Summary
Her presenterer vi en protokoll for å forbedre transiently hjertefunksjon i Duchenne muskeldystrofi mus ved transplanting exosomes avledet fra normal myogenic progenitor celler.
Abstract
Duchene muskeldystrofi (DMD) er en X-tilknyttet recessiv genetisk sykdom forårsaket av mangel på funksjonell dystrophin protein. Sykdommen kan ikke kureres, og som sykdommen utvikler seg, pasienten utvikler symptomer Dilaterte kardiomyopati, arytmi og hjertesvikt. DMDMDX mutant musene uttrykke ikke dystrophin, og blir ofte brukt som en musemodell av DMD. I vår siste undersøkelse, observerte vi at intramyocardial injeksjon av bredt type (WT)-myogenic stamfar celler-avledet exosomes (MPC-Exo) transiently gjenopprettet uttrykk for dystrophin i myokard DMDMDX mutant mus, som var tilknyttet med en midlertidig forbedring i hjertefunksjon tyder på at kan WT-MPC-Exo gi et alternativ å avlaste kardiale symptomer på DMD. Denne artikkelen beskriver teknikken for MPC-Exo rensing og transplantasjon i hjerter DMDMDX mutant mus.
Introduction
Duchenne muskeldystrofi (DMD) er en X-tilknyttet tilbakeslag, progressive nevromuskulær sykdom forårsaket av en mutasjon i DMD gene og tap av funksjonelle dystrophin1. Dystrophin er uttrykt i skjelettmuskulatur og myokard, og uttrykkes mindre glatt muskel, endokrine kjertler og neurons2,3. DMD er den vanligste typen muskeldystrofi med en forekomst av en per 3500 til å 5000 nyfødte gutter verden4,5. Individer utvikler vanligvis progressive muskelavslapning nekrose, tap av uavhengige vandre ved tidlig ungdom, og døde i de andre til tredje tiårene av livet på grunn av hjertesvikt og respirasjonssvikt6.
Dilaterte kardiomyopati, arytmi og hjertesvikt er vanlige hjerte manifestasjoner av DMD7,8. Sykdommen kan ikke kureres, støttende behandling kan forbedre symptomer eller forsinke utviklingen av hjertesvikt, men det er svært vanskelig å forbedre hjertet funksjon9,10.
Lik DMD pasienter, X-tilknyttet muskeldystrofi (MDX) mus er mangelfull i dystrophin protein og nåværende symptomer på kardiomyopati11, og er derfor mye brukt i DMD forbundet kardiomyopati forskning. For å gjenopprette dystrophin i berørte muskler, fører allogene stilk cellen terapi har vist seg for å være en effektiv behandling for DMD12,13,14. Exosomes, 30-150 nm membran blemmer utskilles av ulike celletyper, spiller en viktig rolle i celle til celle kommunikasjon gjennom genetisk materiale transport som budbringer RNA (mRNA) og ikke-koding RNAs15,16,17 ,18,19,20,21.
Våre tidligere studier har vist at exosomes avledet fra myogenic progenitor celler (MPC), for eksempel C2C12 celle linje, kan overføre dystrophin mRNA til verten cardiomyocytes etter direkte cardiac injeksjon22, indikerer at allogene levering av MPC-avledet exosomes (MPC-Exo) kan transiently gjenopprette DMD genuttrykk i MDX mus. Denne artikkelen fokuserer på MPC-Exo rensing og transplantasjon teknikker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyrene ble behandlet godkjent protokoller og dyrevelferd forskriftene av institusjonelle Animal Care og bruk komité Medical College of Georgia på Augusta University.
1. isolering og rensing av MPC-avledet Exosomes
- Frø 5 x 106 C2C12 celler i en 15 cm celle kultur parabol med 20 mL komplett Dulbecco endret Eagle's medium (DMEM) som inneholder 10% fosterets bovin serum (FBS), 100 U/mL penicillin G og 100 μg/mL streptomycin. Ruge på 37 ° C og 5% CO2.
- Forberede exosome-utarmet medium ved ultracentrifugation av FBS 100.000 x g 18t på 4 ° C med en svingende bøtte rotor. Kast pellet.
- Erstatt den fullstendige DMEM med exosome-utarmet medium når monolayer celler når 80% samløpet i kultur parabol.
- Bruk en overføring pipette samle nedbryting fra celle kultur parabolen alle 48 timer totalt tre ganger. Samle nedbryting i 50 mL sentrifuge rør og sentrifuger 150 x g for 10 min å fjerne gjenværende celler.
- Filtrere nedbryting gjennom et 0.22 μm filter eliminere celle rusk. Ultracentrifuge filtrert mediet i krystallklart rør bruker svingende bøtte rotoren 100.000 x g for 120 minutter til 4 ° C for å utløse exosomes.
- Resuspend exosome inneholder pellet i fosfat bufret saltvann (PBS) og fylle hele krystallklart røret med PBS. Utføre ultracentrifugation av denne suspensjon 100.000 x g for 120 minutter til 4 ° C å eliminere skadelige proteiner.
- Forkast nedbryting og resuspend exosome pellets i 100 µL PBS. Lagre på-80 ° C for fremtidig bruk.
- For elektronmikroskop analyse, plassere 3 µL exosomal hjuloppheng på et 200 mesh formvar-belagt kobber elektronmikroskop rutenett for 5 min ved romtemperatur. Fortsette med standard uranyl acetate flekker23. Undersøke semi-tørr rutenettet ved overføring elektronmikroskop.
2. Intramyocardial Exosome levering
Merk: Vi brukte seks mus i hver gruppe.
- Bedøve DBA/2J-DMDMDX mus (mannlige, alder > 10 måneder, kroppsvekt (BW) > 18 g) med intraperitoneal (IP) injeksjon av 100 mg/kg BW av ketamin kombinert med 10 mg/kg BW av xylazine, og Bekreft dybden av anestesi tå knipe.
- Fix hver musen i supine posisjon på en kirurgisk plattform med bånd å sikre hvert lem og plassere en 3-0 Sutur vannrett under øvre tennene å holde overkjeven på plass.
- Bruke depilatory kremen på venstre side av musen brystet fjerne pels fra huden.
- Utføre endotracheal intubasjon via munnhulen ved hjelp av en 24 G kateter, og ventilere musen med romluften frekvensen av 195 åndedrag/min bruker en gnager ventilator (se Tabell for materiale).
- Desinfiser huden med 75% alkohol og 10% povidon jod.
- Gjøre en 10\u201215 mm skrå snitt fra venstre sternal kant til venstre armhulen, klippe pectoralis major og pectoralis mindre av en saks, og gjøre en venstre thoracotomy gjennom den fjerde interkostalrom plassen. Forsiktig inn festepunkt band å spre bryst hulrom til en bredde med 10 mm. Ta vare for å unngå skade på venstre lunge.
- Bruke to rett pinsett for å fjerne pericardium, dra dem fra hverandre og plassere dem bak festepunkt tips å avsløre hjertet. Injisere MPC-Exo (50 μg i 30 µL PBS) eller 30 μL PBS (som en kontroll) intramyocardially i fremre veggen av venstre ventrikkel bruker en 31 G insulin nål for ett område.
- Bruk 6-0 nylon sømmer for å lukke bryst hulrom, pectoralis muskler og hud i rekkefølge.
- Gjenopprette mus. Når rytmiske, spontan pusting finnes, fjerne mus fra ventilen og extubate. Observere og registrere betingelsen mus etter operasjonen.
3. echocardiography
Merk: En enkelt observatør blinde for eksperimentell gruppene utfører echocardiography og dataanalyse.
- To dager etter PBS/exosome transplantasjon, bedøve mus med 1\u20122% isoflurane.
- Fikse en mus i supine posisjon med tape, og bruke forvarmet akustisk gel på venstre bryst området.
-
Vurdere venstre ventrikkel funksjon av echocardiography som tidligere beskrevet16,24.
- Få parasternal lange aksen visningen av venstre ventrikkel (LV) i to dimensjoner (B-modus), og deretter rotere ultralyd sonden 90° for å få en LV kort-aksen visning på papillary muskel nivå.
- Ta M-modus echocardiographic bilder og måle venstre ventrikkel ende-diastolisk diameter (LVEDD), venstre ventrikkel ende-systolisk volum (LVESD), venstre ventrikkel ende-diastolisk volum (LVEDV) og venstre ventrikkel ende-systolisk volum (LVESV).
Merk: Brøk forkortelse (FS %) = [(LVEDD − LVESD) / LVEDD] x 100, og venstre ventrikkel utstøting fraksjon (LVEF %) = [(LVEDV − LVESV) / LVEDV] x 100.
4. Immunohistochemistry
- To dager etter PBS/exosome transplantasjon, bedøve mus (se trinn 2.1) og kuttet sternum åpne bryst hulrom. Dissekere den underlegne vena cava, og perfuse hjertet gjennom venstre ventrikkel apex med 3 mL PBS, etterfulgt av 3 mL 4% paraformaldehyde i romtemperatur, med en 25 G nål knyttet til 5 mL sprøyter en sommerfugl kateter.
- Bygge inn fast hjerter i parafin, og kuttet i 5 μm tykke snitt.
- Deparaffinize lysbilder i xylen og rehydrate i etanol løsninger i følgende rekkefølge: 100% xylen (3 min), 100% xylen (3 min), 100% etanol (1 min), 100% etanol (1 min), 95% etanol (1 min), 80% etanol (1 min), H2O (1 min).
- Fastsette vev deler med 4% paraformaldehyde i 8 min ved romtemperatur.
- Fordype lysbilder i natriumsitrat (0,01 M, pH 6.0) og utføre antigen henting bruke en antigen retriever.
- Permeabilize deler 1t ved romtemperatur med 1% polyetylenglykol tert-octylphenyl Eter i PBS.
- Blokkere seksjoner med 5% geit serum i PBS 1t ved romtemperatur.
- Inkuber seksjoner med fortynnet primære antistoff (anti-dystrophin antistoffer) PBS (1: 100) overnatting på 4 ° C, og deretter vaske tre ganger med PBS i 5 min.
- Inkuber seksjoner med fortynnet sekundære antistoff (Alexa Fluor 488 konjugert geit anti-kanin IgG) PBS (1:400) for 45 min ved romtemperatur.
- Kontroll autofluorescence bruker en autofluorescence slukke kit (se Tabell for materiale).
- Bruk montering medium som inneholder DAPI (se Tabell for materiale) å montere lysbildene.
- Observere lysbilder under AC confocal mikroskop.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Et flytskjema for å isolere og rensende exosomes fra C2C12 celler vises i figur 1A. For å bekrefte tilstedeværelse av exosomes, utført vi overføring elektronmikroskop analyse. Overføring elektronmikroskop bildet (figur 1B) viser morfologi av lyse og rund form blemmer av C2C12 avledet exosomes. Western blot analyse bekreftet tilstedeværelse av exosome markører, inkludert CD63 og TSG101 (figur 1C).
Vi observerte et gjennomskinnelig ødem område etter intramyocardial PBS/MPC-Exo injeksjon i fremre veggen av venstre ventrikkel MDX mus (figur 2), som indikerer vellykket injeksjon i myokard.
Å avgjøre om hjerte MPC-Exo levering gjenoppretter dystrophin protein uttrykk i MDX hjerter, vi utført immunofluorescent flekker for dystrophin og tenkelig med AC confocal mikroskop. Vi observerte delvis gjenoppretting av dystrophin uttrykk med membran lokalisering i noen av cardiomyocytes (Figur 3A). For å fastslå om transplantasjon av MPC-Exo forbedrer hjerte funksjonen i MDX mus, målt vi hjertefunksjon ved echocardiography 2 dager etter intramyocardial PBS / MPC-Exo levering. Som vist i Figur 3B, forbedret MPC-Exo behandling fremre veggen bevegelsen sammenlignet med PBS, foreslå at MPC-Exo transplantasjon forbedret hjertefunksjon i MDX mus.
Figur 1 : Exosome rensing og karakterisering av elektronmikroskop. (A) diagrammet viser hvert trinn i isolasjon og rensing av MPC-Exo. (B) bildet viser runde og kopp blemmer under elektronmikroskop. Skala bar = 100 nm. (C) Western blot analyse bekreftet tilstedeværelse av exosome markørene CD63 og TSG101. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Intramyocardial injeksjon av PBS eller MPC-Exo. En gjennomsiktig ødem ble observert i venstre ventrikkel fremre veggen etter intramyocardial PBS/exosome levering. (A) PBS injeksjon. (B) MPC-Exo injeksjon. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 : Intramyocardial levering av MPC-Exo delvis gjenoppretter dystrophin uttrykk i MDX hjerter, og forbedrer hjertefunksjon målt echocardiography. (A) Confocal immunofluorescent flekker delene hjertet av MDX mus 2 dager etter intramyocardial PBS / MPC-Exo levering. Blå = DAPI, grønn = anti-dystrophin antistoff. (B) Echocardiographic målinger av hjertefunksjon etter 2 dager med PBS/MPC-Exo behandling. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Metoden isolere ren exosomes er avgjørende for å studere funksjonen til exosomes. En av de vanlige teknikkene for exosome isolasjon er polyetylen glycols (plugger) mediert nedbør17,18,25. Exosomes kan igangsatte i plugger og pelleted med lav hastighet sentrifugering. PEG-mediert rensing er veldig praktisk, rimelig, det trenger ikke noen avansert utstyr, men det er bekymring for renhet av exosomes siden andre lipoproteiner kan være igangsatte sammen og er vanskelig å fjerne. Ultrafiltrasjon er en rutine metode for exosome separasjon, basert på molekylvekt og eksklusjon størrelse grenser26. Ultrafiltrasjon isolasjon er raskere enn ultracentrifugation basert separasjon, men det kan forårsake strukturell skade store blemmer. Tilstedeværelsen av ulike epitopes på membranen av exosomes, som CD9, CD63 og CD8127, gir en alternativ metode for å isolere exosomes immunoaffinity samspill mellom disse epitoper og antistoffer bundet til magnetiske perler. Selv om immunoisolation har en høy spesifisitet28, denne teknikken har ulemper av aisolering bare et delsett av befolkningen totale exosome og kan forvrenge resultatene av eksperimentet. Derfor synes ultracentrifugation å være mer egnet for denne forskningsstudien om exosome funksjon.
I dette papiret presenterer vi en metode for exosomes rensing av sekvensiell ultracentrifugation. Etter fjerne de gjenværende celler fra nedbryting av sentrifugering på 150 x g, celle rusk, apoptotisk organer og blemmer større enn 220 nm ble fjernet ved nedbryting passerer filtere 0.22 μm. Exosomes ble deretter pelleted 100.000 x g av første ultracentrifugation. For å fjerne mulig protein forurensning, utførte vi en andre 100.000 x g ultracentrifugation etter resuspending exosome pellets i PBS. Ifølge vår erfaring, fordelen av sekvensiell ultracentrifugation er produksjon av exosomes med høy renhetsgrad og kostnadseffektivitet, men det har ulempen av lav avkastning.
Slik at de injiserte exosomes dekke mesteparten av venstre ventrikkel og unngå, utført vi en intramyocardial injeksjon bruker en 31 G insulin nål spissen bøyd i ca 20 °. Denne teknikken er avgjørende for vellykket levering av de fleste exosomes i myokard og maksimerer eksponering av injisert exosomes til verten cardiomyocytes. I tillegg anbefaler vi injisere exosomes i fremre veggen av venstre ventrikkel sentrale regionen. Etter injeksjon er fullført, holde vi vanligvis nålen på injeksjonsstedet for 1 min å hindre væske lekkasje. Vellykket injeksjoner ble bekreftet av tilstedeværelsen av en gjennomsiktig ødem rundt injeksjonsstedet.
I vår studie fant vi at allogene MPC-Exo transplantasjon transiently kan gjenopprette dystrophin uttrykk i hjertet og forbedre hjertefunksjon i MDX mus22, som kan gi nye strategier for symptomlindring i DMD pasienter. Siden vi observert gjenopprettede dystrophin protein uttrykk i MDX musen hjerter, antar vi at dette er mekanismen for forbedret hjertefunksjon, men vi kan ikke utelukke andre mekanismer, som anti-betennelse; en fersk rapport viste at mesenchymal Stamcelle-avledet exosomes forbedre microenvironment av infarcted myocardium bidra til angiogenese og anti-betennelse29, videre Aminzadeh et al.30 nylig rapporterte at cardiosphere-avledet celler (CDCs) og deres exosomes kan transiently gjenopprette uttrykket av full lengde dystrophin i DMD mus. Tatt i betraktning at DMD er en systemisk sykdom som involverer flere organer, er lokale hjerteinfarkt leveranse av exosome ikke egnet for behandling av respirasjonssvikt på grunn av membran muskeldystrofi. Dermed systemisk administrasjon av exosomes, som intravenøs injeksjon, har terapeutiske potensial, men den store utfordringen er å utvikle en effektiv strategi for målretting exosomes flere muskel vev. Enda viktigere, påvirker exosome behandling bare et forbigående delvis gjenoppretting dystrophin uttrykk, og forbedre hjerte-funksjon. Mer effektiv, langsiktig DMD behandling er nødvendig.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle forfattere erklærer at de har ingen interessekonflikter.
Acknowledgments
Tang ble delvis støttet av American Heart Association: GRNT31430008 NIH-AR070029 NIH-HL086555, NIH-HL134354.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.22 μm Filter | Fisherbrand | 09-720-004 | |
| 15 cm Cell Culture Dish | Thermo Fisher Scientific | 157150 | |
| 24 G catheter | TERUMO | SR-OX2419CA | |
| 31 G insulin needle | BD | 328291 | |
| 4% paraformaldehyde | Affymetrix | AAJ19943K2 | |
| 50 mL Centrifuge Tubes | Thermo Fisher Scientific | 339652 | |
| 6-0 suture | Pro Advantage by NDC | P420697 | |
| Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG | Thermo Fisher Scientific | A-11008 | |
| Antibiotic Antimycotic Solution | Corning | 30-004-CI | |
| Anti-Dystrophin antibody | Abcam | ab15277 | |
| Antigen retriever | Aptum Biologics | R2100-US | Antigen recovery |
| Autofluorescence Quenching Kit | Vector Laboratories | SP-8400 | |
| C2C12 cell line | ATCC | CRL-1772 | |
| Centrifuge | Unico | C8606 | |
| Change-A-Tip High Temp Cauteries | Bovie Medical Corporation | HIT | |
| Confocal microscopy | Zeiss | Zeiss 780 Upright Confocal | |
| DBA/2J-mdx mice | The Jackson Laboratory | 013141 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CM | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Corning | 35-011-CV | |
| Goat serum | MP Biomedicals, LLC | 191356 | |
| Isoflurane | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Mounting Medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Mouse Retractor Set | Kent Scientific | SURGI-5001 | |
| Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether | Fisher Scientific | BP151-100 | |
| Rodent ventilator | Harvard Apparatus | 55-7066 | |
| SW-28 Ti rotor | Beckman | 342207 | |
| The Vevo 2100 Imaging Platform | FUJIFILM VisualSonics | Vevo 2100 | Ultrasound System |
| Ultracentrifuge | Beckman | 365672 | |
| Ultra-Clear Tubes | Beckman | 344058 | |
| Xylazine (XylaMed) | Bimeda-MTC Animal Health Inc. | 1XYL003 8XYL006 |
References
- Yiu, E. M., Kornberg, A. J. Duchenne muscular dystrophy. Journal of Paediatrics and Child Health. 51 (8), 759-764 (2015).
- Nudel, U., et al. Duchenne muscular dystrophy gene product is not identical in muscle and brain. Nature. 337 (6202), 76-78 (1989).
- Rae, M. G., O'Malley, D. Cognitive dysfunction in Duchenne muscular dystrophy: a possible role for neuromodulatory immune molecules. Journal of Neurophysiology. 116 (3), 1304-1315 (2016).
- Mah, J. K., et al. A systematic review and meta-analysis on the epidemiology of Duchenne and Becker muscular dystrophy. Neuromuscular Disorders. 24 (6), 482-491 (2014).
- D'Amario, D., et al. A current approach to heart failure in Duchenne muscular dystrophy. Heart. 103 (22), 1770-1779 (2017).
- Koeks, Z., et al. Clinical Outcomes in Duchenne Muscular Dystrophy: A Study of 5345 Patients from the TREAT-NMD DMD Global Database. Journal of Neuromuscular Diseases. 4 (4), 293-306 (2017).
- Kamdar, F., Garry, D. J. Dystrophin-Deficient Cardiomyopathy. Journal of the American College of Cardiology. 67 (21), 2533-2546 (2016).
- Wang, Z., et al. Regenerative Therapy for Cardiomyopathies. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Fayssoil, A., Nardi, O., Orlikowski, D., Annane, D. Cardiomyopathy in Duchenne muscular dystrophy: pathogenesis and therapeutics. Heart Failure Reviews. 15 (1), 103-107 (2010).
- Hagan, M., Ashraf, M., Kim, I. M., Weintraub, N. L., Tang, Y. Effective regeneration of dystrophic muscle using autologous iPSC-derived progenitors with CRISPR-Cas9 mediated precise correction. Medical Hypotheses. 110, 97-100 (2018).
- Quinlan, J. G., et al. Evolution of the mdx mouse cardiomyopathy: physiological and morphological findings. Neuromuscular Disorders. 14 (8-9), 491-496 (2004).
- Siemionow, M., et al. Creation of Dystrophin Expressing Chimeric Cells of Myoblast Origin as a Novel Stem Cell Based Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reviews and Reports. 14 (2), 189-199 (2018).
- Sienkiewicz, D., Kulak, W., Okurowska-Zawada, B., Paszko-Patej, G., Kawnik, K. Duchenne muscular dystrophy: current cell therapies. Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 8 (4), 166-177 (2015).
- Zhang, Y., et al. Long-term engraftment of myogenic progenitors from adipose-derived stem cells and muscle regeneration in dystrophic mice. Human Molecular Genetics. 24 (21), 6029-6040 (2015).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes for Angiogenesis. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 429-437 (2018).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Promotes Repair in Ischemic Myocardium. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 420-428 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Suxiao Jiuxin pill promotes exosome secretion from mouse cardiac mesenchymal stem cells in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 569-578 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Exosomes from Suxiao Jiuxin pill-treated cardiac mesenchymal stem cells decrease H3K27 demethylase UTX expression in mouse cardiomyocytes in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 579-586 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Fan, G. C., Duan, D. D. Extracellular vesicles as novel biomarkers and pharmaceutic targets of diseases. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 499-500 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Long, W., Zhang, C. Stem Cell-Released Microvesicles and Exosomes as Novel Biomarkers and Treatments of Diseases. Stem Cells International. 2016, 2417268 (2016).
- Murphy, C., et al. Emerging role of extracellular vesicles in musculoskeletal diseases. Molecular Aspects of Medicine. 60, 123-128 (2018).
- Su, X., et al. Exosome-Derived Dystrophin from Allograft Myogenic Progenitors Improves Cardiac Function in Duchenne Muscular Dystrophic Mice. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Hu, G., et al. Exosome-mediated shuttling of microRNA-29 regulates HIV Tat and morphine-mediated neuronal dysfunction. Cell Death & Disease. 3, 381 (2012).
- Bayoumi, A. S., et al. A carvedilol-responsive microRNA, miR-125b-5p protects the heart from acute myocardial infarction by repressing pro-apoptotic bak1 and klf13 in cardiomyocytes. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 114, 72-82 (2018).
- Wang, Y., et al. Exosomes/microvesicles from induced pluripotent stem cells deliver cardioprotective miRNAs and prevent cardiomyocyte apoptosis in the ischemic myocardium. International Journal of Cardiology. 192, 61-69 (2015).
- Cheruvanky, A., et al. Rapid isolation of urinary exosomal biomarkers using a nanomembrane ultrafiltration concentrator. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (5), 1657-1661 (2007).
- Oksvold, M. P., Neurauter, A., Pedersen, K. W. Magnetic bead-based isolation of exosomes. Methods in Molecular Biology. 1218, 465-481 (2015).
- Pedersen, K. W., Kierulf, B., Neurauter, A. Specific and Generic Isolation of Extracellular Vesicles with Magnetic Beads. Methods in Molecular Biology. 1660, 65-87 (2017).
- Teng, X., et al. Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Improve the Microenvironment of Infarcted Myocardium Contributing to Angiogenesis and Anti-Inflammation. Cellular Physiology and Biochemistry. 37 (6), 2415-2424 (2015).
- Aminzadeh, M. A., et al. Exosome-Mediated Benefits of Cell Therapy in Mouse and Human Models of Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reports. 10 (3), 942-955 (2018).
