Summary
Vi præsenterer her, en protokol for at forbedre forbigående hjertefunktion i Duchenne muskeldystrofi mus ved omplantning exosomes stammer fra normal myogenic stamceller.
Abstract
Duchene muskeldystrofi (DMD) er en X-linked recessive genetisk sygdom forårsaget af en mangel på funktionelle dystrofin protein. Sygdommen kan ikke helbredes, og som sygdommen skrider frem patienten udvikler symptomer på forstørrede kardiomyopati, arytmi og kongestiv hjerteinsufficiens. DMDMDX mutant-mus udtrykke ikke dystrofin, og er almindeligt anvendt som en musemodel af DMD. I vores undersøgelse for nylig, konstaterede vi, at intramyocardial injektion af bred type (WT)-myogenic Stamform celler-afledte exosomes (MPC-Exo) forbigående restaureret udtryk af dystrofin i myokardiet af DMDMDX mutant-mus, der var forbundet med en forbigående forbedring i hjertefunktion tyder på, at kan WT-MPC-Exo give en mulighed for at lindre de kardiale symptomer af DMD. Denne artikel beskriver teknik af MPC-Exo rensning og transplantation i hjerter af DMDMDX mutant mus.
Introduction
Duchenne muskeldystrofi (DMD) er en X-linked recessive, progressive neuromuskulær sygdom forårsaget af en mutation i DMD-genet og tabet af funktionelle dystrofin1. Dystrofin udtrykkes primært i skeletmuskulatur og myokardiet og er mindre udtrykt i glatte muskelceller, endokrine kirtler og neuroner2,3. DMD er den mest almindelige form for muskeldystrofi med en forekomst af en pr. 3.500 til 5.000 nyfødte drenge verden over4,5. Personer typisk udvikle progressiv muskel nekrose, tab af uafhængige walking af tidlig pubertet, og død i de anden til tredje årtier af deres liv på grund af hjertesvigt og respirationssvigt6.
Forstørrede kardiomyopati, arytmier og kongestiv hjerteinsufficiens er fælles hjerte-kar-manifestationer af DMD7,8. Sygdommen kan ikke helbredes, støttende behandling kan forbedre symptomer eller forsinke progression af hjertesvigt, men det er meget vanskeligt at forbedre hjerte funktion9,10.
Svarende til DMD patienter, X-linked muskeldystrofi (MDX) mus er mangelfuld i dystrophin protein og nuværende symptomer på kardiomyopati11, og er derfor meget udbredt i DMD forbundet kardiomyopati forskning. For at gendanne dystrofin i sygdomsramte muskler, allogen stamcelleterapi har vist sig for at være en effektiv behandling af DMD12,13,14. Exosomes, 30-150 nm membran vesikler udskilles af forskellige celletyper, spiller en central rolle i celle-til-celle kommunikation gennem genetisk materiale transport, såsom messenger RNA (mRNA) og ikke-kodende RNA'er15,16,17 ,18,19,20,21.
Vores tidligere undersøgelser har vist, at exosomes stammer fra myogenic stamceller (MPC), såsom C2C12 cellelinie, kan overføre dystrofin mRNA til værten cardiomyocytes efter direkte hjertets indsprøjtning22, der angiver at allogene levering af MPC-afledte exosomes (MPC-Exo) kan forbigående gendanne DMD genekspression i MDX-mus. Denne artikel fokuserer på MPC-Exo rensning og transplantation teknikker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyrene blev håndteret henhold til godkendte protokoller og dyrevelfærd forordninger af institutionelle Animal Care og brug Udvalget af Medical College of Georgia Augusta Universitet.
1. isolering og oprensning af MPC-afledte Exosomes
- Frø 5 x 106 C2C12 celler i en 15 cm celle kultur fad med 20 mL komplet Dulbecco ændrede Eagle's medium (DMEM) som indeholder 10% føtal bovint serum (FBS), 100 U/mL penicillin G og 100 μg/mL streptomycin. Der inkuberes ved 37 ° C og 5% CO2.
- Forberede exosome-forarmet medium af ultracentrifugering af FBS på 100.000 x g til 18 h ved 4 ° C ved hjælp af en swingende spand rotor. Kassér pelleten.
- Erstatte den komplette DMEM med exosome-forarmet medium, når éncellelag celler nå 80% sammenløbet i kultur parabol.
- Brug overførsel pipette til at indsamle supernatanten fra celle kultur parabol hver 48 h i alt tre gange. Indsamle supernatanten i 50 mL centrifugeglas, og der centrifugeres ved 150 x g i 10 min. til at fjerne de resterende celler.
- Filtrer supernatanten gennem et 0,22 μm filter til at fjerne celle debris. Ultracentrifuge den filtrerede medium i Ultraklart rør ved hjælp af swingende spand rotoren på 100.000 x g for 120 min. ved 4 ° C for at udfælde exosomes.
- Resuspenderes exosome-holdige i fosfatbufferet saltopløsning (PBS) og fylde hele Ultraklart røret med PBS. Udføre ultracentrifugering af denne suspension på 100.000 x g for 120 min. ved 4 ° C til at fjerne forurenende proteiner.
- Supernatanten og exosome resuspenderes i 100 µL PBS. Opbevares ved-80 ° C til fremtidig brug.
- Elektronmikroskopi analyse, at placere 3 µL af exosomal suspension på en 200 mesh formvar-belagt kobber elektronmikroskop gitter til 5 min ved stuetemperatur. Fortsæt med standard uranyl acetat farvning23. Undersøge den semi-tør gitter af transmissions Elektron Mikroskopi.
2. Intramyocardial Exosome levering
Bemærk: Vi brugte seks mus i hver gruppe.
- Bedøver DBA/2J-DMDMDX mus (mand, alder > 10 måneder, kropsvægt (BW) > 18 g) med intraperitoneal (i.p.) injektion af 100 mg/kg BW af ketamin kombineret med 10 mg/kg BW for xylazin, og bekræft dybde af anæstesi ved tå knivspids.
- Løse hver mus i liggende stilling på en kirurgisk platform ved hjælp af tape til at sikre hver lemmer og placere en 3-0 sutur vandret under de øverste tænder til at holde overkæben sted.
- Anvende depilatory cremen på venstre side af musen brystet til at fjerne skind fra huden.
- Udføre endotracheal intubation via mundhulen med en 24 G kateter, og ventilere mus med værelse luft med en hastighed på 195 vejrtrækninger/min ved hjælp af en gnaver ventilator (Se Tabel af materialer).
- Desinficer huden med 75% alkohol og 10% povidon jod.
- Gøre en 10\u201215 mm skrå snit fra venstre brystbenet kanten til venstre armhule, skære pectoralis større og pectoralis mindre af en saks, så gør en venstre torakotomi gennem den fjerde interkostale rum. Isæt forsigtigt retractor bands til at sprede brysthulen til bredde 10 mm. Sørge for at undgå at beskadige den venstre lunge.
- Bruge to lige pincet til at fjerne at hjertesækken, trække dem fra hinanden, og placere dem bag retractor tips til at udsætte hjertet. Injicere MPC-Exo (50 μg i 30 µL PBS) eller 30 μL PBS (som kontrol) intramyocardially i den forreste væg af venstre ventrikel ved hjælp af en 31 G insulin nål på én lokation.
- Brug 6-0 nylon sutur for at lukke brysthulen, pectoralis muskler og hud i rækkefølge.
- Genskab mus. Når rytmisk, spontan vejrtrækning er til stede, skal du fjerne mus fra ventilator og extubate. Observere og registrere mus tilstand efter operationen.
3. ekkokardiografi
Bemærk: En enkelt observatør blindet til de eksperimentelle grupper udfører ekkokardiografi og data analyse.
- To dage efter PBS/exosome transplantation, bedøver mus med 1\u20122% isofluran.
- Lave en mus i liggende stilling ved hjælp af tape, og anvende den forvarmet akustiske gel på området venstre bryst.
-
Vurdere venstre ventrikel funktion ved ekkokardiografi som tidligere beskrevet16,24.
- Opnå den parasternal længdeakse opfattelse af venstre ventrikel (LV) i to dimensioner (B-mode), og derefter roterer ultralydssonde 90° for at opnå en LV kort-axis visning på papillær muskel plan.
- Optage M-mode ekkokardiografisk billeder og foranstaltning venstre ventrikel ende-diastolisk diameter (LVEDD), venstre ventrikel ende-systolisk volumen (LVESD), venstre ventrikel ende-diastoliske volumen (LVEDV) og venstre ventrikel ende-systolisk volumen (LVESV).
Bemærk: Fraktioneret afkortning (FS %) = [(LVEDD − LVESD) / LVEDD] x 100 og venstre ventrikel uddrivningsfraktion (LVEF %) = [(LVEDV − LVESV) / LVEDV] x 100.
4. Immunohistokemi
- To dage efter PBS/exosome transplantation, bedøver mus (Se trin 2.1) og skar brystbenet at eksponere brysthulen. Dissekere den ringere vena cava, og perfuse hjerte gennem den venstre ventrikel apex med 3 mL PBS, efterfulgt af 3 mL 4% PARAFORMALDEHYD ved stuetemperatur, ved hjælp af en sommerfugl kateter med en 25 G kanyle tilknyttes en 5 mL sprøjte.
- Integrere fast hjerter i paraffin, og skæres i 5 μm tykt sektioner.
- Deparaffinize dias i xylen og rehydrere i ethanol løsninger i følgende rækkefølge: 100% xylen (3 min), 100% xylen (3 min), 100% ethanol (1 min), 100% ethanol (1 min), 95% ethanol (1 min), 80% ethanol (1 min), H2O (1 min).
- Fix væv sektioner med 4% PARAFORMALDEHYD for 8 min ved stuetemperatur.
- Fordyb dias i natrium citrat (0,01 M, pH 6.0) og udføre antigen genfinding ved hjælp af et antigen retriever.
- Permeabilize sektioner i 1 time ved stuetemperatur med 1% polyethylen glycol tert-octylphenyl ether i PBS.
- Blokere sektioner med 5% ged serum i PBS i 1 time ved stuetemperatur.
- Inkuber sektioner med fortyndet primære antistof (anti-dystrofin antistof) i PBS (1: 100) natten over ved 4 ° C, så vaskes tre gange med PBS i 5 min.
- Inkuber sektioner med fortyndet sekundær antistof (Alexa Fluor 488 konjugeret gede anti-kanin IgG) i PBS (1: 400) for 45 min ved stuetemperatur.
- Kontrol autofluorescence ved hjælp af en autofluorescence dæmper kit (Se Tabel af materialer).
- Brug montering medium indeholdende DAPI (Se Tabel af materialer) til at montere dias.
- Observere dias under en Konfokal mikroskop.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Et flowdiagram til isolering og rensende exosomes fra C2C12 celler er vist i figur 1A. For at bekræfte tilstedeværelsen af exosomes, udførte vi transmissions Elektron Mikroskopi analyse. Transmissions Elektron Mikroskopi billede (figur 1B) viser morfologi af lyse og runde form vesikler i C2C12 stammer exosomes. Western blot analyse bekræftet tilstedeværelsen af exosome markører, herunder CD63 og TSG101 (figur 1C).
Vi observerede en gennemskinnelig ødem område efter intramyocardial PBS/MPC-Exo injektion i den forreste væg af venstre hjertekammer af MDX-mus (figur 2), der angiver den succesfulde injektion i myokardiet.
For at bestemme, om hjertets MPC-Exo levering gendanner dystrofin protein udtryk i MDX-hjerter, vi udførte immunfluorescent farvning for dystrofin, og imaging med en Konfokal mikroskop. Vi observerede delvis restaurering af dystrofin udtryk med membran lokalisering i nogle af cardiomyocytes (fig. 3A). For at afgøre, om transplantation af MPC-Exo forbedrer hjertefunktion i MDX-mus, vi målte hjertefunktion ved ekkokardiografi 2 dage efter intramyocardial PBS / MPC-Exo levering. Som vist i figur 3B, forbedret MPC-Exo behandling forreste væg bevægelse sammenlignet med PBS, tyder på, at MPC-Exo transplantation forbedret hjertefunktion i MDX-mus.
Figur 1 : Exosome oprensning og karakterisering ved elektronmikroskopi. (A) i diagram viser hvert trin af isolering og oprensning af MPC-Exo. (B) billedet viser rundt og skålformet vesikler under Elektron Mikroskopi. Skalalinjen = 100 nm. (C) Western blot analyse bekræftet tilstedeværelsen af exosome markører CD63 og TSG101. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Intramyocardial injektion af PBS eller MPC-Exo. En gennemskinnelig ødem blev observeret i den venstre ventrikulære forreste væg efter intramyocardial PBS/exosome levering. (A) PBS injektion. (B) MPC-Exo injektion. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Intramyocardial levering af MPC-Exo delvist genopretter dystrofin udtryk i MDX-hjerter, og forbedrer hjertefunktion målt ved ekkokardiografi. (A) Confocal immunfluorescent farvning afsnittene hjertet af MDX-mus 2 dage efter intramyocardial PBS / MPC-Exo levering. Blå = DAPI, grøn = anti-dystrofin antistof. (B) ekkokardiografisk måling af hjertets funktion efter 2 dage af PBS/MPC-Exo behandling. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Metode til at isolere ren exosomes er afgørende for at studere funktionen af exosomes. En af de almindelige teknikker til exosome isolation er polyethylen glykoler (pinde) medieret nedbør17,18,25. Exosomes kan være i en pløkkerne, og pelleted ved lav hastighed centrifugering. PIND-medieret rensning er meget praktisk, billigt, behøver det ikke nogen avanceret udstyr, men der er bekymring om renheden af exosomes, da andre lipoprotein kan udfældes sammen og er vanskelige at fjerne. Ultrafiltrering er en rutinemetode til exosome adskillelse, baseret på Molekylær vægt og udstødelse størrelse grænser26. Ultrafiltrering isolation er hurtigere end ultracentrifugering baseret adskillelse, men det kan medføre strukturelle skader til store vesikler. Tilstedeværelsen af forskellige epitoper på membranen af exosomes, såsom CD9, CD63 og CD8127, giver en alternativ metode til at isolere exosomes ved immunoaffinity interaktioner mellem disse epitoper og antistoffer bundet til magnetiske perler. Selv om immunoisolation har en høj specificitet28, denne teknik har ulemper ved kun isolere et undersæt af befolkningens samlede exosome og fordreje resultaterne af forsøget. Derfor synes ultracentrifugering at være mere egnet til denne undersøgelse på exosome funktion.
I dette papir præsenterer vi en metode til exosomes rensning af sekventielle ultracentrifugering. Efter fjernelse af de resterende celler fra supernatanten ved centrifugering ved 150 x g, celle debris, apoptotiske organer og vesikler større end 220 nm blev fjernet ved at passere supernatanten gennem et 0,22 μm filter. Exosomes blev derefter pelleted på 100.000 x g ved indledende ultracentrifugering. For at fjerne mulige protein forurening, udført vi en anden 100.000 x g ultracentrifugering efter resuspending exosome pellet i PBS. Ifølge vores erfaring, fordelen ved sekventiel ultracentrifugering er produktionen af exosomes med høj renhed og omkostningseffektivitet, men det har ulempe ved lavt udbytte.
For at tillade den injicerede exosomes til at dække de fleste af venstre hjertekammer og undgå lækage, udførte vi en intramyocardial indsprøjtning ved hjælp af en 31 G insulin nål med spidsen bøjet ved ca 20 °. Denne teknik er kritiske for den succesrige levering af de fleste exosomes i myokardiet og maksimerer eksponering af injicerede exosomes host cardiomyocytes. Derudover anbefaler vi indsprøjte exosomes i den centrale region af den forreste væg af venstre ventrikel. Efter injektionen er færdig, holder vi normalt nålen på injektionsstedet i 1 min. at forhindre væske lækage. Vellykket injektioner blev bekræftet ved tilstedeværelsen af en gennemskinnelig ødem omkring injektionsstedet.
I vores undersøgelse fandt vi at allogene MPC-Exo transplantation forbigående kan gendanne dystrofin udtryk i hjertet og forbedrer hjertefunktion i MDX-mus22, som kan give nye strategier for symptom relief i DMD patienter. Da vi observerede gendannede dystrofin protein udtryk i MDX-mus hjerter, antager vi, at dette er mekanisme for forbedret hjertefunktion, men vi kan ikke udelukke andre mekanismer, såsom anti-inflammation; en nylig rapport viste at mesenkymale stamceller-afledt exosomes forbedre mikromiljø af infarcted myokardiet bidrager til angiogenese og anti-inflammation29, desuden, Aminzadeh et al.30 for nylig rapporteret, at cardiosphere-afledte celler (CDCs) og deres exosomes kunne forbigående gendanne udtryk for fuld længde dystrofin i DMD mus. I betragtning af at DMD er en systemisk sygdom, der involverer flere organer, er lokale Myokardie levering af exosome ikke egnet til behandling af respiratorisk svigt på grund af mellemgulvet myopathy. Således systemisk administration af exosomes, såsom intravenøs injektion, har terapeutiske potentiale, men den store udfordring er at udvikle en effektiv strategi til at målrette exosomes til flere muskelvæv. Endnu vigtigere, har exosome behandling kun et forbigående effekt på delvist genskabe dystrofin udtryk, og forbedre hjertefunktion. Mere effektive, langsigtede DMD behandling er nødvendig.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle forfatterne erklærer, at de har ingen interessekonflikter.
Acknowledgments
Tang blev delvist støttet af American Heart Association: GRNT31430008, NIH-AR070029, NIH-HL086555, NIH-HL134354.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.22 μm Filter | Fisherbrand | 09-720-004 | |
| 15 cm Cell Culture Dish | Thermo Fisher Scientific | 157150 | |
| 24 G catheter | TERUMO | SR-OX2419CA | |
| 31 G insulin needle | BD | 328291 | |
| 4% paraformaldehyde | Affymetrix | AAJ19943K2 | |
| 50 mL Centrifuge Tubes | Thermo Fisher Scientific | 339652 | |
| 6-0 suture | Pro Advantage by NDC | P420697 | |
| Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG | Thermo Fisher Scientific | A-11008 | |
| Antibiotic Antimycotic Solution | Corning | 30-004-CI | |
| Anti-Dystrophin antibody | Abcam | ab15277 | |
| Antigen retriever | Aptum Biologics | R2100-US | Antigen recovery |
| Autofluorescence Quenching Kit | Vector Laboratories | SP-8400 | |
| C2C12 cell line | ATCC | CRL-1772 | |
| Centrifuge | Unico | C8606 | |
| Change-A-Tip High Temp Cauteries | Bovie Medical Corporation | HIT | |
| Confocal microscopy | Zeiss | Zeiss 780 Upright Confocal | |
| DBA/2J-mdx mice | The Jackson Laboratory | 013141 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CM | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Corning | 35-011-CV | |
| Goat serum | MP Biomedicals, LLC | 191356 | |
| Isoflurane | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Mounting Medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Mouse Retractor Set | Kent Scientific | SURGI-5001 | |
| Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether | Fisher Scientific | BP151-100 | |
| Rodent ventilator | Harvard Apparatus | 55-7066 | |
| SW-28 Ti rotor | Beckman | 342207 | |
| The Vevo 2100 Imaging Platform | FUJIFILM VisualSonics | Vevo 2100 | Ultrasound System |
| Ultracentrifuge | Beckman | 365672 | |
| Ultra-Clear Tubes | Beckman | 344058 | |
| Xylazine (XylaMed) | Bimeda-MTC Animal Health Inc. | 1XYL003 8XYL006 |
References
- Yiu, E. M., Kornberg, A. J. Duchenne muscular dystrophy. Journal of Paediatrics and Child Health. 51 (8), 759-764 (2015).
- Nudel, U., et al. Duchenne muscular dystrophy gene product is not identical in muscle and brain. Nature. 337 (6202), 76-78 (1989).
- Rae, M. G., O'Malley, D. Cognitive dysfunction in Duchenne muscular dystrophy: a possible role for neuromodulatory immune molecules. Journal of Neurophysiology. 116 (3), 1304-1315 (2016).
- Mah, J. K., et al. A systematic review and meta-analysis on the epidemiology of Duchenne and Becker muscular dystrophy. Neuromuscular Disorders. 24 (6), 482-491 (2014).
- D'Amario, D., et al. A current approach to heart failure in Duchenne muscular dystrophy. Heart. 103 (22), 1770-1779 (2017).
- Koeks, Z., et al. Clinical Outcomes in Duchenne Muscular Dystrophy: A Study of 5345 Patients from the TREAT-NMD DMD Global Database. Journal of Neuromuscular Diseases. 4 (4), 293-306 (2017).
- Kamdar, F., Garry, D. J. Dystrophin-Deficient Cardiomyopathy. Journal of the American College of Cardiology. 67 (21), 2533-2546 (2016).
- Wang, Z., et al. Regenerative Therapy for Cardiomyopathies. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Fayssoil, A., Nardi, O., Orlikowski, D., Annane, D. Cardiomyopathy in Duchenne muscular dystrophy: pathogenesis and therapeutics. Heart Failure Reviews. 15 (1), 103-107 (2010).
- Hagan, M., Ashraf, M., Kim, I. M., Weintraub, N. L., Tang, Y. Effective regeneration of dystrophic muscle using autologous iPSC-derived progenitors with CRISPR-Cas9 mediated precise correction. Medical Hypotheses. 110, 97-100 (2018).
- Quinlan, J. G., et al. Evolution of the mdx mouse cardiomyopathy: physiological and morphological findings. Neuromuscular Disorders. 14 (8-9), 491-496 (2004).
- Siemionow, M., et al. Creation of Dystrophin Expressing Chimeric Cells of Myoblast Origin as a Novel Stem Cell Based Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reviews and Reports. 14 (2), 189-199 (2018).
- Sienkiewicz, D., Kulak, W., Okurowska-Zawada, B., Paszko-Patej, G., Kawnik, K. Duchenne muscular dystrophy: current cell therapies. Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 8 (4), 166-177 (2015).
- Zhang, Y., et al. Long-term engraftment of myogenic progenitors from adipose-derived stem cells and muscle regeneration in dystrophic mice. Human Molecular Genetics. 24 (21), 6029-6040 (2015).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes for Angiogenesis. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 429-437 (2018).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Promotes Repair in Ischemic Myocardium. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 420-428 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Suxiao Jiuxin pill promotes exosome secretion from mouse cardiac mesenchymal stem cells in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 569-578 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Exosomes from Suxiao Jiuxin pill-treated cardiac mesenchymal stem cells decrease H3K27 demethylase UTX expression in mouse cardiomyocytes in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 579-586 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Fan, G. C., Duan, D. D. Extracellular vesicles as novel biomarkers and pharmaceutic targets of diseases. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 499-500 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Long, W., Zhang, C. Stem Cell-Released Microvesicles and Exosomes as Novel Biomarkers and Treatments of Diseases. Stem Cells International. 2016, 2417268 (2016).
- Murphy, C., et al. Emerging role of extracellular vesicles in musculoskeletal diseases. Molecular Aspects of Medicine. 60, 123-128 (2018).
- Su, X., et al. Exosome-Derived Dystrophin from Allograft Myogenic Progenitors Improves Cardiac Function in Duchenne Muscular Dystrophic Mice. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Hu, G., et al. Exosome-mediated shuttling of microRNA-29 regulates HIV Tat and morphine-mediated neuronal dysfunction. Cell Death & Disease. 3, 381 (2012).
- Bayoumi, A. S., et al. A carvedilol-responsive microRNA, miR-125b-5p protects the heart from acute myocardial infarction by repressing pro-apoptotic bak1 and klf13 in cardiomyocytes. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 114, 72-82 (2018).
- Wang, Y., et al. Exosomes/microvesicles from induced pluripotent stem cells deliver cardioprotective miRNAs and prevent cardiomyocyte apoptosis in the ischemic myocardium. International Journal of Cardiology. 192, 61-69 (2015).
- Cheruvanky, A., et al. Rapid isolation of urinary exosomal biomarkers using a nanomembrane ultrafiltration concentrator. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (5), 1657-1661 (2007).
- Oksvold, M. P., Neurauter, A., Pedersen, K. W. Magnetic bead-based isolation of exosomes. Methods in Molecular Biology. 1218, 465-481 (2015).
- Pedersen, K. W., Kierulf, B., Neurauter, A. Specific and Generic Isolation of Extracellular Vesicles with Magnetic Beads. Methods in Molecular Biology. 1660, 65-87 (2017).
- Teng, X., et al. Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Improve the Microenvironment of Infarcted Myocardium Contributing to Angiogenesis and Anti-Inflammation. Cellular Physiology and Biochemistry. 37 (6), 2415-2424 (2015).
- Aminzadeh, M. A., et al. Exosome-Mediated Benefits of Cell Therapy in Mouse and Human Models of Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reports. 10 (3), 942-955 (2018).
