Summary
Amputation i nedre delen kan förekomma även efter angioplastik av blockerade kärl i Critical Limb Ischemia (CLI). Mononukleära stamceller (MPC) återspeglar vaskulär reparation. Detta protokoll beskriver kvantifiering av MPCs från cirkulation nära angioplastik, och dess samband med endotel dysfunktion och förutsägelse av nedre delen amputation.
Abstract
Kritiska lem ischemi (CLI) representerar ett avancerat stadium av perifera kranskärlens sjukdom. Angioplastik förbättrar blodflödet till nedre delen; vissa patienter irreversibelt framsteg till lem amputation. Omfattningen av vaskulär skador och mekanismerna för vaskulär reparation är faktorer som påverkar post-angioplasty resultatet. Mononukleära stamceller (MPC) är reaktiva för vaskulär skador och reparation, med förmågan att återspegla vaskulär sjukdomar. Detta protokoll beskriver kvantifiering av MPCs erhålls från blodcirkulationen från kärl nära angioplasty webbplats, liksom dess samband med endotel dysfunktion och dess prediktiv förmåga för lem amputation under de närmaste 30 dagarna efter angioplastik hos patienter med CLI.
Introduction
Perifer arteriell sjukdom (PAD) kännetecknas av en kronisk och progressiv vaskulär obstruktion med begränsning avblodtillförseln 1. På global nivå påverkar PAD av de nedre extremiteterna cirka 10% av den äldre befolkningen, medan upp till 7% av sådana fall lämnas in till lem amputation2,3.
Critical Limb Ischemia (CLI) representerar den allvarligaste presentationen av PAD1. Patienter upplever vanligtvis smärta i vila, sår eller kallbrand som kan hänföras till ocklusionerade artärer; medan klinisk prognos är ogynnsam och kännetecknas av en 30% risk för lem amputation och dödlighet under 1 år3,4,5.
Angioplastik är ett minimalt invasivt endovaskulärt förfarande som kan återställa blodflödet till nedre delen hos patienter med CLI. emellertid, vissa patienter kommer oundvikligen att kräva stora lem amputation, även efter angioplastik terapi1,5. Tidig identifiering av ogynnsamma resultat efter angioplastik är ganska värdefullt, på grund av möjligheten till terapi verkställighet.
Traditionella riskfaktorer kan ge en begränsad prediktiv förmåga för större lem amputation hos patienter med CLI genomgår angioplastik6. Patofysiologiska orienterade biomarkörer representerar nya metoder med potentiella kliniska tillämpningar, vilket kan resultera specifikt användbart vid sjukdomar relaterade till kärlskada7. Numera har deltagandet av cellulära populationer som äger endotelreparationsegenskaper, på platsen för den aterosklerotiska plack, alltmererkänts 8,9.
Mononukleära stamceller (MPC) härrör från benmärgen och egna strukturella och funktionella egenskaper hos stamceller med vaskulär regenerativa förmågor. På grund av MPC: s förmåga att föröka sig, migrera och visa vaskulär vidhäftning; dessa celler har blivit bra kandidater att återspegla endotel reparation som svar på ischemi10,11,12. Dessutom har kontinuerligt intresse för mekanismer som ligger till grund för kärlskada motiverat att utforska den prognostiska rollen hos lokala förekommande biomarkörer, eftersom de anses återspegla vaskulär skada och reparation7,13,14.
Syftet med denna studie är att beskriva hur man bestämmer mängden MPC som cirkulerar nära vaskulär obstruktion hos patienter med CLI som genomgår angioplastik; och hur man utvärderar förhållandet mellan MPCs med indikatorer på endotel dysfunktion och lem amputation.
Jämfört med prognosen baserat på komorbiditeter och inneboende vaskulär funktioner, visar mängden lokala MPCs specifika förmåga att förutsäga kliniska resultatet när det gäller endotel dysfunktion och lem amputation. Konsekvent har vissa studier beskrivit den prognostiska rollen hos liknande biomarkörer under utvärderingen av patienter med PAD15,16.
Baserat på tidigare resultat7, den metod som beskrivs här kan vara användbar för en tidig identifiering av population i riskzonen för negativa vaskulär resultat i flera kliniska inställningar, såsom nedre delen och födans ischemi, stroke, vaskulit, venös trombos och andra som involverar vaskulär skada och reparation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Den institutionella forskningsetiska kommittén från Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" ISSSTE godkände detta prospektiva protokoll, alla inskrivna patienter gav skriftligt informerat samtycke.
1. Utvärdering av kärlblock i nedre delen, blodprov och ballongangioplastik
OBS: Det studieprov som användes för detta experiment bestod av 20 diabetespatienter, i åldern 68 år och 10 av 20 var män. Hälften av provet var rökare och de vanligaste samsjukligheterna var typ 2 diabetes mellitus, systemisk kranskärlens hypertoni och/eller dyslipidemi. Provet var avsett att standardiseras för ålders-, köns- och samsjuklighet. Möjlig partiskhet på grund av klinisk-demografisk påverkan på förhållandet mellan MPCs och CLI kunde inte uteslutas.
- Utvärdera klinisk svårighetsgrad av lem ischemi enligt Rutherford klassificering13 (se kompletterande tabell 1).
- Utför angiografi i nedre extremiteterna, blodprov och ballongangioplastik.
- Använd antikoagulantia och bedövningsmedel före operation.
- Placera en 18 G nål i blodkärlet på den valda ljumsken.
- Placera en införare och för fram en flexibel styrtråd. Sedan ändras den ursprungliga guiden ytterligare för en 6 Fr-introducerare.
- Använd periodisk injektion av kontrastmedier eller CO2 under fluoroskopisk styrning för att identifiera arteriell bana och kärlblockerade platser (figur 1).
OBS: Använd kontrastmedier 40 cc, utspädda 1:1 i 0,9% saltlösning, eller CO2 vid 10 till 20 ml per skott vid ett tryck av 12 psi. - Introducera två 0.014 Fr navigationsstyrningsledningar och två 0.014 Fr-stödledningar i fartyget och för dem upp till den blockerade platsen.
OBS: Två 0,014 Fr-styrledningar (260 cm långa) används för navigering och två 0,014 Fr-styrledningar (260 cm långa) används för stöd under en enda procedur. - Inför 5 Fr och 3 Fr katetrar sekventiellt och samla 10 ml blod från närmaste plats till vaskulär obstruktion. Håll blodprover på is.
OBS: Katetrarnas storlek kan vara 5 Fr och 3 Fr, och de ändras under proceduren. - För fram en styrtråd igen. Introducera sedan en angioplastikballongkateter, som innehåller en uppblåsbar ballong belägen i slutet av katetern. För fram angioplastik ballong kateter och placera ballongen precis på platsen för lesion. Utför angioplastiken genom att blåsa upp ballongen mot blockeringsplacket som ligger vid kärlväggen. Verifiera blodflödesrestaurering.
OBS: En stent kan placeras i det blockerade området för att hålla artären öppen efter proceduren. - Introducera en kateter och avancera upp till närmaste plats till kärlblocket. Samla 10 ml blod med 30 minuters tidsintervall efter angioplastik. Håll blodprover på is.
OBS: Insamling av blodprover före och efter angioplastik rekommenderas för att ytterligare utvärdera angioplastikens inverkan på antalet MPC. - Ta bort alla ledningar under fluoroskopisk ledning.
- Tillhandahålla postoperativa vårdprocedurer, inklusive antikoagulationsbehandling med enoxaparin vid 1 mg/kg subkutan var 12: e timme, aspirin 100 mg, statin och analgesi. Komprimera på platsen för vaskulär punktering under 24 timmar.
2. Kvantifiering av cirkulerande mononukleära stamceller (MPC) (figur 2)
- Överför 6 ml av det uppsamlade blodet till ett färskt koniskt rör på 15 ml och späd 1:1 (v/v) med PBS.
OBS: Bearbeta blodet inom 1 timme från insamlingen. - Förbered för densitetsgradientseparation genom att tillsätta 2 ml av densitetsgradientmediet till 3 provrör vardera. Tillsätt sedan 3 lika stora alikvoter av det utspädda blodet i varje provrör.
OBS: Överskrid inte tre fjärdedelar av provrörets maximala kapacitet. - Centrifug vid 1 800 x g i 30 min vid 4 °C. Samla gränssnittslagret som finns som en ring med en pipett och överför till ett nytt rör. Tillsätt 2 ml PBS och snurra vid 1 800 x g i 6 min vid 4 °C. Spara pelleten eftersom detta kommer att innehålla MPC: er.
- Tvätta pelleten som innehåller MPC med PBS genom centrifugering enligt beskrivningen i steg 2.3. Använd färsk PBS för varje tvätt och snurra vid 1 800 x g i 2 min vid 4 °C. Upprepa processen i 6 gånger.
- Efter den sista tvätten, använd 1 ml PBS för att återanvända cellpelleten. Späd 20 μL av cellfjädringen med 20 μL 0,4% trypanblått, 1:1 (v/v). Använd 10 μL av denna cellupphängning för cellräkning med hjälp av hemocytometer och ett ljusmikroskop.
- Aliquot 1 x 106 MPCs i tidigare märkta 5 ml flöde cytometri rör.
OBS: Förbered motsvarande isotypmatchade kontrollantikroppar. - Centrifugera rören vid 1 800 x g i 6 min vid 4 °C. Aspirera och kassera supernaten.
- Späd primär antikropp i 100 μL antikroppsinkubationslösning [1x PBS, pH 7,4, EDTA 2 mM, BSA 0,05%] och lägg till röret. Återanvänd i 10 s och inkubera i 20 min vid 4 °C, i mörker.
OBS: Slutliga koncentrationer av primära antikroppar som används i detta protokoll var CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50. Protokollet kan stoppas i detta steg genom att lymfocyter fixerades i 4 % paraformaldehyd i PBS och proverna förvaras upp till 24 timmar vid 4 °C. - Centrifug vid 1 800 x g i 2 min vid 4 °C och kassera supernaten. Återanvänds i 500 μL 1x PBS, pH 7,4, EDTA 2 mM.
- Utför flödescytometrianalys.
- Ställ in bakgrunden med isotypmatchade kontrollantikroppar. Sedan, på FSC / SSC-tomten välj lymfocyter spridas, försöker utesluta cellulära skräp, återstående granulocyter och andra partiklar. En sådan fördelning betraktas som 100 %.
OBS: Lymfocyter sprids vanligtvis i den nedre vänstra regionen av tomten. - Använd en grind med vanlig immunofenotyp som innehåller ett stort antal celler CD45+ och CD34+. Välj sedan för dubbla positiva immunofenotyper med gate som tidigare identifierat CD45+, CD34+, och lägga till antingen KDR (VEGFR-2)+, CD133+ eller CD184+. Identifiera MPC-delpopulationer med deras specifika cellytans markörer. Rapportera i procent av gated events.
- Ställ in bakgrunden med isotypmatchade kontrollantikroppar. Sedan, på FSC / SSC-tomten välj lymfocyter spridas, försöker utesluta cellulära skräp, återstående granulocyter och andra partiklar. En sådan fördelning betraktas som 100 %.
- Identifiera de viktigaste delpopulationerna av mpc-grupper. I den aktuella studien var de immunofenotyper som analyserades CD45+CD34+CD133+; CD45+CD34+CD184+; CD45+CD34+CD133+CD184+; CD45+CD34+KDR+; CD45+CD34+KDR+CD133+ och CD45+CD34+KDR+CD1847,17.
OBS: Dessa cellytans markörer användes för studien: CD45 (lymfocyter), CD34 (endotel och/eller kärlceller), KDR (VEGFR-2) (membranmarkör för endotelceller), CD133 (endotel av stamceller) och CD184 (hematopoetiska stamceller och endotelceller).
3. Förhållandet mellan MPC och modifiering av endotelfunktion och hemodynamiskt test (MULD)
- Bestäm flödesmedierad utvidgning (MULD), före och efter angioplastik.
- Använd en vaskulär linjär givare för att mäta diametern på brachialartären.
- Placera manschetten på sfygmomanometern ovanför mätplatsen i underarmen och insufflaten vid 50 mmHg ovanför det systoliska blodtrycket i 5 min och töm.
- Bestäm igen diametern på brachialartären inom de närmaste 60 s. Använd ekvationen nedan för att uppskatta mul- och klövsjuka.
OBS: Beräkna graden av dilatation med hjälp av ekvationen (%) = (maximal diameter efter transient ischemi - basal diameter) × 100 / basal diameter.
- Korrelera antalet mpcs med baslinjen FMD-värde och post-angioplasty delta av MULD.
4. Prognostisk förmåga hos MPC för lem amputation
- Schemalägg periodiska medicinska möten efter ballong angioplastik och patientens ansvarsfrihet, för att utvärdera kvaliteten på blodflödet till nedre delen.
- Utvärdera klinisk svårighetsgrad av lem ischemi 2 veckor efter angioplastik. Utvärdera lösning av vilosmärta, lägre ischemi och bevarande av en funktionell fot, enligt Rutherford-klassificeringen13.
- Jämför klinisk svårighetsgrad av lem ischemi, vid baslinjen kontra uppföljning. Identifiera de fall som kräver större amputation på grund av ogynnsamt resultat.
- Korrelera antalet MPC med andelen patienter som kräver större amputation av nedre delen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Blodprover från blockerade artärer, på platsen adresserade för angioplastik, samlades in från 20 diabetiker patienter, i åldern 68 år och 10 av 20 var män. Hälften av provpopulationen var rökare. Vaskulär skador gjordes främst som Rutherford klass VI; Medan patienter uppvisade en högre prevalens av typ 2 Diabetes Mellitus (100%), hypertoni (70%) och dyslipidemi (55%).
En 30 dagar klinisk uppföljning efter nedre delen angioplastik genomfördes. Andelen delpopulationer av MPC vid baslinjen eller dynamiken efter angioplastik korrelerades (Spearman-analys) med graden av endoteldysfunktion, enligt utvärdering av mul- och klövsjuka. och baslinjen antalet MPCs jämfördes mellan patienter som genomgår, eller inte, lem amputation efter angioplastik (U-Mann Whitney). Studien visade att baslinje-MPC subpopulation CD45+CD34+KDR+ negativt korrelerade med mul- och klövsjuka(figur 3A, vänster), medan förändringen av MPCs CD45+CD34+CD133+CD184+ efter angioplastik korrelerade avsevärt med FMD förbättring(figur 3B,höger). Dessutom observerades ökat baslinjetal av MPC subpopulation CD45+CD34+KDR+ (Figur 4A, B, vänster) hos de patienter som utvecklades till lem amputation; samt minskning efter angioplastik av MPC subpopulation CD45+CD34+CD133+CD184+ (Figur 4A, C, höger).
Figur 1: Angiografi och blodsamling i nedre extremiteterna. A)Vaskulär bana som däremot framläggs av media under fluoroskopi. B)Vaskulär obstruktion före angioplastik. C)Vaskulär obstruktion efter angioplastik. (D) Kärlkirurg använder en kateter för att samla blod från närmaste plats till kärlobstruktion och atheroma plack, och Lab forskare är redo att få blodprovet. Pilar indikerar platsen för vaskulär hinder. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 2: Beredning av blodprov och mononukleära stamceller (MPC) bestämning. A)Gradientpreparat för densitet. B)Lymfocyter ringseparation efter blodcentrifugation. C)Insamling av lymfocytfasen. D)Centrifugation. e)Pelletsbildning i botten av provröret. (F) Antal cellers fjädring. G)Beredning av lymfocyter för flödescytometri. H)Bestämning av cellunderpopulationer genom flödescytometri. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 3: Förhållandet mellan MPC och hemodynamiska indikatorer. A)Ultraljudets position för att förvärva mul- och klövsjuka och representativa resultat. (B) Förhållandet mellan underpopulationerna %MPC vid baslinjen (vänster, CD45+CD34+KDR+; höger, CD45+CD34+CD133+CD184+) och baslinjevärden för mul- och klövsjuka. samt förhållandet mellan (C) %MPCs efter angioplastik med mul- och klövsjuka förbättring efter angioplastik. Förkortningar: MPCs, Mononuclear Progenitor Cells; Mul- och klövsjuka, flödesmedlingad utvidgning. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 4: MPCs och prognos av nedre delen amputation efter angioplastik. A)Representativa flöde cytometri bilder av MPC subpopulationer. (B) Associering av baslinjen %MPC subpopulationer (vänster, CD45+CD34+KDR+; höger, CD45+CD34+CD133+CD184+), eller (C) %MPCs efter angioplastik, med nedre delen amputation efter angioplastik, under en 30-dagars uppföljning. Förkortningar: MPCs, Mononuclear Progenitor Cells. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Kompletterande fil 1: Rutherfords klassificering av svårighetsgraden av lem ischemi. Klicka här för att ladda ner den här filen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Blodsamling på den exakta platsen för kärlblocket kan visa tekniska svårigheter; Därför utförde vi blodsamling i närheten av kärlblock. På samma sätt verkar mängden MPCs nära vaskulär plack vara mycket dynamisk och kan härleda variationer före och efter angioplastik. Enligt våra observationer rekommenderas att utvärdera baslinje- och 30min-post-angioplasty förändringar i antalet MPCs, eftersom de kan återspegla flera patofysiologiska processer som förekommer inom vaskulär skador och reparation.
Blodprovsbehandling för mpc-bestämning rekommenderas att utföras inom de första 3 h. Därför kan adekvat organisationsplan, och till och med en tidigare simuleringspraxis, upprättas mellan angiologi-vaskulär kirurgi team och labb forskare. Isolering av mpc-ämnen bör utföras noggrant, särskilt genom att blodprov tas i densitetsgradient och tvättar av pelleten som innehåller MPC. Vår grupp användning för att överföra celler till cytometri rör, lägga till primära antikroppar, fixa och lagra celler över natten vid 4 °C; på grund av tidsadministration bekvämlighet, och flöde cytometri avläsning skulle utföras dagen efter.
När det gäller rollen att cirkulera MPCs som en användbar klinisk biomarkör av vaskulär skada och reparation, har viktiga ansträngningar rapporterats för att standardisera immunophenotyper mellan stamceller17. En omfattande karakterisering bör omfatta subpopulationer av cirkulerande stamceller som deltar i de olika kliniska scenarierna inom kärlsjukdomar. Med hjälp av de metoder som beskrivs här fann vi att post-angioplastik minskning av MPCs subpopulation CD45+CD34+CD133+CD184+ är förutsägande för större amputation. Detta konstaterande stöder uppfattningen att inflammatoriskt svar under vaskulär skada eller angioplastik stimulerar homing signaler för MPCs, främja lokala vävnad reparation18,19.
På samma sätt överensstämmer observationen med rapporterad effekt av minskat antal CD45+CD34+CD133+ och CD45+CD34+CD133+184+ subpopulationer av MPC som en prediktor för negativa kardiovaskulära resultat efter kranskärlens angioplastik7, vilket kan förklaras av den ökade förmågan hos mindre differentierade fenotyper av endotelförälder att följa extracellulär matris, att föröka sig och svara på vaskulogen stimulans18.
Dessutom observerade vi att ett ökat antal CD45+CD34+KDR+ subpopulation av MPCs efter angioplastik var relaterade till lem amputation även om de har ansetts bidra till vaskulär reparation. Denna kontrovers kan förklaras på grund av: 1) variationer i studiens utformning, eftersom andra studier har jämfört antalet CD45+CD34+KDR+ MPCs mellan patienter med CLI och friska kontroller19; 2) Variationer i metoderna för blodprov, inklusive platsen och tiden för angioplastik. och 3) den typ av artär som blockeras och vaskulariseras.
Prognostisk karakterisering av nya biomarkörer, baserade på mekanismer som ansvarar för vaskulär reparation i flera sjukdomar, har fått betydande uppmärksamhet i translationell forskning. Detta är den första beskrivningen av en metod för att utforska rollen av MPCs, lokalt bestämda på en plats nära kärlblocket, i prognosen för lem amputation efter angioplastik i fall med CLI. En begränsning är bristen på MPCs beslutsamhet vid fler tidpunkter efter angioplastik. Vi anser dock att våra resultat berikar området vaskulär forskning genom att karakterisera mpcs translationella roll under vaskulär skada, reparation och prognostisk potential för större amputation hos patienter med CLI. Särskilt anser vi att metoden som beskrivs här kan vara användbar vid förutsägelse av negativa vaskulära resultat i kliniska inställningar som omfattar en vaskulär skada och reparationsmekanismer, såsom nedre delen och födans ischemi, stroke, vaskulit och/eller venös trombos.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Författarna tackar stödet från det institutionella programmet E015 för projekt-ID 356.2015.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BSA | Roche | 10735086001 | Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending. |
| Calibration Beads | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-607 | MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests |
| CD133/1 (AC133)-PE | Milteny Biotec / MACS | #130-080-801 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
| CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 | Miltenyi Biotec / MACS | #130-103-798 | Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated |
| CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-601 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
| CD34-FITC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-081-001 | The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34 |
| CD45- VioBlue | Miltenyi Biotec / MACS | #130-092-880 | Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated |
| Conical Tubes | Thermo SCIENTIFIC | #339651 | 15ml conical centrifuge tubes |
| Cytometry Tubes | FALCON Corning Brand | #352052 | 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile. |
| EDTA | BIO-RAD | #161-0729 | Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe<0.01%, As<1ppm, Insolubles<0.005% |
| Improved Neubauer | Without brand | Without catalog number | Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2) |
| K2 EDTA Blood Collection Tubes | BD Vacutainer | #367863 | Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL. |
| Lymphoprep | Stemcell Technologies | 01-63-12-002-A | Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL |
| Paraformaldehyde | SIGMA-ALDRICH | #SZBF0920V | Fixation of biological samples, (powder, 95%) |
| Pipette Transfer 1,3mL | CRM Globe | PF1016, PF1015 | The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy. |
| Test Tubes | KIMBLE CHASE | 45060 13100 | Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm |
References
- Serrano-Hernando, F. J., Martín-Conejero, A. Peripheral artery disease: Pathophysiology, diagnosis and treatment. Revista Española de Cardiología. 60 (9), 969-982 (2007).
- Agarwal, S., et al. Burden of re-admissions among patients with critical limb ischemia. Journal of the American College of Cardiology. 69 (15), 1897-1908 (2017).
- Kolte, D., et al. Thirty-day re-admissions after endovascular or surgical therapy for critical limb ischemia: Analysis of the 2013 to 2014 nationwide re-admissions databases. Circulation. 136 (2), 167-176 (2017).
- Rowlands, T. E., Donnelly, R. Medical therapy for intermittent claudication. European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 34, 314-321 (2007).
- Cronewett, J. L. Acute limb ischemia and lower extremity chronic arterial disease: Rutherford's vascular surgery (8th ed.). , Saunders Elsevier. Philadelphia, PA. (2014).
- Dick, F., et al. Surgical or endovascular revascularization in patients with critical limb ischemia: influence of diabetes mellitus on clinical outcome. Journal of Vascular Surgery. 45 (4), 751-761 (2007).
- Suárez-Cuenca, J. A., et al. Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).
- Franz, R., et al. Use of autologous bone marrow mononuclear cell implantation therapy as a limb salvage procedure in patients with severe peripheral arterial disease. Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1378-1390 (2009).
- Benoit, E., O'Donnell, T. F., Patel, A. N. Safety and efficacy of autologous cell therapy in critical limb ischemia: A systematic review. Cellular Transplantation. 22 (3), 545-562 (2013).
- Hill, J. M., et al. Circulating endothelial progenitor cells, vascular function, and cardiovascular risk. New England Journal of Medicine. 348 (7), 593-600 (2003).
- Schmidt-Lucke, C., et al. Reduced number of circulating endothelial progenitor cells predicts future cardiovascular events: proof of concept for the clinical importance of endogenous vascular repair. Circulation. 111 (22), 2981-2987 (2005).
- Smadja, D. M. Early endothelial progenitor cells in bone marrow are a biomarker of cell therapy success in patients with critical limb ischemia. Cytotherapy. 14 (2), 232-239 (2012).
- Kremastinos, D. T., et al. Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty. International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).
- Truong, Q. A., Januzzi, J. L., Szymonifka, J., Thai, W. E., Wai, B., Lavender, Z. Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study. Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).
- Ding, N., et al. Fibrosis and inflammatory markers and long-term risk of peripheral artery disease: The ARIC study. Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 40 (9), 2322-2331 (2020).
- Potier, L., et al. Plasma copeptin and risk of lower-extremity amputation in Type 1 and Type 2 diabetes. Diabetes Care. 40 (12), 2290-2297 (2019).
- Schmidt-Lucke, C., et al. Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol. PLoS One. 5 (1), 13790 (2010).
- Marboeuf, P., et al. Inflammation triggers colony forming endothelial cell mobilization after angioplasty in chronic lower limb ischemia. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 6 (1), 195-197 (2008).
- Regueiro, A., et al. Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: Time-course after acute myocardial infarction and stroke. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).
