (Tokyo, Japan). Denne undersøgelse (#17-0001) blev godkendt af byens radioisotop skole apotek, Nihon Universitet.
1. dyr, der anvendes til Intranasal Administration Under Inhalation anæstesi
- Hus de eksperimentelle mus i rustfrit stål bure under en 12-h lys/mørke cyklus (lys på 8:00 AM-8:00 PM), med en kontrolleret temperatur holdes på 23 ± 1° C, luftfugtighed på 50 ± 10%, og ad libitum adgang til mad og vand.
- Før eksperimenter, bedøver mus via inhalation af 2% isofluran, følgende indledning ved en koncentration på 4%. Bekræfte det nødvendige niveau af anesthetization ved at kontrollere for forsvinden af overflade oprettende.
2. fremstilling af Administration
- Forberede en administration løsning af [14C]-inulinsirup (50 μM, 0.5 μCi/mL pr. mus) ved fortynding i fosfatbufferet saltopløsning, og opbevares ved 4 ° C indtil brug.
3. intranasal administrationer for mus
-
Mikropipette metode ved hjælp af et midlertidigt oplukkelige indånding maske (figur 1)
Bemærk: Denne teknik er en ændring af intranasal administration protokollen ved hjælp af en mikropipette etableret af Frey et al. 3- Fix mus i den liggende stilling på en opslagstavle ved at tape deres lemmer under inhalation anæstesi med 2% isofluran (figur 1A).
- Administrere en samlet maengde paa 25 μL administration løsning til hver mus med 30-s intervaller, via 1-2 μl doser alternativt til de venstre og højre næsebor mens musene er fast under inhalation anæstesi (figur 1B og C).
- Bemærk: Affald bedøvende gas er scavenged af aktive midler (fume hood, hårdt aftræk biosikkerhed kabinet, vakuum, etc.), når masken er åbnet og af passive midler (affald bedøvende gas dunk) når lukket
-
Vende cannulation m ethod fra luftvejene side gennem spiserøret (figur 2)
Bemærk: Denne teknik er en ændring af intranasal absorption protokollen for rotter etableret af Hirai et al. 7- Fix mus i den liggende stilling på en opslagstavle ved at tape deres lemmer under inhalation anæstesi med 2% isofluran.
- Hår i nakken er barberet og prepped via betadine eller chlorhexidin ansøgning efterfulgt af en alkohol skyl.
- Udsætte luftrøret og spiserøret ved at udvide hud under halsen med pincet efter at gøre en lille snit (1,5 cm) med en saks.
- Gøre et snit (1 mm) i luftrøret ved hjælp af saks.
- Indsæt en kanyle (indvendig diameter: 0.58 mm, ydre diameter: 0.965 mm) til en længde på 1,2 cm og vedhæfte den modsatte ende af kanylen på indersiden af indånding maske.
- Gøre et snit (1 mm) i spiserøret ved hjælp af saks, indsætte en kanyle (indvendig diameter: 0,28 mm, ydre diameter: 0,61 mm) til en længde på 1,4 cm mod den bageste del af næsehulen, og ligate det (figur 2A og B).
Bemærk: Procedurer 3.2.2 til 3.2.4 blev udført under en stereoskopisk mikroskop på × 10 forstørrelse. - Tillægger en 1 mL sprøjte fyldt med en administration løsning en nål (27G × 1/2) og oprette forbindelse til en programmerbar mikro-sprøjten pumpe.
- Tilslut ovenfor nål til kanylen, der havde indsat i spiserøret på 3.2.5 (figur 2 c).
- Administrere en samlet maengde paa 25 μL [14C]-inulinsirup løsning med en konstant hastighed (5 μl/min) (figur 2 c og 2D).
4. kvantitative eksperiment ved hjælp af Radio-mærket vandopløselige makromolekyler ([14C]-inulinsirup)
- Hug hovedet af de eksperimentelle mus under anæstesi og åbne op deres craniums, ved hjælp af saks og fra siden af medulla oblongata, mens pas på ikke at beskadige hjerner.
- Uddrag omhyggeligt hele hjernen af øse ved hjælp af en mikro-spatel fra baghovedet.
- Sted et filtrerpapir fugtet med saltvand løsning på en petriskål, som er gemt på is.
- Placer de udpakkede hjerner på den fugtede filtrerpapir.
- Aftørre blod vedhængende til overfladen af hjernen med en vatpind fugtet med saltvand løsning at fjerne mindst indflydelse af [14C]-inulinsirup i blodet på overfladen af hjernen.
- Dissekere hjerner hurtigt, og opdele dem i tre dele: de olfaktoriske pære, cerebrum og medulla oblongata (herunder pons).
- Læg hjernen prøver i væv opløsende stof ved 50 ° C i 1 time.
- Tilføje 10 μl af den flydende scintillation cocktail til hjernen prøver.
- Overføre en 25 μL alikvot af administration løsning opløst i scintillation cocktail til en scintillation hætteglas til at bestemme radioaktivitet af den anvendte løsning.
- Måler disintegrations pr. minut af [14C] radioaktivitet i brain prøven ([14C] Xhjernen) og den anvendte løsning ([14C] XIN dosis) i et flydende scintillation counter udstyret med et passende crossover korrektion for 3H og 14C.
5. dataanalyse
- Beregne de narkotika distribution niveauer (%) for den injicerede dosis (ID %) ved hjælp af følgende ligning:
ID % ⁄g hjerne = ([14C] Xhjerne/ [14C] Xi dosis) × 100,
hvor Xhjernen (dpm/g hjernen) er mængden af [14C] - inulinsirup målt i hjernevæv og XIN dosis (dpm/25 μL løsning) er koncentrationen af [14C] - inulinsirup i opløsningen anvendes til intranasal administration.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 3 viser [14C]-inulinsirup niveauer (ID % ⁄g hjerne) i de olfaktoriske pære (A), cerebrum (B) og medulla oblongata (C) fremstillet ved hjælp af de to typer af intranasal administration vurderet i den foreliggende undersøgelse. Intranasal administration ved hjælp af pipetten metode aktiveret levering af [14C]-inulinsirup ind i hjernen, ved hjælp af oplukkelige indånding masker (figur 1). Under inhalation anæstesi viste de kvantitative resultater ingen eksperimentelle interindividual variation blandt de undersøgte dyr, som anført af lav standard fejl. Når metoden esophageal omvendt kanyle næsehulen administration blev brugt til at administrere [14C] - inulinsirup under inhalation anæstesi (figur 2), markant højere niveauer af [14C] - inulinsirup blev observeret hos olfaktoriske pære ( Figur 3A), cerebrum (figur 3B) og medulla oblongata (fig. 3 c), end med metoden pipette. Desuden, i hjernen, højere [14C]-inulinsirup niveauer blev opdaget i de olfaktoriske pære og medulla oblongata, der tydeligt er involveret i næse-til-hjerne vej, end i cerebrum.
Figur 1: Intranasal administration ved hjælp af en mikropipette sammenholdt med et midlertidigt oplukkelige indånding maske. Fotografier, der viser et fast mus (A) med en lukket maske før administration, og (B) close-up og (C) hele udsigt over åbnede masken under intranasal administration ved hjælp af en pipette. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Intranasal administration af reverse cannulation fra luftvejene side gennem spiserøret ved hjælp af en sprøjte pumpe. Fotografier, der viser (A) kirurgisk område, (B) close-up og (C) hele visninger og (D) ordningen fast musen efter to typer af kanylen var blevet indsat i spiserør og luftrør og tilsluttet en mikro-sprøjte i en indånding maske. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Sammenligning af [14C]-inulinsirup niveauer i de olfaktoriske pære (A), cerebrum (B) og medulla oblongata (C) efter to typer af intranasal administration. IN-A- og IN-B angiver mikropipette metode (figur 1) og reverse cannulation metode (figur 2) for intranasal administration, henholdsvis. Ved hjælp af hver metode, en samlet maengde paa 25 μL af [14C]-inulinsirup (50 μM, 0.5 μCi/mL) blev administreret. Administration var af IN-B 5 μl/min. Hver kolonne repræsenterer den gennemsnit ± S.E. (n = 4). p < 0,01 (Student's t-test) venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Næse-til-hjerne leveringen af narkotika forventes at have en udtalt effekt på centralnervesystemet lidelser, fordi denne sti repræsenterer en direkte transport-rute, der omgår BBB. Tre forskellige næse-til-hjerne veje er blevet rapporteret til dato8. Først er den lugtenerven pathway, der passerer fra det olfaktoriske slimhinde i næseslimhinden til forebrain via lugtenerven. Andet er trigeminusnerven pathway, der passerer fra den respiratoriske slimhinden i næseslimhinden til hjernestammen i baghjernen via trigeminusnerven. Tredje er CSF pathway, som er fordelt i hele hjernen via EFSR'EN. Næse-til-hjerne vej har tiltrukket stor opmærksomhed med hensyn til administrationen af hydrofile makromolekyler, som har tendens til at blive hæmmet af BBB, og som et middel til at levere biomedicin til centralnervesystemet8, 9 , 10 , 11 , 12. dog få tidligere undersøgelser har klart beskrevet metoder af intranasal administration for små dyr for at kontrollere leveringen af kandidat narkotika via næse-til-hjerne vej. Derfor er der meget langsomme fremskridt i forskning relateret til næse-til-hjerne stof leveringsmekanismer ved hjælp af små dyr, som repræsenterer en betydelig hindring for designe næse til hjernen levering systemer for kandidat narkotika. Derfor, i denne undersøgelse, har vi udviklet to protokoller for intranasal administration under inhalation anæstesi til at undersøge fordelingen af forskellige kandidat lægemidler, såsom biomedicin, der er målrettet centrale nervesystem sygdomme. Vi er også beskrevet en metode, der kan bruges til kvantitativ evaluering.
Intranasal indgiftsvej med pipette bruger midlertidigt oplukkelige indånding masker udviklet i denne undersøgelse gør det muligt at udføre pålidelige administration med dyr i en tilstand af stabil anæstesi uden opvågnen, da maskerne ikke behøver at blive fjernet (figur 1). Ved hjælp af denne teknik, påvist vi, levering af et vandopløseligt makromolekyle (inulinsirup; MW: 5.000) til hjernen. Som inulin ikke trænge ind BBB, kan det bruges som markør af intravaskulære diskenhedsplads (ca 10-15 μl/g hjernen) i rotte hjernen13. Vi opnåede gode kvantitative resultater med lille eksperimentel fejl. Niveau af [14C]-inulinsirup i hjernen var klart højere efter intranasal administration end efter intravenøs administration (data ikke vist). Derfor oprettede vi, at denne teknik repræsenterer en bæredygtig tilgang til intranasal administration, der gør det muligt for konventionelle administration ved hjælp af en pipette, mens emnerne, der forbliver under inhalation anæstesi (figur 2). Inhalation anæstesi kan påvirke den nasale epitelial membran og følgelig øge permeabiliteten gennem den nasale epitel. Yderligere undersøgelser er nødvendige til at karakterisere hjernen levering ved hjælp af metoden reverse cannulation under inhalation anæstesi, sammenlignet med konventionelle anæstesi såsom intraperitoneal administration.
Vi undersøgte efterfølgende administration via reverse cannulation fra luftvejene side gennem spiserøret, som blev udviklet til at minimere virkningerne af MC. Hos rotter, Hirais metode kræver operation for at lukke spiserøret og derefter administrere fra indgangen til næsen at minimere MC effekt. I mus, det er fysisk vanskeligt at udføre cannulation fra indgangen til næsen og intranasal administration kan forårsage nysen. Vores omvendte cannulation metode forbinder kanylen direkte indsat i næsehulen fra spiserøret til en mikro-sprøjten pumpe, som har den fordel, at det er muligt at lukke spiserøret og luftvejene ved operation og samtidigt udføre intranasal administration. Justering af mikro-sprøjten pumpe letter administration ved hjælp af præcis dosering priser og mængder. Brug af denne teknik, indspillede vi betydeligt højere niveauer af de administrerede hydrofile makromolekyler i lugtekolben, cerebrum og medulla oblongata af mus end når du bruger metoden pipette (figur 3). Dette synes at være fordi med intranasal administration ved hjælp af en pipette, løsningen er passivt forvaltes efter spontan respiration, sådan at løsningen har tendens til at være elimineret mod luftrøret og spiserøret MC. Derimod med administration i næsehulen gennem en esophageal omvendt kanyle administreres løsningen aktivt ved hjælp af en sprøjte pumpe ind i næsehulen. Det ser ud til at denne tilgang betydeligt øger opbevaring af narkotika løsning i næsehulen, fører til en højere distribution niveauer i hjernen. Desuden registreret vi højere niveauer af den administrerede løsning i de olfaktoriske pære og medulla oblongata, der tydeligt er involveret i næse-til-hjerne vej, end i cerebrum. Derfor, vi viste, at administration i næsehulen gennem en esophageal omvendt kanyle er en levedygtig metode for at vurdere den fulde potentiale af næse-til-hjerne levering af lægemiddelkandidater.
Til sidst, kan de to metoder til intranasal administration, som vi udviklede i denne undersøgelse forventes at være yderst nyttige teknikker til evaluering af farmakokinetik i små dyr via næse-til-hjerne vej.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Denne undersøgelse var delvist understøttet af den Private University Research Branding projekt fra MEXT; en licensbetaling for videnskabelige Research (C) (17 K 08249 [til T.K. og T.S.]) fra Japan-samfund til fremme af videnskab (JSP'ER); et tilskud til kooperativ forskning fra Hamaguchi Foundation for avancement biokemi [til T.S.] og Takeda Science Foundation [til T.K.]. Vi takker Mr. Yuya Nito og Ms. Akiko Asami for deres værdifulde teknisk bistand i forbindelse med forsøgene.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ddY mouse | Japan SLC, Inc. | Male, 4-6 weeks, 20-30 g | |
| Isoflurane | Pfizer | v002139 | |
| Isoflurane setup | SHINANO manufacturing CO. LTD. | SN-487-OTAir, SN-489-4 | |
| Isoflurane mask | SHINANO manufacturing CO. LTD. | For small rodents | |
| Isoflurane mask (openable type) | SHINANO manufacturing CO. LTD. | Special orders | |
| Anesthesia Box | SHINANO manufacturing CO. LTD. | SN-487-85-02 | |
| Animal experiments scissors-1 | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | B-27H | |
| Animal experiments scissors-2 | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | B-13H | |
| Tweezers-1 | FINE SCIENCE TOOLS Inc. | 11272-30 | Dumont #7 Dumoxel |
| Tweezers-2 | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | A-12-1 | |
| Cannula tube (PE-50) | Becton, Dickinson and Company. | 5069773 | I.D.: 0.58 mm, O.D.: 0.965 mm |
| Cannula tube (SP-10) | NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD. | KN-392 | I.D.: 0.28 mm, O.D.: 0.61 mm |
| Shaver | MARUKAN, LTD. | DC-381 | |
| Stereoscopic microscope | Olympus Corporation | SZ61 | |
| Needle 27G 1/2 in 13 mm | TERUMO CORPORATION | NN-2738R | |
| 1 mL syringe | TERUMO CORPORATION | SS-01T | |
| Syringe pump | Neuro science | NE-1000 | |
| Cellulose membrane | Toyo Roshi Kaisya, Ltd. | 00011090 | |
| Micro spatula | Shimizu Akira Inc. | 91-0088 | |
| Micropipette (0.5-10 uL) | Eppendorf AG | Z368083 | |
| Pipette chip | Eppendorf AG | 0030 000.811 | |
| Tape | TimeMed Labeling System, Inc. | T-534-R | For fixing mouse |
| [14C]-Inulin | American Radiolabeled Chemicals Inc. | ARC0124A | 0.1 mCi/mL |
| EtOH | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 054-00461 | |
| Liquid scintillation counter | Perkin Elmer Life and Analytical Sciences, Inc | Tri-Carb 4810TR |
References
- Sakane, T., Yamashita, S., Yata, N., Sezaki, H. Transnasal delivery of 5-fluorouracil to the brain in the rat. Journal of Drug Targeting. 7 (3), 233-240 (1999).
- Illum, L. Transport of drugs from the nasal cavity to the central nervous system. European Journal of Pharmaceutical Science. 11 (1), 1-18 (2000).
- Hanson, L. R., Frey, W. H. 2nd Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease. BMC Neuroscience. 9 (Suppl 3), S5 (2008).
- Chapman, C. D., et al. Intranasal treatment of central nervous system dysfunction in humans. Pharmaceutical Research. 30 (10), 2475-2484 (2012).
- Kanazawa, T. Development of non-invasive drug delivery system to the brain for brain diseases therapy. Yakugaku-Zasshi. 138 (4), 443-450 (2018).
- Kozlovskaya, L., Abou-Kaoud, M., Stepensky, D. Quantitative analysis of drug delivery to the brain via nasal route. Journal of Controlled Release. 189, 133-140 (2014).
- Hirai, S., Yashiki, T., Matsuzawa, T., Mima, H. Absorption of drugs from the nasal mucosa of rat. International Journal of Pharmaceutics. 7 (4), 317-325 (1981).
- Lochhead, J. J., Thorne, R. G. Intranasal delivery of biologics to the central nervous system. Advances in Drug Delivery Reviews. 64 (7), 614-628 (2011).
- Lalatsa, A., Schatzlein, A. G., Stepensky, D. Strategies to deliver peptide drugs to the brain. Molecular Pharmaceutics. 11 (4), 1081-1093 (2014).
- Kanazawa, T. Brain delivery of small interfering ribonucleic acid and drugs through intranasal administration with nano-sized polymer micelles. Medical Devices. 8, 57-64 (2015).
- Kanazawa, T., et al. Enhancement of nose-to-brain delivery of hydrophilic macromolecules with stearate- or polyethylene glycol-modified arginine-rich peptide. International Journal of Pharmacology. 530 (1-2), 195-200 (2017).
- Kamei, N., et al. Effect of an enhanced nose-to-brain delivery of insulin on mild and progressive memory loss in the senescence-accelerated mouse. Molecular Pharmaceutics. 14 (3), 916-927 (2017).
- Suzuki, T., Oshimi, M., Tomono, K., Hanano, M., Watanabe, J. Investigation of transport mechanism of pentazocine across the blood-brain barrier using the in situ rat brain perfusion technique. Journal of Pharmaceutical Science. 91 (11), 2346-2353 (2002).
