Summary
Здесь мы представляем протокол временно улучшить функции сердца в мышах мышечная дистрофия Дюшенна, трансплантация exosomes, производные от нормальных миогенных прародитель клеток.
Abstract
Мышечная дистрофия Дюшена (МДД) является Х-сцепленный рецессивный генетическое заболевание вызвано отсутствием функциональной делеций белка. Болезнь нельзя вылечить, а как болезнь прогрессирует, пациент развивает симптомы Дилатационная кардиомиопатия, аритмии и застойной сердечной недостаточности. ДМДMDX мутантных мышей не выражают делеций и широко используются как мыши модель DMD. В нашем недавнем исследовании, мы наблюдали что intramyocardial инъекции широкий типа (WT)-миогенных прогениторных клеток, полученных exosomes (MPC-Exo) временно восстановлен выражение делеций в миокарде DMDMDX мутантных мышей, который был связан с временным улучшением функции сердца, предполагая, что WT-MPC-Exo может предоставить возможность для облегчения сердечных симптомов DMD. Эта статья описывает технику MPC-Exo очищения и трансплантации в сердцах DMDMDX мутантных мышей.
Introduction
Мышечной дистрофии Дюшенна (ДМД) является Х-хромосомой рецессивных, прогрессивный нервно-мышечные заболевания вызванные мутация в гене DMD и потере функциональных делеций1. Делеций выражается главным образом в скелетных мышцах и миокарда и менее выражена в гладкие мышцы, железы внутренней секреции и нейроны2,3. DMD-это наиболее распространенный тип мышечной дистрофии с заболеваемостью одному 3500 до 5000 новорожденных мальчиков во всем мире4,5. Люди обычно развиваются прогрессивная мышечная некроза, потеря независимых мимо раннего подросткового возраста и смерть в второй-третьей декадах их жизни из-за сердечной и дыхательной недостаточности6.
Расширенная кардиомиопатия, аритмии и застойной сердечной недостаточности являются проявлением DMD7,8общих сердечно-сосудистой системы. Болезнь нельзя вылечить, поддерживающее лечение может улучшить симптомы или задержать прогрессирование сердечной недостаточности, но это очень трудно улучшить сердце функции9,10.
Похож на ДМД пациентов, Х-хромосомой мышечная дистрофия (MDX) мышах дефицит белка делеций и настоящем симптомы кардиомиопатия11и поэтому широко используются в ДМД связанные кардиомиопатия исследований. Чтобы восстановить делеций в пораженных мышц, аллогенных стволовых клеток оказалось эффективным средством лечения для ДМД12,,1314. Exosomes, 30-150 Нм мембрана везикулы выделяемый различных типов клеток, играют ключевую роль в области коммуникации к ячейке посредством генетического материала транспорта, таких как матричная РНК (мРНК) и некодирующих RNAs15,16,17 ,18,19,,2021.
Наши предыдущие исследования показали, что exosomes, производные от миогенных прогениторных клеток (ПДК), например C2C12 клеточной линии, могут передавать делеций мРНК в принимающей кардиомиоцитов после прямого впрыска сердца22, указывающее что аллогенной доставки MPC-производные exosomes (MPC-Exo) может временно восстановить DMD экспрессии генов мышей многомерных выражений. Эта статья посвящена методам очистки и трансплантации MPC-Экзо.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Животные были обработаны согласно утвержденных протоколов и правил животных институциональный уход животных и использование Комитета медицинский колледж Грузии в университете Augusta.
1. изоляция и очищение MPC-производные Exosomes
- Семена 5 x 106 C2C12 клеток в клетки культуры блюдо 15 см с полным Дульбекко 20 мл изменение орла носитель (DMEM) содержит 10% плода бычьим сывороточным (ФБС), 100 ед/мл пенициллин G и 100 мкг/мл стрептомицина. Инкубируйте на 37 ° C и 5% CO2.
- Подготовки обедненного exosome среднего ultracentrifugation FBS в 100,000 x g для 18 ч при 4 ° C, с помощью поворотной ведро ротора. Выбросите гранулы.
- Замените полный DMEM обедненного exosome среднего когда монослоя клеток достигают 80% слияния в культуре блюдо.
- Используйте передачу пипетки для сбора супернатант от клеток культуры блюдо каждые 48 ч, в общей сложности три раза. Соберите супернатант в 50 мл пробирок и центрифуги на 150 x g за 10 минут, чтобы удалить оставшиеся ячейки.
- Фильтр супернатант через фильтр 0,22 мкм для ликвидации ячейки мусор. Ультрацентрифуги отфильтрованных среднего в ультрачистый труб с использованием размахивая ротор ведро на 100,000 x g для 120 мин при температуре 4 ° C для exosomes.
- Ресуспензируйте Пелле exosome содержащих в-фосфатный буфер (PBS) и заполнить весь ультрачистый трубки с PBS. Выполните ultracentrifugation Эта подвеска в 100,000 x g для 120 мин на 4 ° C для ликвидации загрязняясь протеины.
- Отменить супернатант и Ресуспензируйте гранулы exosome в 100 мкл PBS. Хранить при температуре-80 ° C для использования в будущем.
- Для анализа электронной микроскопии место 3 мкл суспензии exosomal на 200 formvar покрытием меди микроскопа сетки для 5 мин при комнатной температуре. Продолжите с стандартным уранила ацетат пятнать23. Изучите сетке полусухое, просвечивающей электронной микроскопии.
2. Intramyocardial Exosome доставки
Примечание: Мы использовали шесть мышей в каждой группе.
- Анестезировать DBA/2J-DMDMDX мышей (самец; возраст > 10 месяцев вес тела (BW) > 18 g) с впрыском внутрибрюшинного (и.п.) 100 мг/кг жм кетамина в сочетании с 10 мг/кг жм Ксилазина и подтвердите глубины анестезии, мыс пинча.
- Исправьте каждую мышь в лежачем положении на хирургические платформе с помощью ленты для обеспечения каждой конечности и место шва 3-0 горизонтально ниже верхних зубов для хранения верхней челюсти на месте.
- Применить депиляционный крем к левой стороне мыши груди, чтобы удалить мех из кожи.
- Выполнять эндотрахеальной интубации через полости с помощью катетера 24 G и проветрить мыши с комнатным воздухом в размере 195 вдохов/мин с помощью грызунов Вентилятор (см. Таблицу материалов).
- Дезинфекция кожи с 75% алкоголя и 10% повидон йод.
- Сделать 10\u201215 мм наклонный разрез от левого края грудины к левой подмышечной впадине, сократить большую грудную крупных и мелких большую грудную ножниц, а затем сделать левая торакотомия через четвертое межреберное пространство. Аккуратно вставьте втягивающего полос распространить грудной полости шириной 10 мм. Позаботьтесь, чтобы избежать повреждения левого легкого.
- Используйте две прямые пинцетом удалить перикарда, вытащить их друг от друга, и место их за советы втягивающего подвергать сердце. Придать MPC-Exo (50 мкг в 30 мкл PBS) или 30 мкл PBS (как элемент управления) intramyocardially в передней стенки левого желудочка с помощью 31 G инсулин иглы на одном сайте.
- Используйте швы нейлона 6-0, чтобы закрыть грудной полости, большую грудную мышц и кожи в последовательности.
- Восстановите мышей. Когда присутствует художественной, спонтанное дыхание, удалите мышей от вентилятора и экстубаций. Наблюдать и записывать состояние мышей после операции.
3. эхокардиография
Примечание: Один наблюдатель, ослепил в экспериментальной группы выполняет эхокардиографии и анализ данных.
- Через два дня после пересадки PBS/exosome, анестезировать мышей с 1\u20122% изофлюрановая.
- Исправить мышь в лежачем положении, с помощью липкой ленты и применять разогретой акустическая гель на левой груди.
-
Оценить функции левого желудочка методом эхокардиографии, как описано в16,24.
- Получить мнение парастернальной длинной оси левого желудочка (LV) в двух измерениях (режим B) и затем поверните ультразвуковой зонд 90° для получения представления LV короткой оси на уровне папиллярных мышц.
- Запись M-режим Эхокардиографические изображений и мера левого желудочка конечного диастолического диаметр (LVEDD), левого желудочка конец систолический объем (LVESD), левого желудочка конечного диастолического объема (LVEDV) и левого желудочка конец систолический объем (LVESV).
Примечание: Дробные укорочение (FS %) = [(LVEDD − LVESD) / LVEDD] x 100 и фракция выброса левого желудочка (зна %) = [(LVEDV − LVESV) / LVEDV] x 100.
4. иммуногистохимии
- Через два дня после пересадки PBS/exosome, анестезировать мышей (см. шаг 2.1) и разрезали грудины подвергать грудной полости. Вскрыть нижней полой вены и perfuse сердце через верхушки левого желудочка с 3 мл PBS, следуют 3 мл параформальдегида 4% при комнатной температуре, с помощью катетер бабочка с 25 G иглой, придает шприц 5 мл.
- Встраивать фиксированной сердца в парафин и разрезать на 5 мкм толщиной секций.
- Deparaffinize слайды в ксилоле и увлажняет в растворы этанола в следующем порядке: 100% ксилола (3 мин), 100% ксилола (3 мин), 100% этанола (1 мин), 100% этанола (1 мин), 95% этиловом спирте (1 мин), 80% этанола (1 мин), H2O (1 мин).
- Исправьте разделов ткани с параформальдегида 4% за 8 минут при комнатной температуре.
- Погружать слайды в цитрат натрия (0.01 М, pH 6.0) и выполнять антигена извлечения с помощью ретривер антигена.
- Разрушения разделы за 1 ч при комнатной температуре с 1% полиэтиленгликоль трет octylphenyl эфира в PBS.
- Заблокировать разделы с 5% козьего сыворотки в PBS на 1 ч при комнатной температуре.
- Инкубировать секции с разбавленным основного антитела (антитела анти делеций) в PBS (1: 100) на ночь при 4 ° C, а затем промойте PBS три раза за 5 мин.
- Инкубируйте секции с разбавленным вторичное антитело (Alexa Fluor 488 конъюгированных коза анти кролик IgG) в PBS (1: 400) 45 мин при комнатной температуре.
- Управления аутофлюоресценция с помощью закалки аутофлюоресценция комплекта (см. Таблицу материалов).
- Использование установки носитель, содержащий DAPI (см. Таблицу материалы), для монтирования слайды.
- Наблюдать за слайды под конфокального микроскопа.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Схема для изоляции и очистки exosomes из C2C12 клеток показан на рис. 1A. Чтобы подтвердить присутствие exosomes, мы провели анализ передачи электронной микроскопии. Передача электронной микроскопии изображения (рис. 1Б) показывает морфология яркие и круглой формы везикулы exosomes C2C12 производные. Западный анализ помаркой подтвердили наличие маркеров exosome, в том числе CD63 и TSG101 (рис. 1C).
Мы наблюдали полупрозрачного отек области после intramyocardial PBS/MPC-Exo инъекции в передней стенки левого желудочка MDX мышей (рис. 2), показывающее успешное инъекции в миокарде.
Чтобы определить, выполняются ли сердца MPC-Exo доставки восстанавливает делеций белков в сердцах многомерных выражений, мы immunofluorescent окрашивания для делеций и изображений с помощью конфокального микроскопа. Мы наблюдали частичное восстановление делеций выражения с локализацией мембраны в некоторых кардиомиоцитов (рисA). Чтобы определить ли трансплантация MPC-Exo улучшает функцию сердца в многомерных выражений мышей, мы измерили сердечной функции методом эхокардиографии через 2 дня после intramyocardial PBS / MPC-Exo доставки. Как показано на рисунке 3B, MPC-Exo лечение улучшилось движение передней стенки по сравнению с PBS, предполагая, что MPC-Exo трансплантации улучшение сердечной функции MDX мышей.
Рисунок 1 : Exosome очистки и характеристика по электронной микроскопии. (A) диаграмма показывает каждый шаг изоляции и очистки MPC-Экзо. (B) изображение показывает круглые и Чашеобразная везикулы по электронной микроскопии. Шкалы бар = 100 Нм. (C) Вестерн-блот анализ подтвердил наличие маркеров exosome, CD63 и TSG101. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2 : Intramyocardial инъекции PBS или MPC-Exo. Полупрозрачные отек наблюдалась в стенке левого желудочка передней после intramyocardial PBS/exosome доставки. (A) PBS инъекций. (B) MPC-Exo инъекции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3 : Intramyocardial доставка MPC-Exo частично восстанавливает делеций выражение в сердцах многомерных выражений и улучшает функцию сердца, измеряется эхокардиография. (A) Confocal immunofluorescent окрашивание сердце разделы MDX мышей через 2 дня после intramyocardial PBS / MPC-Exo доставки. Синий = DAPI, зеленый = анти делеций антитела. (B) эхокардиографические измерения сердечной функции после 2 дней лечения PBS/MPC-Экзо. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Метод изоляции чисто exosomes имеет важное значение для изучения функции exosomes. Один из распространенных методов для exosome изоляции является полиэтиленгликолей (шпеньки) при посредничестве осадков17,18,25. Exosomes может быть химически осажденный в колышки и гранулированных центрифугированием низкой скорости. ПЭГ опосредованной очистки очень удобным, недорогостоящих, она не нуждается в каких-либо современное оборудование, но есть озабоченность по поводу чистоты exosomes, поскольку другие липопротеинов могут быть химически осажденный вместе и трудно удалить. Ультрафильтрация — это обычные метод для разделения exosome, основанный на молекулярный вес и исключения размер ограничения26. Ультрафильтрация изоляции быстрее, чем ultracentrifugation на основе разделения, но это может вызвать структурные повреждения крупных пузырьков. Наличие различных эпитопов на мембране exosomes, таких как CD9, CD63 и CD8127, предоставляет альтернативный метод изоляции exosomes immunoaffinity взаимодействия между этими эпитопов и антител, привязан к магнитной бусины. Хотя иммуноизоляции имеет высокую специфичность28, этот метод имеет недостатки только изолировать подмножество всего exosome населения и может исказить результаты эксперимента. Таким образом ultracentrifugation, как представляется, более подходящих для этого исследования на exosome функцию.
В этой статье мы представляем метод для очистки exosomes путем последовательных ultracentrifugation. После удаления оставшихся клеток от супернатант центрифугированием в 150 x g, ячейки мусор, apoptotic тела и везикулы больше чем 220 Нм были удалены, передав супернатант через фильтр 0,22 мкм. Exosomes были затем гранулированных на 100,000 x g на первоначальный ultracentrifugation. Чтобы удалить возможные белковых загрязнений, мы провели второй 100,000 x g ultracentrifugation после resuspending exosome гранулы в PBS. Согласно нашему опыту преимущество последовательной ultracentrifugation является производство exosomes с высокой чистоты и эффективности затрат, однако, она имеет недостаток низкой доходности.
Для того, чтобы позволить вводят exosomes покрывают большую часть левого желудочка и избежать утечки, мы провели один intramyocardial впрыска с помощью 31 G инсулин иглы с кончика согнуты под углом примерно 20 °. Эта техника имеет решающее значение для успешной поставки большинства exosomes в миокарде и максимизирует воздействие вводят exosomes принимающей кардиомиоцитов. Кроме того мы рекомендуем, впрыскивать exosomes в центральной части передней стенки левого желудочка. После завершения инъекций, мы обычно проводят иглу в месте инъекции 1 мин для предотвращения утечки жидкости. Успешное инъекции были подтверждены наличием полупрозрачных отек вокруг укола.
В нашем исследовании мы обнаружили, что аллогенной трансплантации MPC-Exo может временно восстановить делеций выражение в сердце и улучшения сердечной функции MDX мышей22, которое может предоставить новые стратегии для сброса симптома в ДМД больных. Поскольку мы наблюдали восстановленные делеций белков в сердцах мыши MDX, мы предполагаем, что это механизм для улучшения сердечной деятельности, однако, мы не можем исключать другие механизмы, такие как анти воспаление; Недавний доклад продемонстрировал, что мезенхимальных стволовых клеток, полученных exosomes улучшают микроокружение infarcted миокарда, способствуя ангиогенеза и противовоспалительная29, Кроме того, Аминзаде et al.30 недавно сообщила, что cardiosphere производные клетки (CDCs) и их exosomes может временно восстановить выражение полная длина делеций в ДМД мышей. Учитывая, что DMD-это системное заболевание, с участием нескольких органов, местных миокарда доставки exosome не подходит для лечения дыхательной недостаточностью на фоне диафрагмы миопатии. Таким образом Системное администрирование exosomes, таких, как внутривенные инъекции, имеет терапевтический потенциал, однако Главная задача заключается в том, чтобы разработать эффективную стратегию для ориентации exosomes несколько мышечных тканей. Что еще более важно exosome лечения влияет только переходные на частично восстановление делеций выражение и улучшению функции сердца. Необходимо более эффективное, долгосрочное лечение DMD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Все авторы заявляет, что они имеют без конфликта интересов.
Acknowledgments
Тан были частично поддержаны американской ассоциации сердца: GRNT31430008, низ-AR070029, низ-HL086555, низ-HL134354.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.22 μm Filter | Fisherbrand | 09-720-004 | |
| 15 cm Cell Culture Dish | Thermo Fisher Scientific | 157150 | |
| 24 G catheter | TERUMO | SR-OX2419CA | |
| 31 G insulin needle | BD | 328291 | |
| 4% paraformaldehyde | Affymetrix | AAJ19943K2 | |
| 50 mL Centrifuge Tubes | Thermo Fisher Scientific | 339652 | |
| 6-0 suture | Pro Advantage by NDC | P420697 | |
| Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG | Thermo Fisher Scientific | A-11008 | |
| Antibiotic Antimycotic Solution | Corning | 30-004-CI | |
| Anti-Dystrophin antibody | Abcam | ab15277 | |
| Antigen retriever | Aptum Biologics | R2100-US | Antigen recovery |
| Autofluorescence Quenching Kit | Vector Laboratories | SP-8400 | |
| C2C12 cell line | ATCC | CRL-1772 | |
| Centrifuge | Unico | C8606 | |
| Change-A-Tip High Temp Cauteries | Bovie Medical Corporation | HIT | |
| Confocal microscopy | Zeiss | Zeiss 780 Upright Confocal | |
| DBA/2J-mdx mice | The Jackson Laboratory | 013141 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CM | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Corning | 35-011-CV | |
| Goat serum | MP Biomedicals, LLC | 191356 | |
| Isoflurane | Patterson Veterinary | 07-893-1389 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Mounting Medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Mouse Retractor Set | Kent Scientific | SURGI-5001 | |
| Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether | Fisher Scientific | BP151-100 | |
| Rodent ventilator | Harvard Apparatus | 55-7066 | |
| SW-28 Ti rotor | Beckman | 342207 | |
| The Vevo 2100 Imaging Platform | FUJIFILM VisualSonics | Vevo 2100 | Ultrasound System |
| Ultracentrifuge | Beckman | 365672 | |
| Ultra-Clear Tubes | Beckman | 344058 | |
| Xylazine (XylaMed) | Bimeda-MTC Animal Health Inc. | 1XYL003 8XYL006 |
References
- Yiu, E. M., Kornberg, A. J. Duchenne muscular dystrophy. Journal of Paediatrics and Child Health. 51 (8), 759-764 (2015).
- Nudel, U., et al. Duchenne muscular dystrophy gene product is not identical in muscle and brain. Nature. 337 (6202), 76-78 (1989).
- Rae, M. G., O'Malley, D. Cognitive dysfunction in Duchenne muscular dystrophy: a possible role for neuromodulatory immune molecules. Journal of Neurophysiology. 116 (3), 1304-1315 (2016).
- Mah, J. K., et al. A systematic review and meta-analysis on the epidemiology of Duchenne and Becker muscular dystrophy. Neuromuscular Disorders. 24 (6), 482-491 (2014).
- D'Amario, D., et al. A current approach to heart failure in Duchenne muscular dystrophy. Heart. 103 (22), 1770-1779 (2017).
- Koeks, Z., et al. Clinical Outcomes in Duchenne Muscular Dystrophy: A Study of 5345 Patients from the TREAT-NMD DMD Global Database. Journal of Neuromuscular Diseases. 4 (4), 293-306 (2017).
- Kamdar, F., Garry, D. J. Dystrophin-Deficient Cardiomyopathy. Journal of the American College of Cardiology. 67 (21), 2533-2546 (2016).
- Wang, Z., et al. Regenerative Therapy for Cardiomyopathies. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Fayssoil, A., Nardi, O., Orlikowski, D., Annane, D. Cardiomyopathy in Duchenne muscular dystrophy: pathogenesis and therapeutics. Heart Failure Reviews. 15 (1), 103-107 (2010).
- Hagan, M., Ashraf, M., Kim, I. M., Weintraub, N. L., Tang, Y. Effective regeneration of dystrophic muscle using autologous iPSC-derived progenitors with CRISPR-Cas9 mediated precise correction. Medical Hypotheses. 110, 97-100 (2018).
- Quinlan, J. G., et al. Evolution of the mdx mouse cardiomyopathy: physiological and morphological findings. Neuromuscular Disorders. 14 (8-9), 491-496 (2004).
- Siemionow, M., et al. Creation of Dystrophin Expressing Chimeric Cells of Myoblast Origin as a Novel Stem Cell Based Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reviews and Reports. 14 (2), 189-199 (2018).
- Sienkiewicz, D., Kulak, W., Okurowska-Zawada, B., Paszko-Patej, G., Kawnik, K. Duchenne muscular dystrophy: current cell therapies. Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 8 (4), 166-177 (2015).
- Zhang, Y., et al. Long-term engraftment of myogenic progenitors from adipose-derived stem cells and muscle regeneration in dystrophic mice. Human Molecular Genetics. 24 (21), 6029-6040 (2015).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes for Angiogenesis. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 429-437 (2018).
- Ju, C., et al. Transplantation of Cardiac Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Promotes Repair in Ischemic Myocardium. Journal of Cardiovascular Translational Research. 11 (5), 420-428 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Suxiao Jiuxin pill promotes exosome secretion from mouse cardiac mesenchymal stem cells in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 569-578 (2018).
- Ruan, X. F., et al. Exosomes from Suxiao Jiuxin pill-treated cardiac mesenchymal stem cells decrease H3K27 demethylase UTX expression in mouse cardiomyocytes in vitro. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 579-586 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Fan, G. C., Duan, D. D. Extracellular vesicles as novel biomarkers and pharmaceutic targets of diseases. Acta Pharmacologica Sinica. 39 (4), 499-500 (2018).
- Chen, Y., Tang, Y., Long, W., Zhang, C. Stem Cell-Released Microvesicles and Exosomes as Novel Biomarkers and Treatments of Diseases. Stem Cells International. 2016, 2417268 (2016).
- Murphy, C., et al. Emerging role of extracellular vesicles in musculoskeletal diseases. Molecular Aspects of Medicine. 60, 123-128 (2018).
- Su, X., et al. Exosome-Derived Dystrophin from Allograft Myogenic Progenitors Improves Cardiac Function in Duchenne Muscular Dystrophic Mice. Journal of Cardiovascular Translational Research. , (2018).
- Hu, G., et al. Exosome-mediated shuttling of microRNA-29 regulates HIV Tat and morphine-mediated neuronal dysfunction. Cell Death & Disease. 3, 381 (2012).
- Bayoumi, A. S., et al. A carvedilol-responsive microRNA, miR-125b-5p protects the heart from acute myocardial infarction by repressing pro-apoptotic bak1 and klf13 in cardiomyocytes. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 114, 72-82 (2018).
- Wang, Y., et al. Exosomes/microvesicles from induced pluripotent stem cells deliver cardioprotective miRNAs and prevent cardiomyocyte apoptosis in the ischemic myocardium. International Journal of Cardiology. 192, 61-69 (2015).
- Cheruvanky, A., et al. Rapid isolation of urinary exosomal biomarkers using a nanomembrane ultrafiltration concentrator. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (5), 1657-1661 (2007).
- Oksvold, M. P., Neurauter, A., Pedersen, K. W. Magnetic bead-based isolation of exosomes. Methods in Molecular Biology. 1218, 465-481 (2015).
- Pedersen, K. W., Kierulf, B., Neurauter, A. Specific and Generic Isolation of Extracellular Vesicles with Magnetic Beads. Methods in Molecular Biology. 1660, 65-87 (2017).
- Teng, X., et al. Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes Improve the Microenvironment of Infarcted Myocardium Contributing to Angiogenesis and Anti-Inflammation. Cellular Physiology and Biochemistry. 37 (6), 2415-2424 (2015).
- Aminzadeh, M. A., et al. Exosome-Mediated Benefits of Cell Therapy in Mouse and Human Models of Duchenne Muscular Dystrophy. Stem Cell Reports. 10 (3), 942-955 (2018).
