Summary
Här presenterar vi ett protokoll för att förbättra normalnivå hjärtfunktion hos Duchennes muskeldystrofi möss genom omplantering exosomes härrör från normala myogenic stamceller.
Abstract
Duchene muskeldystrofi (DMD) är en X-bunden recessiv genetisk sjukdom orsakas av en brist på funktionella dystrofin protein. Sjukdomen kan inte botas, och eftersom sjukdomen fortskrider, patienten utvecklar symtom av dilaterad kardiomyopati, arytmi och hjärtsvikt. DMDMDX muterade mössen uttrycker inte dystrofin, och används ofta som en musmodell av DMD. I vår senaste studie, vi konstaterade att intramyocardial injektion av brett typ (WT)-myogenic progenitor celler-derived exosomes (MPC-Exo) övergående återställd uttrycket av dystrofin i myokardiet av DMDMDX muterade möss, som förknippades med övergående förbättring av hjärtfunktionen tyder på att föreskriva WT-MPC-Exo en möjlighet att lindra hjärt symptomen av DMD. Denna artikel beskriver tekniken av MPC-Exo rening och transplantation in i hjärtan av DMDMDX muterade möss.
Introduction
Duchennes muskeldystrofi (DMD) är en X-bunden recessiv, progressiv neuromuskulär sjukdom orsakas av en mutation i genen DMD och förlusten av funktionella dystrofin1. Dystrofin uttrycks framförallt skelettmuskulatur och hjärtmuskeln och uttrycks mindre i glatt muskulatur, endokrina körtlar och nervceller2,3. DMD är den vanligaste typen av muskeldystrofi med en incidens av en per 3 500 till 5.000 nyfödda pojkar världen över4,5. Individer utvecklar vanligen progressiva muskel nekros, förlust av oberoende walking av tidiga tonåren, och död i andra till tredje årtionden av sina liv på grund av hjärtsvikt och andningssvikt6.
Dilaterad kardiomyopati, arytmier och hjärtsvikt är vanligt hjärt-manifestationer av DMD7,8. Sjukdomen kan inte botas, understödjande behandling kan förbättra symtom eller fördröja utvecklingen av hjärtsvikt, men det är mycket svårt att förbättra hjärtat funktion9,10.
Liknar DMD patienter, X-länkade muskeldystrofi (MDX) möss är bristfällig i dystrofin protein och nuvarande symtom på kardiomyopati11, och används därför ofta i DMD associerade kardiomyopati forskning. För att återställa dystrofin i drabbade muskler, har allogen stamcellsterapi visat sig vara en effektiv behandling för DMD12,13,14. Exosomes, 30-150 nm membranet blåsor utsöndras av olika celltyper, spela en nyckelroll i cell-till-cell kommunikation genom genetiska materialtransport, såsom budbärar-RNA (mRNA) och icke-kodande RNAs15,16,17 ,18,19,20,21.
Våra tidigare studier har visat att exosomes härstammar från myogenic stamceller (MPC), såsom C2C12 cellinje, kan överföra dystrofin mRNA till värd hjärtmuskelcellerna efter hjärt direktinsprutning22, vilket indikerar att allogen leverans av MPC-derived exosomes (MPC-Exo) kan övergående återställa DMD genuttryck i MDX-möss. Denna artikel fokuserar på MPC-Exo rening och transplantation tekniker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djur har hanterats enligt godkända protokoll och djurskyddsbestämmelserna institutionella djur vård och användning kommittén av den Medical College of Georgia Augusta universitet.
1. isolering och rening av MPC-derived Exosomes
- Utsäde 5 x 106 C2C12 celler i en 15 cm cell kultur skålen med 20 mL komplett Dulbecco's modified örnens medium (DMEM) innehållande 10% fetalt bovint serum (FBS), 100 U/mL penicillin G och 100 μg/mL streptomycin. Inkubera vid 37 ° C och 5% CO2.
- Förbered exosome-utarmat medium genom ultracentrifugering av FBS vid 100 000 x g under 18 timmar vid 4 ° C med en svängig hink rotor. Kassera pelleten.
- Ersätta den komplett DMEM med exosome-utarmat medium när enskiktslager celler nå 80% sammanflödet i kultur skålen.
- Använda en överföring pipett för att samla supernatanten från cell kultur maträtt varje 48 h för sammanlagt tre gånger. Samla in supernatanten i 50 mL centrifugrör och centrifugera vid 150 x g i 10 min att ta bort återstående cellerna.
- Filtrera supernatanten genom ett 0,22 μm filter eliminera cellfragment. Ultracentrifugen filtrerade mediet i ultra klart rör med svängande hink rotorn vid 100 000 x g under 120 minuter vid 4 ° C till fällningen exosomes.
- Återsuspendera pelleten exosome-innehållande i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) och fyll hela Ultra klart röret med PBS. Utföra ultracentrifugering denna suspension 100 000 x g för 120 minuter vid 4 ° C att eliminera kontaminerande proteiner.
- Avlägsna supernatanten och återsuspendera pelleten exosome i 100 µL PBS. Förvaras vid-80 ° C för framtida bruk.
- För elektronmikroskopi analys, placera 3 µL exosomal suspension på en 200 nätrastret formvar-belagd koppar elektronmikroskop för 5 min i rumstemperatur. Fortsätt med standard uranyl acetat färgning23. Undersöka rutnätet halvtorr transmissionselektronmikroskopi.
2. Intramyocardial Exosome leverans
Obs: Vi använde sex möss i varje grupp.
- Söva DBA/2J-DMDMDX möss (hane, > 10 månaders ålder, kroppsvikt (BW) > 18 g) med intraperitoneal (IP) injektion av 100 mg/kg Kroppsvikt av Ketamin i kombination med 10 mg/kg Kroppsvikt av xylazin, och bekräfta djup anestesi genom tå nypa.
- Fixa varje mus i ryggläge på en kirurgisk plattform med tejp för att säkra varje lem och placera en 3-0 sutur horisontellt nedanför övre tänderna att hålla övre käken på plats.
- Hårborttagningsprodukter krämen på vänster sida av bröstet för mus att ta bort päls från huden.
- Utföra endotrakeal intubation via munhålan med hjälp av en 24 G kateter och ventilera musen med rumsluft med en hastighet av 195 andetag/min med en gnagare ventilator (se Tabell för material).
- Desinficera huden med 75% alkohol och 10% povidon jod.
- Gör en 10\u201215 mm sneda snitt från sternala vänsterkanten till vänstra armhålan, skär pectoralis stora och pectoralis mindre av en sax och sedan göra en vänster torakotomi genom den fjärde interkostalrummet. Försiktigt in banden upprullare för att sprida brösthålan till en bredd på 10 mm. Var noga med för att undvika skador på den vänstra lungan.
- Använda två raka pincett för att ta bort hjärtsäck, dra dem isär, och placera dem bakom upprullningsdon tips att exponera hjärtat. Injicera MPC-Exo (50 μg i 30 µL PBS) eller 30 μL PBS (som kontroll) intramyocardially i främre väggen av vänster kammare med en 31 G insulin nål på en plats.
- Använd 6-0 nylon suturer för att stänga brösthålan, pectoralis muskler och hud i sekvens.
- Återställa möss. När rytmiska, spontan andning är närvarande, ta bort mössen från ventilatorn och extubate. Observera och registrera villkoret möss efter operation.
3. ekokardiografi
Obs: En enda observatör förblindade att de experimentella grupperna utför ekokardiografi och dataanalys.
- Två dagar efter PBS/exosome transplantation, söva möss med 1\u20122% isofluran.
- Fixa en mus i ryggläge med tejp, och applicera förvärmd akustiska gelen på vänstra bröstet.
-
Bedöma vänsterkammarfunktionen med ekokardiografi som tidigare beskrivits16,24.
- Erhålla vyn parasternal långa axeln av vänster kammare (LV) i två dimensioner (B-läge), och sedan rotera ultraljud sonden 90° för att få en LV kort-axis syn på papillär muskel nivå.
- Spela in M-läge ekokardiografiska bilder och mått vänster ventrikulära slutet-diastoliskt diameter (LVEDD), vänster ventrikulära slutet-systoliskt volym (LVESD), vänster ventrikulära slutet-diastoliska volymen (LVEDV) och vänster ventrikulära slutet-systoliskt volym (LVESV).
Obs: Fraktionerad förkortning (FS %) = [(LVEDD − LVESD) / LVEDD] x 100 och ejektionsfraktion (LVEF %) = [(LVEDV − LVESV) / LVEDV] x 100.
4. immunohistokemi
- Två dagar efter PBS/exosome transplantation, söva möss (se steg 2.1) och uppskuren bröstbenet att exponera brösthålan. Dissekera den sämre vena cava och BEGJUTA hjärtat genom den vänstra ventrikeln apexen med 3 mL PBS, följt av 3 mL 4% paraformaldehyd vid rumstemperatur, med en fjäril kateter med en 25 G injektionsnål till en 5 mL spruta.
- Bädda in fast hjärtan i paraffin, och skär i 5 μm tjocka sektioner.
- Deparaffinize bilder i xylen och rehydrera i etanol lösningar i följande ordning: 100% xylen (3 min), 100% xylen (3 min), 100% etanol (1 min), 100% etanol (1 min), 95% etanol (1 min), 80% etanol (1 min), H2O (1 min).
- Fixa vävnadssnitt med 4% paraformaldehyd i 8 min i rumstemperatur.
- Fördjupa diabilder i natriumcitrat (0,01 M, pH 6,0) och utföra antigen hämtning med hjälp av ett antigen retriever.
- Permeabilize avsnitt för 1 h i rumstemperatur med 1% polyetylenglykol tert-octylphenyl eter i PBS.
- Blockera sektioner med 5% get serum i PBS för 1 h i rumstemperatur.
- Inkubera sektioner med utspädda primär antikropp (anti-dystrofin antikropp) i PBS (1: 100) under natten vid 4 ° C och sedan tvätta tre gånger med PBS för 5 min.
- Inkubera sektioner med utspädda sekundär antikropp (Alexa Fluor 488 konjugerat get anti-kanin IgG) i PBS (1: 400) för 45 min i rumstemperatur.
- Kontroll autofluorescens användande en autofluorescens Snabbkylning kit (se Tabell för material).
- Användning monteringsmedium innehållande DAPI (se Tabell för material) för att montera bilder.
- Se bilder under en confocal Mikroskop.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ett flödesschema för isolera och renande exosomes från C2C12 celler visas i figur 1A. För att bekräfta närvaron av exosomes, genomförde vi överföring elektronmikroskopi analys. Överföring elektronmikroskopi bild (figur 1B) visar av de ljusa och runda formen blåsor av C2C12 härrör exosomes morfologi. Western blot analys bekräftat förekomsten av exosome markörer, inklusive CD63 och TSG101 (figur 1C).
Vi observerade ett genomskinligt ödem område efter intramyocardial PBS/MPC-Exo injektion i den främre väggen av vänster kammare av MDX-möss (figur 2), som anger den framgångsrika injektionen i myokardiet.
För att avgöra huruvida hjärt MPC-Exo leverans återställer dystrofin proteinuttryck i MDX-hjärtan, vi utfört Immunofluorescerande färgning för dystrofin och imaging med en confocal Mikroskop. Vi observerade delvis återställande av dystrofin uttryck med membran lokalisering i några av hjärtmuskelceller (figur 3A). För att avgöra om transplantation av MPC-Exo förbättrar hjärtfunktionen i MDX-möss, vi mätte hjärtfunktionen med ekokardiografi 2 dagar efter intramyocardial PBS / MPC-Exo leverans. Som visas i figur 3B, förbättrade MPC-Exo behandling främre väggen rörelse jämfört med PBS, vilket tyder på att MPC-Exo transplantation förbättrad hjärtfunktion i MDX-möss.
Figur 1 : Exosome rening och karakterisering av elektronmikroskopi. (A) diagrammet visar varje steg av isolering och rening av MPC-Exo. (B), bilden visar runda och skålformade blåsor under elektronmikroskopi. Skalstapeln = 100 nm. (C) Western blot analys bekräftat förekomsten av exosome markörer CD63 och TSG101. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 : Intramyocardial injektion av PBS eller MPC-Exo. En genomskinlig ödem observerades i den vänstra ventrikulära främre väggen efter intramyocardial PBS/exosome leverans. (A) PBS injektion. (B) MPC-Exo injektion. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 : Intramyocardial leverans av MPC-Exo delvis återvinner dystrofin uttryck i MDX-hjärtan, och förbättrar hjärtats funktion mätt med ekokardiografi. (A) Confocal Immunofluorescerande färgning avsnitten hjärtat av MDX-möss 2 dagar efter intramyocardial PBS / MPC-Exo leverans. Blå = DAPI, grön = anti-dystrofin antikropp. (B) ekokardiografiska mätningar av hjärtfunktion efter 2 dagar av PBS/MPC-Exo behandling. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Metoden att isolera ren exosomes är viktigt för att studera funktionen av exosomes. En av de vanliga teknikerna för exosome isolering är polyeten glykoler (pinnar) medierad nederbörd17,18,25. Exosomes kan vara fällt i pinnar och pelleterat låg hastighet centrifugering. PEG-medierad rening är mycket bekvämt, låg kostnad, det behöver inte någon avancerad utrustning, men det finns oro över renheten hos exosomes eftersom andra lipoproteiner kan utlösas tillsammans och är svåra att ta bort. Ultrafiltrering är en rutinmetod för exosome separation, utifrån molekylvikten och utslagning storlek gränser26. Ultrafiltrering isolering är snabbare än ultracentrifugering baserat separation, men det kan orsaka strukturella skador till stora blåsor. Förekomsten av olika epitoper på membranet i exosomes, såsom CD9, CD63 och CD8127, ger en alternativ metod att isolera exosomes av immunoaffinity interaktioner mellan dessa epitoper och antikroppar bundna till magnetiska pärlor. Även immunoisolation har en hög specificitet28, denna teknik har nackdelar att bara isolera en delmängd av befolkningens totala exosome och kan snedvrida resultaten av experimentet. Ultracentrifugering förefaller därför vara lämpligare för denna studie på exosome funktion.
I detta papper presentera vi en metod för exosomes rening av sekventiell ultracentrifugering. Efter att ta bort de återstående celler från supernatanten genom centrifugering vid 150 x g, cellfragment, apoptotiska kroppar och blåsor som är större än 220 nm togs bort genom att passera supernatanten genom ett 0,22 μm filter. Exosomes var sedan pelleterat vid 100 000 x g av inledande ultracentrifugering. Ta bort eventuella protein kontaminering, utfört vi en andra 100 000 x g ultracentrifugering efter omblandning exosome pelleten i PBS. Enligt vår erfarenhet, fördelen med sekventiell ultracentrifugering är produktionen av exosomes med hög renhet och kostnadseffektivitet, men har den nackdelen med låg avkastning.
För att möjliggöra den injicerade exosomes att täcka de flesta av vänster kammare och undvika läckage, utfört vi en intramyocardial injektion med en 31 G insulin nål med spetsen böjda vid ca 20 °. Denna teknik är avgörande för framgångsrik leverans av de flesta exosomes i myokardiet och maximerar injicerade exosomes exponering för värd hjärtmuskelcellerna. Dessutom rekommenderar vi att injicera exosomes i de centrala delarna av den främre väggen i vänster kammare. Efter injektionen är klar, hålla vi brukar nålen vid injektionsstället för 1 min att förhindra vätskeläckage. Framgångsrika injektioner bekräftades av närvaron av en genomskinlig ödem runt injektionsstället.
I vår studie fann vi att allogen MPC-Exo transplantation normalnivå kan återställa dystrofin uttryck i hjärtat och förbättra hjärtats funktion i MDX-möss22, vilket kan ge nya strategier för symtomlindring hos DMD patienter. Eftersom vi observerade återvunna dystrofin proteinuttryck i MDX-mus hjärtan, antar vi att detta är mekanismen för förbättrad hjärtfunktion, dock kan vi inte utesluta andra mekanismer, såsom anti-inflammation; en färsk rapport visat att mesenkymala stamceller-derived exosomes förbättra närmiljön av infarcted hjärtmuskeln bidrar till angiogenes och anti-inflammatoriska29, dessutom Aminzadeh et al.30 rapporterade nyligen att cardiosphere-derived celler (CDCs) och deras exosomes kunde normalnivå återställa uttrycket av full längd dystrofin i DMD möss. Med tanke på att DMD är en systemisk sjukdom som involverar flera organ, är lokala hjärtinfarkt leveransen av exosome inte lämplig för behandling av andningssvikt på grund av membran myopati. Således, systemisk administrering av exosomes, såsom intravenös injektion har terapeutisk potential, men den stora utmaningen är att utveckla en effektiv strategi för att rikta exosomes till flera muskel vävnader. Viktigare, har exosome behandling bara en övergående effekt på delvis återställa dystrofin uttryck och förbättrar hjärtfunktionen. Mer effektiva, långsiktiga DMD behandling behövs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alla författarna förklarar att de har inga intressekonflikter.
Acknowledgments
Tang stöttades delvist av American Heart Association: NIH-AR070029, NIH-HL086555, GRNT31430008, NIH-HL134354.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.22 μm Filter | Fisherbrand | 09-720-004 | |
| 15 cm Cell Culture Dish | Thermo Fisher Scientific | 157150 | |
| 24 G catheter | TERUMO | SR-OX2419CA | |
| 31 G insulin needle | BD | 328291 | |
| 4% paraformaldehyde | Affymetrix | AAJ19943K2 | |
| 50 mL Centrifuge Tubes | Thermo Fisher Scientific | 339652 | |
| 6-0 suture | Pro Advantage by NDC | P420697 | |
| Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG | Thermo Fisher Scientific | A-11008 | |
| Antibiotic Antimycotic Solution | Corning | 30-004-CI | |
| Anti-Dystrophin antibody | Abcam | ab15277 | |
| Antigen retriever | Aptum Biologics | R2100-US | Antigen recovery |
| Autofluorescence Quenching Kit | Vector Laboratories | SP-8400 | |
| C2C12 cell line | ATCC | CRL-1772 | |
| Centrifuge | Unico | C8606 | |
| Change-A-Tip High Temp Cauteries | Bovie Medical Corporation | HIT | |
| Confocal microscopy | Zeiss | Zeiss 780 Upright Confocal | |
| DBA/2J-mdx mice | The Jackson Laboratory | 013141 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CM | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Corning | 35-011-CV | |
| Goat serum | MP Biomedicals, LLC | 191356 | |
| Isoflurane | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Mounting Medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Mouse Retractor Set | Kent Scientific | SURGI-5001 | |
| Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether | Fisher Scientific | BP151-100 | |
| Rodent ventilator | Harvard Apparatus | 55-7066 | |
| SW-28 Ti rotor | Beckman | 342207 | |
| The Vevo 2100 Imaging Platform | FUJIFILM VisualSonics | Vevo 2100 | Ultrasound System |
| Ultracentrifuge | Beckman | 365672 | |
| Ultra-Clear Tubes | Beckman | 344058 | |
| Xylazine (XylaMed) | Bimeda-MTC Animal Health Inc. | 1XYL003 8XYL006 |
References
- Yiu, E. M., Kornberg, A. J. Duchenne muscular dystrophy. Journal of Paediatrics and Child Health. 51 (8), 759-764 (2015).
- Nudel, U., et al. Duchenne muscular dystrophy gene product is not identical in muscle and brain. Nature. 337 (6202), 76-78 (1989).
- Rae, M. G., O'Malley, D. Cognitive dysfunction in Duchenne muscular dystrophy: a possible role for neuromodulatory immune molecules. Journal of Neurophysiology. 116 (3), 1304-1315 (2016).
- Mah, J. K., et al. A systematic review and meta-analysis on the epidemiology of Duchenne and Becker muscular dystrophy. Neuromuscular Disorders. 24 (6), 482-491 (2014).
- D'Amario, D., et al. A current approach to heart failure in Duchenne muscular dystrophy. Heart. 103 (22), 1770-1779 (2017).
- Koeks, Z., et al. Clinical Outcomes in Duchenne Muscular Dystrophy: A Study of 5345 Patients from the TREAT-NMD DMD Global Database. Journal of Neuromuscular Diseases. 4 (4), 293-306 (2017).
- Kamdar, F., Garry, D. J. Dystrophin-Deficient Cardiomyopathy. Journal of the American College of Cardiology. 67 (21), 2533-2546 (2016).
- Wang, Z., et al. Regenerative Therapy for Cardiomyopathies. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Fayssoil, A., Nardi, O., Orlikowski, D., Annane, D. Cardiomyopathy in Duchenne muscular dystrophy: pathogenesis and therapeutics. Heart Failure Reviews. 15 (1), 103-107 (2010).
- Hagan, M., Ashraf, M., Kim, I. M., Weintraub, N. L., Tang, Y. Effective regeneration of dystrophic muscle using autologous iPSC-derived progenitors with CRISPR-Cas9 mediated precise correction. Medical Hypotheses. 110, 97-100 (2018).
- Quinlan, J. G., et al. Evolution of the mdx mouse cardiomyopathy: physiological and morphological findings. Neuromuscular Disorders. 14 (8-9), 491-496 (2004).
- Siemionow, M., et al. Creation of Dystrophin Expressing Chimeric Cells of Myoblast Origin as a Novel Stem Cell Based Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reviews and Reports. 14 (2), 189-199 (2018).
- Sienkiewicz, D., Kulak, W., Okurowska-Zawada, B., Paszko-Patej, G., Kawnik, K. Duchenne muscular dystrophy: current cell therapies. Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 8 (4), 166-177 (2015).
- Zhang, Y., et al. Long-term engraftment of myogenic progenitors from adipose-derived stem cells and muscle regeneration in dystrophic mice. Human Molecular Genetics. 24 (21), 6029-6040 (2015).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes for Angiogenesis. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 429-437 (2018).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Promotes Repair in Ischemic Myocardium. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 420-428 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Suxiao Jiuxin pill promotes exosome secretion from mouse cardiac mesenchymal stem cells in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 569-578 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Exosomes from Suxiao Jiuxin pill-treated cardiac mesenchymal stem cells decrease H3K27 demethylase UTX expression in mouse cardiomyocytes in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 579-586 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Fan, G. C., Duan, D. D. Extracellular vesicles as novel biomarkers and pharmaceutic targets of diseases. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 499-500 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Long, W., Zhang, C. Stem Cell-Released Microvesicles and Exosomes as Novel Biomarkers and Treatments of Diseases. Stem Cells International. 2016, 2417268 (2016).
- Murphy, C., et al. Emerging role of extracellular vesicles in musculoskeletal diseases. Molecular Aspects of Medicine. 60, 123-128 (2018).
- Su, X., et al. Exosome-Derived Dystrophin from Allograft Myogenic Progenitors Improves Cardiac Function in Duchenne Muscular Dystrophic Mice. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Hu, G., et al. Exosome-mediated shuttling of microRNA-29 regulates HIV Tat and morphine-mediated neuronal dysfunction. Cell Death & Disease. 3, 381 (2012).
- Bayoumi, A. S., et al. A carvedilol-responsive microRNA, miR-125b-5p protects the heart from acute myocardial infarction by repressing pro-apoptotic bak1 and klf13 in cardiomyocytes. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 114, 72-82 (2018).
- Wang, Y., et al. Exosomes/microvesicles from induced pluripotent stem cells deliver cardioprotective miRNAs and prevent cardiomyocyte apoptosis in the ischemic myocardium. International Journal of Cardiology. 192, 61-69 (2015).
- Cheruvanky, A., et al. Rapid isolation of urinary exosomal biomarkers using a nanomembrane ultrafiltration concentrator. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (5), 1657-1661 (2007).
- Oksvold, M. P., Neurauter, A., Pedersen, K. W. Magnetic bead-based isolation of exosomes. Methods in Molecular Biology. 1218, 465-481 (2015).
- Pedersen, K. W., Kierulf, B., Neurauter, A. Specific and Generic Isolation of Extracellular Vesicles with Magnetic Beads. Methods in Molecular Biology. 1660, 65-87 (2017).
- Teng, X., et al. Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Improve the Microenvironment of Infarcted Myocardium Contributing to Angiogenesis and Anti-Inflammation. Cellular Physiology and Biochemistry. 37 (6), 2415-2424 (2015).
- Aminzadeh, M. A., et al. Exosome-Mediated Benefits of Cell Therapy in Mouse and Human Models of Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reports. 10 (3), 942-955 (2018).
