Summary
Burada, geçici exosomes normal myogenic atası hücrelerden türetilmiş dikim tarafından Duchenne kas distrofisi farelerde kardiyak fonksiyon geliştirmek için bir protokol mevcut.
Abstract
Duchene müsküler distrofisi (DMD) fonksiyonel dystrophin protein eksikliğinden kaynaklanan bir X'e bağlı resesif genetik bir hastalıktır. Hastalık tedavi edilemez ve hastalık ilerledikçe hasta dilate kardiyomiyopati, aritmi ve konjestif kalp yetmezliği belirtileri gelişir. DMDMDX mutant fare dystrophin ifade edemediği ve DMD fare modeli olarak yaygın olarak kullanılır. Bizim son çalışmada, biz o intramyocardial enjeksiyon geniş türü (WT) gözlenen-geri geçici Miyokardiyum DMDMDX mutant farelerin dystrophin ifade myogenic progenitör hücre kaynaklı exosomes (MPC-Exo) hangi ilişkili ima kardiyak fonksiyon geçici bir iyileşme ile WT-MPC-Exo DMD kardiyak semptomlarını kontrol etmek için bir seçenek sağlar. MPC-Exo arıtma ve DMDMDX mutant farelerin kalpleri içine nakli tekniği bu makalede.
Introduction
Duchenne kas distrofisi (DMD) bir mutasyon DMD gen ve fonksiyonel dystrophin1kaybı nedeniyle bir X'e bağlı resesif, progressive nöromüsküler hastalıktır. Dystrophin öncelikle kas iskelet ve Miyokardiyum ifade edilir ve daha az düz kas, endokrin bezlerin ve nöronlar2,3' te ifade edilir. DMD 3.500-5000 yeni doğan çocuklar dünya çapında4,5başına bir bir insidansı ile Muskuler Distrofi en yaygın türüdür. Bireyler genellikle ilerleyici kas nekrozu, erken ergenlik ve ölüm nedeniyle kalp yetmezliği ve solunum yetmezliği6hayatlarının ikinci-üçüncü yıllarda tarafından bağımsız yürüme kaybı gelişir.
Dilate kardiyomiyopati, aritmi ve konjestif kalp yetmezliği DMD7,8ortak kardiyovasküler tutulum vardır. Hastalık tedavi edilemez, destekleyici tedavi semptomları veya kalp yetmezliği ilerlemesini geciktirmek, ama kalp fonksiyonu9,10artırmak çok zordur.
DMD hastaları, kas distrofisi X'e benzer (MDX) fare eksik dystrophin protein ve mevcut kardiyomiyopati11belirtileri ve bu nedenle ilişkili DMD kardiyomiyopati araştırmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Dystrophin etkilenen kaslarda geri yükleyebilmek için Allojeneik Kök hücre tedavisi DMD12,13,14için etkili bir tedavi olduğu ispatlanmıştır. Exosomes, 30-150 nm membran veziküller çeşitli hücre tiplerinin tarafından salgılanan mesajcı RNA (mRNA) ve kodlamayan RNA'ların15,16,17 gibi genetik malzeme taşıma yoluyla hücre hücre iletişim önemli bir rol oynamaktadır ,18,19,20,21.
Bizim önceki çalışmalar myogenic progenitör hücrelerin (MPC), C2C12 hücre kültürünü gibi türetilmiş exosomes dystrophin aktarabilirsiniz göstermiştir bu allojeneik teslimini gösteren mRNA doğrudan kalp enjeksiyon22sonra ana bilgisayar cardiomyocytes için MPC kaynaklı exosomes (MPC-Exo) geçici DMD gen ekspresyonu MDX farelerde geri yükleyebilirsiniz. Bu makale MPC-Exo arıtma ve nakli teknikleri üzerinde duruluyor.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hayvanlar onaylı protokolleri ve hayvan refahı düzenlemeleri kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi Gürcistan tıp Koleji Augusta Üniversitesi'nde ele.
1. izolasyon ve MPC kaynaklı Exosomes arıtma
- Tohum 5 x 10 ile 20 mL tam Dulbecco'nın bir 15 cm hücre kültür yemek6 C2C12 hücrelerde % 10 fetal sığır serum (FBS), 100 U/mL penisilin G ve 100 μg/mL streptomisin içeren kartal orta (DMEM) değiştiren. 37 ° C ve % 5 CO2kuluçkaya.
- Ya tükenmiş orta FBS ultrasantrifüj 100.000 x g , sallanan bir kova rotor kullanarak 4 ° C'de 18 h için hazırlayın. Pelet atmak.
- Ne zaman monolayer hücrelerin % 80 izdiham kültür tabağına ulaşmak tam DMEM ya tükenmiş orta ile değiştirin.
- Hücre kültür çanak üç kez olmak üzere toplam 48 her h süpernatant toplamak için transfer pipet kullanın. 50 mL santrifüj tüpleri ve vasıl 150 x g kalan hücreleri kaldırmak 10 dk santrifüj süpernatant toplamak.
- Süpernatant hücre artıkları ortadan kaldırmak için bir 0,22 mikron filtre ile filtre. Ultracentrifuge Ultra net tüp hareketli kova rotor de 100.000 x g 120 dk 4 ° C'de exosomes çökelti kullanarak filtre uygulanmış orta.
- Ya içeren Pelet fosfat tamponlu tuz (PBS) resuspend ve tüm Ultra net tüp PBS ile doldurun. 100.000 x g de bu süspansiyon ultrasantrifüj 120 dk 4 ° C'de bulaşıcı proteinlerin ortadan kaldırmak için gerçekleştirir.
- Süpernatant atın ve eksozom Pelet 100 µL PBS resuspend. -80 ° c ileride kullanmak üzere saklayın.
- Elektron mikroskobu analiz için 3 µL exosomal süspansiyon, oda sıcaklığında 5 min için 200 mesh formvar kaplı bakır elektron mikroskobu kılavuz yerleştirin. 23boyama standart uranyl asetat ile devam edin. Yarı kuru kılavuz transmisyon elektron mikroskobu ile inceleyin.
2. Intramyocardial ya teslim
Not: Her grupta altı fareler kullanılır.
- 100 mg/kg BW 10 mg/kg ile BW xylazine kombine ketamin mayi (IP) enjeksiyonlu DBA/2J-DMDMDX fareler (erkek; vücut ağırlığı (BW) > 18 g yaş > 10 ay) anestezi ve anestezi derinliği ayak çimdik tarafından onaylayın.
- Her fare cerrahi bir platformda sırtüstü pozisyonda her bacak güvenli ve üst çene tutmak için yatay olarak dişleri aşağıda 3-0 dikiş yerleştirmek için bant kullanarak düzeltebilirsiniz.
- Kürk deri kaldırmak için fare göğüs sol tarafına depilatory krem uygulayın.
- Endotrakeal entübasyon 24 G kateter kullanarak ağız boşluğu üzerinden gerçekleştirmek ve fare ile oda havası kemirgen solunum kullanarak 195 nefes/dk hızında havalandırmak ( Tablo reçetesigörmek).
- Cilt %75 alkol ve % 10 povidone iyot ile dezenfekte.
- Bir 10\u201215 mm oblik insizyon sol sternal kenarından sol koltuk altı için yapmak, büyük pektoralis pektoralis küçük makas tarafından kesip, sonra sol Torakotomi dördüncü interkostal uzayda olun. 10 mm genişliğine göğüs boşluğuna yayılmaya Retraktörü bantları yavaşça yerleştirin. Sol akciğer hasarı önlemek için dikkat ediniz.
- Kalp zarını kaldırmak için onları ayır ve kalp ortaya çıkarmak için Retraktörü ipuçları yer onları iki düz cımbız kullanın. MPC-Exo enjekte (30 µL PBS içinde 50 μg) veya 30 μL PBS (kontrol) olarak intramyocardially bir sitede 31 G insülin iğne kullanarak sol ventrikül anterior duvar içine.
- 6-0 naylon dikiş göğüs boşluğuna, pektoralis kas ve cilt sırayla kapatmak için kullanın.
- Fareler kurtarmak. Ritmik, spontan solunum mevcut olduğunda, fareler havalandırma ve tüpü çıkarın. Gözlemlemek ve fareler koşulu ameliyattan sonra kaydedin.
3. Ekokardiyografi
Not: Deneysel gruplarına kör bir tek gözlemci Ekokardiyografi ve veri analizi yapar.
- İki gün sonra PBS/eksozom nakli, anestezi 1\u20122% isoflurane ile fareler.
- Bant kullanarak sırtüstü pozisyonda bir fare düzeltmek ve sol göğüs bölgesinde Önceden ısıtılmış akustik jel uygulayın.
-
Sol ventrikül fonksiyonları Ekokardiyografi tarafından yukarıda açıklanan16,24değerlendirmek.
- İki boyutlu (B modu) olarak sol ventrikül (LV) parasternal uzun ekseni görünümünü elde etmek ve sonra Papiller kas düzeyinde bir LV kısa eksen görünümü elde etmek için ultrason sonda 90 ° döndürün.
- Kayıt M-modu Ekokardiyografik olarak görüntüler ve ölçü sol ventrikül son diyastolik çap (LVEDD), sol ventrikül sistolik son ses (LVESD), sol ventrikül diyastolik son ses (LVEDV) ve sol ventrikül sistolik son ses (LVESV).
Not: Kesirli kısalma (FS %) = [(LVEDD − LVESD) / LVEDD] x 100 ve Sol Ventrikül Ejeksiyon Fraksiyonu (VEF %) = [(LVEDV − LVESV) / LVEDV] x 100.
4. immünhistokimya
- İki gün sonra PBS/eksozom nakli, fareler (bkz. Adım 2.1) anestezi ve göğüs kemiği göğüs boşluğuna ortaya çıkarmak için kesmek. İnferior vena kava teşrih ve sol ventrikül tepe 3 mL 5 mL şırınga bağlı 25 G iğne ile bir kelebek kateter kullanarak, oda sıcaklığında %4 paraformaldehyde 3 mL ardından PBS ile kalbine sıvı.
- Sabit kalpler parafin embed ve 5 mikron kalınlığında bölümlere kesti.
- Ksilen içindeki slaytları deparaffinize ve aşağıdaki sırayla etanol çözümlerinde rehydrate: % 100 Ksilen (3 dk), % 100 Ksilen (3 dk), % 100 etanol (1 dk), % 100 etanol (1 dk), % 95 etanol (1 dk), % 80'i etanol (1 dk), H2O (1dk).
- 8 dakika oda sıcaklığında %4 paraformaldehyde ile doku bölümleri düzeltmek.
- Sodyum sitrat (0.01 M, pH 6.0) içindeki slaytları bırakın ve antijen alma bir antijen retriever kullanarak gerçekleştirebilirsiniz.
- Bölümleri olarak % 1 polietilen glikol tert-octylphenyl eter PBS içinde oda sıcaklığında 1 h için permeabilize.
- Oda sıcaklığında 1 h için PBS içinde % 5 keçi serum bölümlerle engelleyin.
- Bölümleri ile seyreltilmiş birincil antikoru (anti-dystrophin antikor) PBS (1: 100), gecede 4 ° C'de kuluçkaya sonra üç kez PBS ile 5 dakika yıkayın.
- Bölümleri (Alexa Fluor 488 keçi Anti-tavşan IgG Birleşik) seyreltilmiş ikincil antikor PBS (1: 400) içinde oda sıcaklığında 45 dk ile kuluçkaya.
- Denetim autofluorescence bir autofluorescence Şoklama Kiti ( Tablo reçetesigörmek) kullanma.
- Kullanım montaj orta DAPI içeren (slaytları bağlamaya Malzemeler tablobkz:).
- Slaytları confocal mikroskop altında gözlemlemek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
İzole edip exosomes C2C12 hücrelerden arıtma için bir akış şeması şekil 1içindeAgösterilir. Exosomes varlığını doğrulamak için transmisyon elektron mikroskobu çözümleme yapılır. Transmisyon elektron mikroskobu görüntüsü (şekil 1B) elde edilen C2C12 exosomes parlak ve yuvarlak şekil veziküller morfolojisi gösterir. Western blot analizi doğruladı eksozom işaretleri, CD63 ve TSG101 de dahil olmak üzere varlığı (şekil 1C).
Biz bir yarı saydam ödem alanı intramyocardial MDX fareler (Resim 2), sol ventrikül anterior duvar içine PBS/MPC-Exo enjeksiyon sonra Miyokardiyum içine başarılı enjeksiyon gösteren gözlenen.
Kardiyak MPC-Exo teslim dystrophin protein ifade MDX kalplerine geri yükler olup olmadığını belirlemek için immünfloresan dystrophin için boyama ve confocal mikroskop düşsel gerçekleştirilen. Biz dystrophin ifade membran yerelleştirme bazı cardiomyocytes (şekil 3A) ile kısmi restorasyon gözlenen. MPC-Exo nakli MDX farelerde kardiyak fonksiyon geliştirir olup olmadığını belirlemek için kardiyak fonksiyon Ekokardiyografi tarafından 2 gün sonra intramyocardial PBS şiddetindeydi / MPC-Exo teslim. Şekil 3' teBgösterildiği gibi MPC-Exo tedavi ön duvar hareket PBS, MPC-Exo nakli kardiyak fonksiyon MDX farelerde geliştirilmiş düşündüren ile karşılaştırıldığında geliştirilmiş.
Resim 1 : Ya arıtma ve karakterizasyonu tarafından elektron mikroskobu. (A) diyagram her adımında yalıtım ve MPC-Exo arıtma gösterir. (B) görüntü yuvarlak ve Kupası şeklindeki veziküller elektron mikroskobu altında gösterir. Ölçek çubuğu = 100 nm. (C) Western blot analizi eksozom işaretleri CD63 ve TSG101 varlığını doğruladı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 : Intramyocardial enjeksiyon PBS veya MPC-Exo. Yarı saydam bir ödem sol ventrikül anterior duvarda intramyocardial sonra PBS/ya teslim gözlendi. (A) PBS enjeksiyon. (B) MPC-Exo enjeksiyon. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 : Intramyocardial teslim edilmesi MPC-Exo kısmen dystrophin ifade MDX kalplerine kurtarır ve Ekokardiyografi tarafından ölçülen kalp fonksiyonu iyileştirir. (A)Confocal 2 gün sonra intramyocardial PBS MDX fareler kalp bölümlerini boyama immünfloresan / MPC-Exo teslim. Mavi DAPI, yeşil = anti-dystrophin antikor =. (B) Ekokardiyografi ölçümleri kardiyak fonksiyon PBS/MPC-Exo tedavi 2 gün sonra. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Saf exosomes izole yöntemi exosomes işlev eğitim için esastır. Bir ortak teknikleri eksozom yalıtım için polietilen aracılı glikoller (mandal) yağış17,18,25' tir. Exosomes olabilir mandal içinde çöktürülmüş ve düşük hızlı Santrifüjü tarafından pelleted. PEG aracılı arıtma çok uygun, düşük maliyetli, Gelişmiş ekipman gerek değil, ama orada exosomes saflığı hakkında endişe beri diğer lipoproteinler birlikte çöktürülmüş ve kaldırılması zor. Ultrafiltrasyon eksozom ayrılması, molekül ağırlığı ve dışlama boyutu sınırları26temel alan için rutin bir yöntemdir. Ultrafiltrasyon yalıtım dayalı ultrasantrifüj ayrılık hızlıdır, ancak geniş veziküller yapısal hasara neden olabilir. Exosomes, CD9, CD63 ve CD8127, membran üzerinde çeşitli epitopları varlığı bu epitopları ve manyetik boncuklar için bağlı antikorlar immunoaffinity Hofstede tarafından exosomes izole alternatif bir yöntem sağlar. İmmunoisolation bir yüksek özgüllük28bulunsa da, bu teknik sadece bir alt toplam eksozom nüfusunun yalıtma dezavantajları vardır ve deney sonuçlarını bozabilir. Bu nedenle, ultrasantrifüj bu çalışmada eksozom işlevi için daha uygun gibi görünüyor.
Bu yazıda, biz tarafından sıralı ultrasantrifüj exosomes arıtma için bir yöntem mevcut. Sonra kalan kaldırma süpernatant 150 x g, hücre artıkları, apoptotik organları ve veziküller 220 büyük aralıklarla tarafından hücreleri nm süpernatant 0,22 mikron filtreden geçirerek çıkarıldı. Exosomes sonra de 100.000 x g tarafından ilk ultrasantrifüj pelleted. Olası protein kirlenme kaldırmak için biz eksozom Pelet PBS içinde resuspending sonra ikinci bir 100.000 x g ultrasantrifüj gerçekleştirilen. Bizim deneyim göre sıralı ultrasantrifüj avantajı yüksek saflıkta ile exosomes yapımıdır ve ekonomiklik, ancak, düşük verim dezavantajı vardır.
Sol ventrikül en kapsayacak ve kaçağı önlemek enjekte exosomes izin vermek için bir intramyocardial enjeksiyon 20 ° bükülmüş ipucu ile 31 G insülin iğne kullanarak gerçekleştirilen. Bu teknik ve kritik'en exosomes başarılı dır Miyokardiyum içine enjekte exosomes maruz kalma ana bilgisayar cardiomyocytes en üst düzeye çıkarır. Ayrıca, sol ventrikül ön duvarına Merkez bölgesi exosomes enjekte öneririz. Enjeksiyon tamamlandıktan sonra biz genellikle sıvı kaçağı önlemek 1 dk için enjeksiyon yerinde iğne tutun. Başarılı enjeksiyon enjeksiyon yeri çevresinde saydam bir ödem varlığı tarafından teyit edildi.
Bizim çalışmada, allojeneik MPC-Exo nakli geçici kalp dystrophin ifadede geri yükleme ve yeni stratejiler DMD hastalarda belirti Rölyef sağlamak MDX fareler22, kardiyak fonksiyon geliştirmek bulduk. Biz kurtarılan dystrophin protein ifade MDX fare kalplerine gözlenen beri bu mekanizma için geliştirilmiş kalp fonksiyonu, ancak, anti-inflamasyon gibi diğer mekanizmaları dışlayamazsınız varsayıyorum; bir rapora gösterdi Mezenkimal Kök hücre kaynaklı exosomes hazır Miyokardiyum anjiogenez ve anti-inflamasyon29katkıda bulunan microenvironment geliştirmek, Ayrıca, Aminzadeh ve ark.30 son zamanlarda bu rapor cardiosphere elde edilen hücreleri (KGK) ve onların exosomes geçici tam uzunlukta dystrophin DMD farelerde ifade geri yükleyemedi. DMD birden fazla organ içeren sistemik bir hastalık olduğunu göz önünde bulundurursak, ya yerel miyokardiyal teslimini diyafram myopathy nedeniyle solunum yetmezliği tedavisi için uygun değildir. Böylece, exosomes, intravenöz enjeksiyon gibi sistemik yönetimini tedavi potansiyeline sahiptir, ancak, birden fazla kas dokulara exosomes hedefleme için etkili bir strateji geliştirmek için büyük sorun olduğunu. Daha da önemlisi, ya tedavi kısmen dystrophin ifade geri yükleme ve kalp fonksiyonu artırma sadece geçici bir etkisi yoktur. Daha etkili, uzun vadeli DMD tedavi gereklidir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Tüm yazarlar bildirir hiçbir çıkar çatışmaları zorundalar.
Acknowledgments
Tang kısmen Amerikan Kalp Derneği tarafından desteklenen: GRNT31430008, NIH AR070029, NIH HL086555, NIH HL134354.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.22 μm Filter | Fisherbrand | 09-720-004 | |
| 15 cm Cell Culture Dish | Thermo Fisher Scientific | 157150 | |
| 24 G catheter | TERUMO | SR-OX2419CA | |
| 31 G insulin needle | BD | 328291 | |
| 4% paraformaldehyde | Affymetrix | AAJ19943K2 | |
| 50 mL Centrifuge Tubes | Thermo Fisher Scientific | 339652 | |
| 6-0 suture | Pro Advantage by NDC | P420697 | |
| Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG | Thermo Fisher Scientific | A-11008 | |
| Antibiotic Antimycotic Solution | Corning | 30-004-CI | |
| Anti-Dystrophin antibody | Abcam | ab15277 | |
| Antigen retriever | Aptum Biologics | R2100-US | Antigen recovery |
| Autofluorescence Quenching Kit | Vector Laboratories | SP-8400 | |
| C2C12 cell line | ATCC | CRL-1772 | |
| Centrifuge | Unico | C8606 | |
| Change-A-Tip High Temp Cauteries | Bovie Medical Corporation | HIT | |
| Confocal microscopy | Zeiss | Zeiss 780 Upright Confocal | |
| DBA/2J-mdx mice | The Jackson Laboratory | 013141 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CM | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Corning | 35-011-CV | |
| Goat serum | MP Biomedicals, LLC | 191356 | |
| Isoflurane | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Mounting Medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Mouse Retractor Set | Kent Scientific | SURGI-5001 | |
| Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether | Fisher Scientific | BP151-100 | |
| Rodent ventilator | Harvard Apparatus | 55-7066 | |
| SW-28 Ti rotor | Beckman | 342207 | |
| The Vevo 2100 Imaging Platform | FUJIFILM VisualSonics | Vevo 2100 | Ultrasound System |
| Ultracentrifuge | Beckman | 365672 | |
| Ultra-Clear Tubes | Beckman | 344058 | |
| Xylazine (XylaMed) | Bimeda-MTC Animal Health Inc. | 1XYL003 8XYL006 |
References
- Yiu, E. M., Kornberg, A. J. Duchenne muscular dystrophy. Journal of Paediatrics and Child Health. 51 (8), 759-764 (2015).
- Nudel, U., et al. Duchenne muscular dystrophy gene product is not identical in muscle and brain. Nature. 337 (6202), 76-78 (1989).
- Rae, M. G., O'Malley, D. Cognitive dysfunction in Duchenne muscular dystrophy: a possible role for neuromodulatory immune molecules. Journal of Neurophysiology. 116 (3), 1304-1315 (2016).
- Mah, J. K., et al. A systematic review and meta-analysis on the epidemiology of Duchenne and Becker muscular dystrophy. Neuromuscular Disorders. 24 (6), 482-491 (2014).
- D'Amario, D., et al. A current approach to heart failure in Duchenne muscular dystrophy. Heart. 103 (22), 1770-1779 (2017).
- Koeks, Z., et al. Clinical Outcomes in Duchenne Muscular Dystrophy: A Study of 5345 Patients from the TREAT-NMD DMD Global Database. Journal of Neuromuscular Diseases. 4 (4), 293-306 (2017).
- Kamdar, F., Garry, D. J. Dystrophin-Deficient Cardiomyopathy. Journal of the American College of Cardiology. 67 (21), 2533-2546 (2016).
- Wang, Z., et al. Regenerative Therapy for Cardiomyopathies. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Fayssoil, A., Nardi, O., Orlikowski, D., Annane, D. Cardiomyopathy in Duchenne muscular dystrophy: pathogenesis and therapeutics. Heart Failure Reviews. 15 (1), 103-107 (2010).
- Hagan, M., Ashraf, M., Kim, I. M., Weintraub, N. L., Tang, Y. Effective regeneration of dystrophic muscle using autologous iPSC-derived progenitors with CRISPR-Cas9 mediated precise correction. Medical Hypotheses. 110, 97-100 (2018).
- Quinlan, J. G., et al. Evolution of the mdx mouse cardiomyopathy: physiological and morphological findings. Neuromuscular Disorders. 14 (8-9), 491-496 (2004).
- Siemionow, M., et al. Creation of Dystrophin Expressing Chimeric Cells of Myoblast Origin as a Novel Stem Cell Based Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reviews and Reports. 14 (2), 189-199 (2018).
- Sienkiewicz, D., Kulak, W., Okurowska-Zawada, B., Paszko-Patej, G., Kawnik, K. Duchenne muscular dystrophy: current cell therapies. Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 8 (4), 166-177 (2015).
- Zhang, Y., et al. Long-term engraftment of myogenic progenitors from adipose-derived stem cells and muscle regeneration in dystrophic mice. Human Molecular Genetics. 24 (21), 6029-6040 (2015).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes for Angiogenesis. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 429-437 (2018).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Promotes Repair in Ischemic Myocardium. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 420-428 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Suxiao Jiuxin pill promotes exosome secretion from mouse cardiac mesenchymal stem cells in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 569-578 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Exosomes from Suxiao Jiuxin pill-treated cardiac mesenchymal stem cells decrease H3K27 demethylase UTX expression in mouse cardiomyocytes in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 579-586 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Fan, G. C., Duan, D. D. Extracellular vesicles as novel biomarkers and pharmaceutic targets of diseases. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 499-500 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Long, W., Zhang, C. Stem Cell-Released Microvesicles and Exosomes as Novel Biomarkers and Treatments of Diseases. Stem Cells International. 2016, 2417268 (2016).
- Murphy, C., et al. Emerging role of extracellular vesicles in musculoskeletal diseases. Molecular Aspects of Medicine. 60, 123-128 (2018).
- Su, X., et al. Exosome-Derived Dystrophin from Allograft Myogenic Progenitors Improves Cardiac Function in Duchenne Muscular Dystrophic Mice. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Hu, G., et al. Exosome-mediated shuttling of microRNA-29 regulates HIV Tat and morphine-mediated neuronal dysfunction. Cell Death & Disease. 3, 381 (2012).
- Bayoumi, A. S., et al. A carvedilol-responsive microRNA, miR-125b-5p protects the heart from acute myocardial infarction by repressing pro-apoptotic bak1 and klf13 in cardiomyocytes. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 114, 72-82 (2018).
- Wang, Y., et al. Exosomes/microvesicles from induced pluripotent stem cells deliver cardioprotective miRNAs and prevent cardiomyocyte apoptosis in the ischemic myocardium. International Journal of Cardiology. 192, 61-69 (2015).
- Cheruvanky, A., et al. Rapid isolation of urinary exosomal biomarkers using a nanomembrane ultrafiltration concentrator. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (5), 1657-1661 (2007).
- Oksvold, M. P., Neurauter, A., Pedersen, K. W. Magnetic bead-based isolation of exosomes. Methods in Molecular Biology. 1218, 465-481 (2015).
- Pedersen, K. W., Kierulf, B., Neurauter, A. Specific and Generic Isolation of Extracellular Vesicles with Magnetic Beads. Methods in Molecular Biology. 1660, 65-87 (2017).
- Teng, X., et al. Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Improve the Microenvironment of Infarcted Myocardium Contributing to Angiogenesis and Anti-Inflammation. Cellular Physiology and Biochemistry. 37 (6), 2415-2424 (2015).
- Aminzadeh, M. A., et al. Exosome-Mediated Benefits of Cell Therapy in Mouse and Human Models of Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reports. 10 (3), 942-955 (2018).
